一种文蛤降血压肽的制备方法及应用技术

本发明专利技术提供一种文蛤降血压肽的制备方法及应用，步骤如下：预处理：将文蛤去壳取肉放入去离子水浸泡，捞出沥干，匀浆，加入蒸馏水和盐酸溶液调节pH；酶解：加文蛤肉1.1~1.5%重量份的中性蛋白酶进行酶解，加入文蛤肉0.15~0.3%重量份的复合酶，得文蛤肉酶解液；凝胶层析：将文蛤肉酶解液进行酶灭活，离心，取上清液，加入文蛤肉1~3%重量份析出剂，静置，超滤，凝胶层析，得文蛤降血压肽浓缩液；冻干保存。本发明专利技术制备工艺简单，预处理时间短，酶解液中降血压肽含量高，提高降血压肽含量和提取率，提取到的降血压肽在具有降血压功效的药物和食品中应用。

Preparation and application of a clam peptide

The preparation method and the application, the invention provides a clam antihypertensive peptide comprises the following steps: preprocessing: clam peeled meat soaked in deionized water, remove and drain, homogenate, adding distilled water and hydrochloric acid solution to regulate the pH enzyme; Gavin: clam meat 1.1~1.5% weight portions of neutral proteinase to enzymolyze, adding compound clam meat 0.15~0.3% weight portions, to clam meat hydrolysate; gel chromatography: clam meat enzymolysis liquid enzyme inactivation, centrifugation, the supernatant was added, the clam meat 1~3% weight portions of precipitation agent, static, ultrafiltration, gel chromatography, the clam peptide concentrate; lyophilization. The invention has the advantages of simple preparation process, the pretreatment time is short, the hydrolysate of antihypertensive peptide content, improve antihypertensive peptide content and extraction rate, application of antihypertensive peptides extracted in a blood pressure lowering effect of drugs and food.

【技术实现步骤摘要】
一种文蛤降血压肽的制备方法及应用
本专利技术属于生物技术及功能保健领域，具体涉及一种文蛤降血压肽的制备方法及应用。
技术介绍
高血压是一种常见的心血管疾病，它不仅患病率高，而且常引起严重的心、脑、肾等其他疾病，是脑卒中、冠心病、心力衰竭和肾脏疾病主要的危险因素。目前化学合成的降压药物，如赖诺普利(Lisinopril)，培哚普利(Perindopril)，虽然治疗高血压的效果非常明显，但是长期服用易引起皮疹、蛋白尿等不良反应。降血压肽，又称为血管紧张素转化酶(AngioensinIConvertingEnzyme，简称ACE)抑制肽，是从食物蛋白中分离出的一类具有显著降低血压功效的多肽短链物质。从来源上，可分为乳蛋白(包括酪蛋白、乳清蛋白)、发酵食品、动物蛋白、植物蛋白以及天然ACE抑制肽。这些来源于食品的降血压肽通常由蛋白酶在温和条件下水解蛋白质而获得，食用安全性高，其共同突出优点是只对高血压患者起到降压作用，对血压正常者无降压作用，因而不会有降压过度现象发生。除降压功能，它们往往具有免疫促进、抗凝血、易消化吸收和抗肿瘤等功能。现有技术提供多种从生物中提取降血压肽的方法及应用，例如，中国专利技术专利文献一种沙丁鱼降血压肽及其制备方法与应用授权公告号CN104031967B该专利技术属于食品生物技术及功能保健领域，公开一种沙丁鱼降血压肽及其制备方法与应用。所述方法主要技术步骤如下：沙丁鱼预处理成均浆后，先加入木瓜蛋白酶进行酶解，再加入碱性蛋白酶进行酶解；酶解完成后灭酶，并对灭酶后的酶解液进行离心；取离心后的上清液，利用超滤、凝胶层析的方法，对粗制品进行分离纯化；对分离纯化后的高效组分进行冷冻干燥，得到沙丁鱼降血压肽。沙丁鱼产量高、价格低廉，因此以沙丁鱼作为原料制备降血压肽，能充分提高沙丁鱼的综合利用价值，并且通过酶解获得的沙丁鱼降血压肽，不存在安全性问题，没有化学降血压类药物的副作用，降压效果理想。现有技术通过酶解获得沙丁鱼降血压肽，没有化学降血压药物的副作用而且提高了沙丁鱼的综合利用价值，但预处理时间过长，进行了二步酶解，取得上清液后未作提高降血压肽析出的步骤，酶解效果和提取效果有待提升，获得的降血压肽含量有待提高。
技术实现思路
本专利技术针对上述技术问题提供一种预处理时间短，酶解液中降血压肽含量高，提高降血压肽提取率的一种文蛤降血压肽的制备方法及应用。本专利技术针对上述技术问题所采取的方案为：一种文蛤降血压肽的制备方法，制备步骤如下：1）预处理：将文蛤去壳取肉放入去离子水浸泡8~12h，捞出沥干，匀浆，加入文蛤肉体积的3~6倍蒸馏水和盐酸溶液调节pH至6.5~8.5；通过去离子水浸泡将文蛤中的杂质、细菌及盐分清除，采用的去离子水可缩短浸泡时间进而缩短提取时间，而且取得很好的浸泡效果，加入的蒸馏水配合盐酸溶液快速调节文蛤肉的pH至指定范围，为酶解作准备，通过制备的去离子水和盐酸溶液明显的缩短预处理时间，而且预处理效果优异。2）酶解：加入文蛤肉1.1~1.5%重量份的中性蛋白酶在40~50℃条件下酶解1~2h，加入文蛤肉0.15~0.3%重量份的复合酶在40~50℃条件下酶解1~3h，得文蛤肉酶解液；常规的一次酶解受限于加入酶的专一作用，降血压肽的得率不太理想，采用两次酶解及复合酶的方式可显著提高降血压肽的得率，还可以保证文蛤肉中其他的营养成分不损失，酶解的时间缩短但效果显著提升，还节省了酶的用量，可有效的节约成本。3）凝胶层析：将文蛤肉酶解液进行酶灭活，酶灭活温度为90~95℃，时间为5~10min，采用离心机进行离心，离心转速3000~5000r/min，离心时间5~15min，取上清液，加入文蛤肉1~3%重量份析出剂，静置，采用超滤膜对加入析出剂后静置的上清液进行分离纯化，超滤膜为截留分子量为3000~10000Da的超滤膜，凝胶层析，得文蛤降血压肽浓缩液；将酶灭活使蛋白质和降血压肽聚集沉淀，为离心作准备，离心后取得的上清液中加入析出剂，在上清液中可能存在部分降血压肽未被提取出来，使用析出剂将这部分降血压肽充分提取出来，提高降血压肽的提取率，再采用超滤和凝胶层析技术获得高纯度的降血压肽，而且不需要加任何化学试剂和不会引起温度、pH的变化，因而不会影响降血压肽的纯度，可防止降血压肽失活、自溶等问题。4）冻干保存。采用的冻干保存是一种使降血压肽在低温低压下脱水的干燥工艺，与其他干燥方法相比，具有降血压肽不变质、易长期储存、脱水彻底、挥发成分损失少等优点。步骤2中复合酶由以下成分及重量份组成：木瓜蛋白酶10~15份、纤维素酶3~8份、果胶酶1~4份、α1-抗糜蛋白酶1~2份和腺苷酸环化酶0.3~1份和γ-谷氨酰转移酶0.5~0.8份。可显著提高降血压肽的得率，还可以保证文蛤肉中其他的营养成分不损失，酶解的时间缩短但效果显著提升，还节省了酶的用量，可有效的节约成本。步骤1中去离子水中含有冰醋酸0.9~1.1份、乙醇0.9~1.1份、硫酸化油1.8~2.2份、4-氟乙酰苯胺1~2份和硝酸正丙酯0.3~0.7份。通过去离子水浸泡将文蛤中的杂质、细菌及盐分清除，采用的去离子水可缩短浸泡时间进而缩短提取时间，而且取得很好的浸泡效果。步骤2中盐酸溶液添加有氢氧化钠2~5重量份和3-乙氧基-4-羟基苯甲醛1~3重量份。快速调节文蛤肉的pH至指定范围，为酶解作准备，节约提取时间。步骤3中析出剂由以下成分及重量份组成：硫酸铵3~5份、氯化钠1~3份、硝酸钾0.5~1份、季戊四醇0.2~0.4份、二氯异氰尿酸钠0.05~0.1份和次磷酸镁0.7~0.8份。在上清液中可能存在部分降血压肽未被提取出来，使用析出剂将这部分降血压肽充分提取出来，且上述组合物起到了一定的活性保持效果，间接提高了降血压肽的提取率。通过从文蛤中提取降血压肽的方法得到的文蛤降血压肽在制备具有降血压功效的药物和食品中应用。与现有技术相比，本法的优点在于：采用的去离子水可缩短浸泡时间进而缩短提取时间，而且取得很好的浸泡效果，加入的蒸馏水配合盐酸溶液快速调节文蛤肉的pH至指定范围，通过制备的去离子水和盐酸溶液明显的缩短预处理时间，而且预处理效果优异。采用两次酶解及复合酶的方式可显著提高降血压肽的得率，还可以保证文蛤肉中其他的营养成分不损失，酶解的时间缩短但效果显著提升，还节省了酶的用量，可有效的节约成本。离心后取得的上清液中加入析出剂，在上清液中可能存在部分降血压肽未被提取出来，使用析出剂将这部分降血压肽充分提取出来，提高降血压肽的提取率，再采用超滤和凝胶层析技术获得高纯度的降血压肽，而且不需要加任何化学试剂和不会引起温度、pH的变化，因而不会影响降血压肽的纯度，可防止降血压肽失活、自溶等问题。本专利技术制备工艺简单，预处理时间短，酶解液中降血压肽含量高，提高降血压肽含量和提取率，提取到的降血压肽在具有降血压功效的药物和食品中应用，降血压肽食用安全性高，对高血压患者起到降压作用，对血压正常者无降压作用，不会有降压过渡现象。具体实施例以下结合具体实施例作进一步详细描述：实施例1：一种文蛤降血压肽的制备方法，制备步骤如下：1）预处理：将文蛤去壳取肉放入去离子水浸泡8~12h，捞出沥干，匀浆，加入文蛤肉体积的3~6倍蒸馏水和盐酸溶液调节pH至6.5~8.5；通过去离子水浸泡将本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种文蛤降血压肽的制备方法，其特征在于以下步骤：1）预处理：将文蛤去壳取肉放入去离子水浸泡，捞出沥干，匀浆，加入蒸馏水和盐酸溶液调节pH；2）酶解：加入文蛤肉1.1~1.5%重量份的中性蛋白酶进行酶解，加入文蛤肉0.15~0.3%重量份的复合酶，得文蛤肉酶解液；3）凝胶层析：将文蛤肉酶解液进行酶灭活，离心，取上清液，加入文蛤肉1~3%重量份析出剂，静置，超滤，凝胶层析，得文蛤降血压肽浓缩液；4）冻干保存。

【技术特征摘要】
1.一种文蛤降血压肽的制备方法，其特征在于以下步骤：1）预处理：将文蛤去壳取肉放入去离子水浸泡，捞出沥干，匀浆，加入蒸馏水和盐酸溶液调节pH；2）酶解：加入文蛤肉1.1~1.5%重量份的中性蛋白酶进行酶解，加入文蛤肉0.15~0.3%重量份的复合酶，得文蛤肉酶解液；3）凝胶层析：将文蛤肉酶解液进行酶灭活，离心，取上清液，加入文蛤肉1~3%重量份析出剂，静置，超滤，凝胶层析，得文蛤降血压肽浓缩液；4）冻干保存。2.根据权利要求1所述的一种文蛤降血压肽的制备方法，其特征在于：所述步骤1中文蛤肉在去离子水中浸泡8~12h，加入文蛤肉体积的3~6倍蒸馏水，加入盐酸溶液调节pH至6.5~8.5。3.根据权利要求1所述的一种文蛤降血压肽的制备方法，其特征在于：所述步骤2中加入中性蛋白酶在40~50℃条件下酶解1~2h，加入复合酶在40~50℃条件下酶解1~3h。4.根据权利要求1所述的一种文蛤降血压肽的制备方法，其特征在于：所述步骤2中复合酶由以下成分及重量份组成：木瓜蛋白酶10~15份、纤维素酶3~8份、果胶酶1~4份、α1-抗糜蛋白酶1~2份和腺苷酸环化酶0.3~1份和γ-谷氨酰转移酶0.5~0.8份。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：余方苗，李维，黄芳芳，唐云平，杨最素，丁国芳，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33