一种重组蛛丝蛋白的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种重组蛛丝蛋白的制备方法，以大腹园蛛次壶腹腺丝的全长编码基因和梨状腺丝完整重复区为模板，采用融合PCR技术进行拼接，并与pET28a载体连接，构建重组质量，转入BL21中进行表达，使用变性纯化手段，最终获得重组蛛丝蛋白溶液，并冻干保存。本发明专利技术反应条件温和，成本低廉，工艺简单，易于操作；制备出的重组蛛丝蛋白，具有良好的生物相容性，并且经称量后，表达产量较高，可以预见，本发明专利技术制备的重组蛛丝蛋白具有产业化实施的前景，是一种潜在的蛋白纤维材料。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种重组蛛丝蛋白的制备方法，包括：(1)以大腹园蛛次壶腹腺丝MiSp的全长编码基因为模板，然后通过PCR扩增得到次壶腹腺丝MiSp的NT端基因片段MiSp‑NT，然后以梨状腺丝PySp完整重复区Rp的编码基因作为模板，通过PCR扩增获得一个完整重复区的基因片段PySp‑Rp；(2)将步骤(1)中两段基因片段MiSp‑NT、PySp‑Rp通过PCR技术得到完整基因片段MiSpNT‑PySpRp；(3)将上述完整基因片段MiSpNT‑PySpRp、pET28a质粒分别进行双酶切，然后进行纯化回收后混合，再加入T4连接酶反应，得到连接产物；(4)将上述连接产物转入DH5α感受态细胞中进行转化，37℃过夜培养后，挑取单克隆进行双酶切检查，将酶切正确的重组质粒Pet28a‑MiSpNT‑PySpRp，转入BL21感受态细胞中，37℃过夜培养后，挑取重组质粒单克隆接入LB培养基中，37℃过夜培养后，再转接入LB培养基中培养，然后加入IPTG诱导培养，收集菌体；(5)将上述菌体重悬于裂解缓冲液中，高压破菌后，离心，收集沉淀，纯化、冻干，得到重组蛛丝蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴忠笏，孟清，
申请(专利权)人：东华大学，
类型：发明
国别省市：上海;31