一种T细胞抗原受体基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种T细胞抗原受体基因，用于制备嵌合抗原受体T细胞，使得后者展现出特定的食管癌相关功能活性，针对食管癌的治疗具有重要的潜在和实际价值，为食管癌的治疗提供一个新的技术方向。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种T细胞抗原受体基因，用于制备嵌合抗原受体T细胞，使得后者展现出特定的食管癌相关功能活性，针对食管癌的治疗具有重要的潜在和实际价值，为食管癌的治疗提供一个新的技术方向。【专利说明】一种T细胞抗原受体基因及其应用
本专利技术涉及一种基因工程
，尤其是一种食管癌相关T细胞抗原受体基因 及其应用。
技术介绍
癌症一直是困扰人类的巨大难题。我国每年新发肿瘤病例约为312万例，平均每天 8550人意味着每分钟就有6人就诊断为恶性肿瘤，这些数据都表明，癌症依然是威胁健康的 一大杀手。多年来，癌症治疗的方法主要是手术、化疗和放疗，对肿瘤患者的临床治疗有效 率仍旧很低，据统计，同一种抗肿瘤药物的有效率仅为25%。针对同一种肿瘤，用同样的药、 标准剂量的治疗方法，在不同病人身上所起的疗效及毒副作用却有很大的差异。造成这种 结果的主要原因在于，肿瘤是一种多病因、异质性的疾病。过去十年来，依赖于患者个体生 物标志物的肿瘤个性化治疗正在逐渐取代依据传统经验的治疗模式，并展现出优越的疗效 和广阔的前景。 免疫疗法是继手术、化疗、放疗和靶向疗法后出现的一种新型疗法，被称为治疗癌 症的"第五大疗法"。它是利用患者自身免疫系统的力量来抵抗癌症;癌症免疫疗法主要包 括过继性细胞治疗、免疫调节剂、肿瘤疫苗以及免疫结合点阻断治疗等。虽然有关免疫治疗 的研究早在30年前就已开展，最近两年《细胞》、《科学》、《自然》等国际顶级期刊刊出多项该 领域的突破研究成果，制药巨头也不断推出此类型的重镑疗法。2014年12月6号-9号在旧金 山举行的美国血液学会年会(ASH)上，癌症免疫疗法可谓是赚足了眼球，其中的CAR-T疗法 更是备受关注。 CART的概念是以色列ZeligEshhar博士上世纪80年代提出的，1989首次开发出嵌 合抗原受体T细胞。CART疗法即嵌合抗原受体T细胞疗法，绕过了过继性细胞治疗疗法启动 过继免疫应答这一难关，开创了跨越式发展的医学史新篇章。CART针对那不怎么靠谱的过 继免疫，引入全新的概念与方法，成功地诱导出抗癌的过继免疫应答。首先CART解决了抗原 的难题。既然在自然的状况下免疫系统找不到抗原，那就人为指定一种抗原。考察急性淋巴 B细胞白血病的CART疗法。淋巴B细胞表面有一个分化抗原CD19,无论是正常B细胞还是癌变 B细胞都有表达。选⑶19为靶抗原可以确保没有漏网之鱼。接下来，怎样确保T细胞能找到 ⑶19靶抗原?这也是CART的核心技术。自然的T细胞肯定不会将⑶19当作靶抗原的。CD19表 达于正常B细胞，T细胞对CD19耐受。CART将一个抗原受体嵌合到T细胞表面。这抗原受体本 质是一种抗体，对CD19有很高的亲和性。两者碰到就会结合，不离不弃。于是，用抗体蛋白联 接定位，T细胞就钉住了癌细胞。所以有一比喻，这抗原受体就像GPS，给T细胞导航，为找到 目标提供了保证。抗体又是怎样插入进T细胞的？这是通过基因转染技术实现的。这里转染 的并不是抗体本身而是编码抗体的基因，也就是说转染的是DNA。转染的DNA会编码抗体然 后表达于T细胞表面。 仅仅嵌合了抗体的T细胞疗法是第一代CART，解决了靶抗原或第一信号的问题。但 是临床效果差強人意，原因是第二信号即共刺激信号的缺失。没有共刺激信号T细胞仍然没 法激活，那样就算钉住了癌细胞也没有战斗力。产生共刺激信号需要T细胞和抗原提呈细胞 之间的互动。可是抗原提呈细胞也需要第一信号。这样势必还要将同样的抗体嵌合进抗原 提呈细胞如DC，过于复杂了。于是，针对共刺激信号又开发出第二代CART。第二代CART在靶 向⑶19的基础上，加入了⑶28或⑶137, T细胞上的共刺激受体。T细胞的信号域包括:⑶％(T 细胞抗原受体信号转导的组成成分)--CD28,或CD3G-一CD137。免疫应答的贯序可表述 为:CD 19激活抗体，抗体激活CD28(CD 137)，CD28 (CD 137 )激活CD3G。可以说，第二代CART同时 解决了第一信号和第二信号，不再依赖不怎么靠谱的肿瘤相关抗原，不再依赖抗原提呈细 胞，也不必担心MHC的低表达。第三代CART的特点是在⑶28之后又加入了共刺激分子蛋白 0X40或4-lBB(4-lBB就是⑶137)。这两种共刺激分子蛋白可进一步活化T细胞，延长生存期。 三代CART技术的演化反映了共刺激分子的重要作用。 急性淋巴B细胞白血病的CART疗法获得了惊人的90%-100%的响应率，长期有效，不 少病患完全缓解也就是临床痊愈了。更何况，这些入组CART的病患都是化疗失败、骨髓移植 后复发等就快走投无路重病患。CART将会成为人类历史上伟大里程碑:真正治愈癌症的方 法。 推广CART疗法的主要障碍来自脱靶效应。像CD19不是肿瘤的靶点，而是B细胞本身 的靶点。肿瘤细胞清除掉的同时B细胞也被清除掉了。这已不是杀敌一千，自伤八百。更不是 杀敌一千，自伤八十。而是宁可错杀一千，绝不放过一个。好在患者没有B细胞照样可以生 存，只要定期输入丙种免疫球蛋白即可。只要靶点不是百分百肿瘤特异性，就会有脱靶效 应，这是CART副作用的主要来源。据报道，一例以HER2为靶抗原针对结肠癌的第三代CART治 疗，病人输入CART十五分钟后出现呼吸窘迫，五天后死亡。检测到高水平的细胞因子并发现 CART细胞浸润肺组织。一个解释是靶抗原在正常肺组织中有表达。为了提高CART治疗安全 性和有效性，一个保守的剂量递增方法是在2天或以上分散T细胞输入剂量，不断监测毒性 迹象，阻止可能诱发大规模反应的进一步T细胞输入。用单克隆抗体封闭靶抗原来缓解脱靶 反应也是必要时的一种选择。最近还提出了引入自杀基因的方案，必要时立即启动CART自 杀，目前在III期临床试验。CART疗法另一副作用是细胞因子风暴。据报道早期CART治疗时 60%的病患要住ICU。现在用剂量递增方法可大大减少细胞因子风暴的产生。 综上所述，嵌合抗原受体CAR能与革E抗原高亲和性结合而不受中枢耐受的影响，这 一特性使得CAR的免疫治疗能够克服以往免疫治疗的大部分缺陷。到目前为止大多数临床 CART引人注目的结果都来自治疗血液疾病，针对实体瘤的CART临床也开始起步。CART疗法 的风险在于抗原受体的非特异性造成的脱靶效应。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种T细胞抗原受体基因，为食管癌的治疗提供 一个新的技术方向。 为解决上述技术问题，本专利技术所采取的技术方案如下。 -种T细胞抗原受体基因，主要由如下五部分构成:⑶8-pre序列，EGFR-scFv序列， ⑶8铰链+跨膜序列，4-1BB或⑶137序列，⑶沉序列。具体的，本专利技术的T细胞抗原受体基因具有SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列。进一步的，本专利技术还包括含有上述基因的重组载体。 进一步的，本专利技术还包括含有上述基因的转化体。 进一步的，本专利技术还包括含有上述基因的T细胞。 进一步的，本专利技术还包括由上述基因经转录表达形成的抗原受体。 进一步的，本专利技术还包括嵌合有上述抗原受体的T细胞。 进一步的，本专利技术还包括上述的T细胞抗原受体基因在制备抗食管癌药物中的应 用。 进一步的，本专利技术还包括上述的抗原受体在制备抗食管癌药本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种T细胞抗原受体基因，其特征在于：该基因主要由如下五部分构成：CD8‑pre序列，EGFR‑scFv序列，CD8铰链+跨膜序列，4‑1BB或CD137序列，CD3ζ序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：汪治宇，
申请(专利权)人：汪治宇，
类型：发明
国别省市：河北;13