靶向CD‑19的嵌合抗原受体制造技术

本发明专利技术涉及针对CD19的嵌合抗原受体(CAR)，其包含SEQ ID NO:1‑SEQ ID NO:13中任一项的氨基酸序列。本发明专利技术还提供表达所述CAR的T细胞和破坏恶性B细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本专利申请要求于2014年6月2日提交的美国临时专利申请第62/006,313号的权益，将其通过引用并入。以电子方式提交的材料通过引用并入通过引用整体并入本文的是随本文同时提交的并且如下确定的计算机可读的核苷酸/氨基酸序列表：创建于2015年6月1日的一份名称为“720755_ST25.TXT”的58,356个字节的ASCII(Text)文件。专利技术背景B细胞恶性肿瘤(如淋巴瘤和白血病)发生于B细胞分化和活化的调节被破坏时。成熟B细胞的恶性肿瘤包括滤泡型淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤以及慢性淋巴细胞白血病(Shaffer等，NatureReviewsImmunology,2:920-933(2002))。诸如化疗、治疗性单克隆抗体(例如利妥昔单抗(RITUXANTM))和同种异体干细胞移植(alloHSCT)的标准疗法无法治愈恶性肿瘤(参见，例如Dreger等，Leukemia,21(1):12-17(2007)；Gribben,J.G.,Blood,109(11):4617-4626(2007)；和Armitage,J.O.,Blood,110(1):29-36(2007))。具体地，单克隆抗体作为单一药剂不是治愈性的，并且alloHSCT与高水平的死亡率和发病率相关(参见，例如Dreger等，见上文；Armitage等，见上文；以及McLaughlin等JournalofClinicalOncology,16(8):2825-2833(1998))。可对T细胞进行遗传修饰以表达嵌合抗原受体(CAR)，所述嵌合抗原受体是由抗原识别部分和T细胞活化结构域组成的融合蛋白(参见，例如Kershaw等，见上文；Eshhar等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90(2):720-724(1993)；以及Sadelain等Curr.Opin.Immunol.,21(2):215-223(2009))。对于B细胞谱系恶性肿瘤，已经开发出利用靶向CD19的CAR的过继性T细胞方法(参见，例如Jensen等，BiologyofBloodandMarrowTransplantation,16:1245-1256(2010)；Kochenderfer等，Blood,116(20):4099-4102(2010)；Porter等，TheNewEnglandJournalofMedicine,365(8):725-733(2011)；Savoldo等，JournalofClinicalInvestigation,121(5):1822-1826(2011)；Cooper等，Blood,101(4):1637-1644(2003)；Brentjens等，NatureMedicine,9(3):279-286(2003)；Kalos等，ScienceTranslationalMedicine,3(95):95ra73(2011)；Cheadle等，JournalofImmunology,184(4):1885-1896(2010)；Brentjens等，ClinicalCancerResearch,13(18Pt1):5426-5435(2007)；Kochenderfer等，Blood,116(19):3875-3886(2010)；Brentjens等，Blood,118(18):4817-4828(2011)；以及Kochenderfer等，Blood,2011年12月8日(印刷前的电子出版物(2012))。B细胞抗原CD19已被选作CAR的靶标，因为其表达限于正常的和恶性B细胞(参见，例如Nadler等，JournalofImmunology,131(1):244-250(1983))。迄今为止报道的与抗CD19CAR疗法相关的一个缺点是它们能够诱导与升高水平的血清细胞因子相关的显著毒性。人抗小鼠免疫应答的产生也是与当前的抗CD19CAR相关的潜在风险，所述抗CD19CAR包含鼠序列(参见，例如Jensen等，见上文；Lamers等，Blood,117(1):72-82(2011)；和Maus等，CancerImmunolRes,2:112-120(2014))。因此，仍需要在人体中具有降低的毒性和免疫原性的可用于治疗B细胞恶性肿瘤的方法中的组合物。本专利技术提供了此类组合物和方法。专利技术概述本专利技术提供针对CD19的分离的或纯化的嵌合抗原受体(CAR)，其包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12或SEQIDNO:13的氨基酸序列。此外，本专利技术提供编码前述CAR的分离的或纯化的核酸序列、包含此类核酸序列的载体、包含此类载体的分离的T细胞，以及通过在体内或离体使此类分离的T细胞与表达CD19的恶性B细胞群接触而破坏恶性B细胞的方法。本专利技术还提供分离的或纯化的CAR，其包含存在于SEQIDNO:4或SEQIDNO:9中的下述元件分离的或：(i)胞外间隔子，(i)来源于人CD8α分子的跨膜结构域，以及(iii)来源于人CD28分子、人CD27分子和人CD3ζ分子的胞内T细胞信号转导结构域。本专利技术提供包含存在于SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中的下述元件的分离的或纯化的CAR：(i)胞外间隔子，(i)来源于人CD8α分子的跨膜结构域，以及(iii)来源于人CD28分子、人CD27分子和FcεRI的γ链的胞内T细胞信号转导结构域。附图几个视图的简要描述图1为描述如实施例2所述的说明表达指定的CAR的T细胞的体外存活的实验结果的图。在培养第7天表达指定CAR的T细胞的百分比如下：FMC63-28Z，71％；FMC63-CD828Z，88％；以及FMC63-CD8BBZ，87％。图2A-2D为说明包含CD27胞内信号转导结构域的指定的全人CAR在T细胞表面的表达的FAC图的图像。该图对活的CD3+淋巴细胞进行门控。图3A和3B为说明与未转导的对照(图3B)相比，47G4-CD828ZCAR(图3A)在T细胞表面的表达的FAC图的图像。该图对活的CD3+淋巴细胞进行门控。图4A和4B为描述说明在CD19+T细胞系CD19-K562(图3A)和NALM6(图3B)中，表达FMC63-28Z、FMC63-CD828Z或FMC63-CD8BBZCAR的T细胞产生TNF的实验结果的图。进行标准TNFELISA以测量培养上清液中TNF的量(pg/mL)。将TNF水平相对于各培养物中表达各CAR的T细胞的分数标准化。结果显示了来自两个不同供体的标准化的TNF水平的平均值和平均值的标准误差。图5为描述说明在CD19+T细胞系CD19-K562和NALM6中，表达47G4-CD828ZCAR的T细胞产生IFNγ的实验结果的图。A549、TC71和CCRF-CEM是CD19阴性细胞系。图6A-6D是如通过CD1本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的或纯化的针对CD19的嵌合抗原受体(CAR)，其包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.02 US 62/006,3131.分离的或纯化的针对CD19的嵌合抗原受体(CAR)，其包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12或SEQIDNO:13的氨基酸序列。2.分离的或纯化的核酸序列，其编码权利要求1所述的CAR。3.载体，其包含权利要求2所述的分离的或纯化的核酸序列。4.分离的T细胞，其包含权利要求3所述的载体。5.破坏恶性B细胞的方法，所述方法包括使权利要求4所述的一种或多种分离的T细胞与表达CD19的恶性B细胞群接触，由此所述CAR与所述恶性B细胞上的CD19结合，并且所述恶性B细胞被破坏。6.如权利要求5所述的方法，其中所述恶性B细胞是淋巴瘤细胞。7.如权利要求5所述的方法，其中所述恶性B细胞是白血病细胞。8...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹姆斯·N·科亨德费尔，
申请(专利权)人：美国卫生和人力服务部，
类型：发明
国别省市：美国;US