一种降血压肽微球的制备方法，涉及降血压肽。1)将VLPVP溶解在SAL溶液中作为水相，油相为液体石蜡和石油醚混合物，所述混合物中含乳化剂，将烘干的SPG膜放入油相中超声，安装到SPG膜乳化器中，在氮气压力下水相通过SPG膜进入油相中，得SAL乳状液；2)将CaCl2溶液与步骤1)中的油相混合，超声后得乳状液，再与步骤1)所得SAL乳状液混合，即得乳白色乳状液，离心后，除去上清液，离心清洗，再除去上清液后，得到海藻酸钠-钙微球，抽滤清洗，除去微球表面的有机溶剂，然后将微球分散到O-CMC溶液中，得到负载VLPVP的O-CMC-SAL微球，再抽滤，除去表面残留的O-CMC，干燥后即得降血压肽微球。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及降血压肽，尤其是涉及。
技术介绍
血管紧张素转化酶抑制肽（ACEIP)又称为降血压肽，是由蛋白酶水解动植物蛋白 质而获得的一类具有血管紧张素转化酶（ACE)抑制活性和降血压作用的小肽。与现有的 ACE抑制剂类降压药物如卡托普利等相比，ACEIP效果温和、无副作用、对正常血压无影响， 而且可通过日常饮食摄入，因此是一类理想的天然降血压物质，已受到国内外学者的广泛 关注。VLPVP是一种基因工程方法制备的降血压肽，体外实验表明，该多肽对ACE都有很强 的抑制作用，其IC5。分别为1.8ymol/L。通过研究VLPVP对自发性高血压大鼠（SHR)的降 压效果，结果表明，该降血压肽具有良好的体内降血压效果，但对血压正常的大鼠无降血压 作用，因此具有良好的实际应用前景。然而，大量研究表明，当ACEIP以口服形式摄入时，极 易被胃肠道蛋白酶降解进而失去体内降压活性，因此ACEIP的体内稳定性和降压活性已经 成为一个制约ACEIP产业化的关键问题。 水凝胶体系也是目前提高蛋白质以及多肽类药物体内稳定性以及实现肠道靶向 释放的重要方法。水凝胶是一类具有亲水基团，能被水溶胀但不溶于水的具有三维网络结 构的聚合物，能够感知外界刺激的微小变化，如温度、pH值、离子强度、电场、磁场等，通过体 积的溶胀或收缩对刺激做出敏感性的相应。水凝胶的这一特点使它在生物医学领域、生物 酶的固定等方面有广泛的应用前景。目前在蛋白质和多肽靶向输送中应用得最多的是pH 敏感性水凝胶。壳聚糖-海藻酸钠水凝胶体系已被广泛用于蛋白质和多肽类药物的肠道靶 向释放。SPG膜乳化法主要用于制备尺寸均一的乳液、乳珠、微球、微胶囊等，可用于制备W/0、0/W、W/O/W、0/W/0不同乳液，实现乳液的尺寸均一性和可控性、微球表面功能的可控 性和稳定性、多孔微球结构的可控性和稳定性；实现均一乳液大规模制备的可行性；多孔 微球或缓释胶囊粒径的可控性等。SPG膜乳化法制备的微球，粒径范围为2~100ym，在 各个领域都有广泛应用，在生物工程领域可以作为活性物质的分离介质，在药学领域可以 作为控制药物释放的载体，在摄影领域可以作为固液态的调色剂等等。其中药学和食品是 膜乳化应用最广泛的领域，通过不同的制备方式将水溶性的抗癌药物包埋制备成微球或微 囊，提高生物利用率，均一的乳液还可以有效保持食品风味和良好口感，掩盖住个别食品的 刺激性气味等。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供。 本专利技术包括以下步骤： 1)将VLPVP溶解在SAL溶液中作为水相，油相为液体石蜡和石油醚混合物，所述混 合物中含乳化剂，将烘干的SPG膜放入油相中超声，安装到SPG膜乳化器中，在氮气压力下 水相通过SPG膜进入油相中，得SAL乳状液； 2)将CaCl2溶液与步骤1)中的油相混合，超声后得乳状液，再与步骤1)所得SAL 乳状液混合，即得乳白色乳状液，离心后，除去上清液，离心清洗，再除去上清液后，得到海 藻酸钠-钙微球，抽滤清洗，除去微球表面的有机溶剂，然后将微球分散到0-CMC溶液中，得 到负载VLPVP的0-CMC-SAL微球，再抽滤，除去表面残留的0-CMC，干燥后即得降血压肽微 球。 在步骤1)中，所述SAL溶液可采用体积百分比为1. 5%，pH为4. 2的SAL溶液； 所述VLPVP与SAL溶液的配比可为100mg: 50mL，其中，VLPVP以质量计算，SAL溶液以体 积计算；所述液体石蜡和石油醚的体积比可为7 : 5;所述乳化剂可采用P0-500乳化剂，所 述乳化剂的含量按质量百分比可为液体石蜡和石油醚混合物的4%;所述超声的时间可为 30min;所述SPG膜的孔径可为20ym;所制得的SAL乳状液为W/0型SAL乳状液，在SAL乳 状液中水相与油相的体积比可为1 : 10。 在步骤2)中，所述CaCl2溶液可采用体积百分比为2%，pH为6的CaCl2溶液；所 述CaCl2溶液与油相的体积比可为1 : 1;所述搅拌的条件可为300rmp下搅拌5h;所述离 心清洗可采用石油醚离心清洗2次，离心的条件可为SOOOrmp下离心5min，20°C;所述抽滤 清洗可采用去离子水抽滤清洗；所述0-CMC溶液的体积百分比浓度可为0. 5%;所述再抽滤 可采用去离子水抽滤；所述干燥可采用真空冷冻干燥24h。 本专利技术以海藻酸钠（sodiumalginate,SAL)和羧甲基壳聚糖（〇-carboxymethyl chitosan，0-CMC)为壁材，以CaC12为交联剂，采用SPG膜乳化法制备VLPVP微球，确定SPG 膜乳化法制备微球的最佳工艺，并检测了该微球在模拟胃肠液的释放效果。本专利技术利用SPG 膜乳化法得到的VLPVP微球具有良好的pH敏感性，而且粒径分布均匀，并且可以较好的保 持VLPVP的活性，因此在pH敏感性传输体系的构建中具有重要意义。【附图说明】 图1为VLPVP微球形态。 图2为VLPVP微球扫描电镜图。标尺为10ym。【具体实施方式】 以下实施例将结合附图对本专利技术作进一步的说明。 1.降血压肽微球的制备 在室温（20°C)下，准确称取一定量的VLPVP，使其充分溶解在1. 5% (v/w)pH4. 2 的SAL溶液中作为水相，使VLPVP的最佳投药量为100mg/50mLSAL溶液；油相为液体石蜡 和石油醚7 : 5(v/v)混合物，其中含4% (w/w)的P0-500乳化剂。将烘干的SPG膜放入油 相中超声30min，安装到SPG膜乳化器中。在氮气压力下50mL水相通过孔径20ym的SPG 膜，进入到500mL油相中，形成W/0型SAL乳状液（水油体积比为1 : 10)。 将50mL2% (v/w)的pH= 6的CaCl2溶液与50mL上述的油相混合，搅拌超声后 形成均一乳状液，再与SAL乳状液混合，为了保证形成均一的水凝胶微球，混合过程一定要 缓慢进行。混合后300rmp搅拌5h，形成均一的乳白色乳状液，倒入离心管中离心后，除去上 清液，再用石油醚离心清洗2次（SOOOrmp，5min，20°C)，除去上清液后，得到海藻酸钠-钙 微球，用去离子水抽滤清洗，除去微球表面的有机溶剂；然后将微球分散到50mL0.5% (v/w)的0-CMC溶液中，300rmp搅拌lh，制备得到负载VLPVP的0-CMC-SAL微球，得到的微球用 去离子水抽滤，除去表面残留的0-CMC，真空冷冻干燥24h，得到VLPVP微球。 2.VLPVP微球包埋率的测定 2. 1VLPVP标准曲线的绘制 用高效液相色谱法绘制谷胱甘肽标准曲线，具体步骤如下：准确称取VLPVP标准 品适量，加入去离子水溶解成质量浓度为500mg/L的标准储备液，再按一定的比例稀释成 25yg/L、125yg/L、250yg/L、375yg/L、500yg/L和 625yg/L浓度的溶液，经 0? 22ym的 滤膜过滤后，进样测定。色谱条件为：Eclipse)(DB-C18反相色谱柱（4. 6X250mm，5iim)d^ 动相乙腈：水=17:83,其中水相中含有0.05%三氟乙酸（TFA)，超声脱气15min，进样流速 为1.OmL/min，柱温保持30°C，检测波长为199nm，进样量为20y本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种降血压肽微球的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)将VLPVP溶解在SAL溶液中作为水相，油相为液体石蜡和石油醚混合物，所述混合物中含乳化剂，将烘干的SPG膜放入油相中超声，安装到SPG膜乳化器中，在氮气压力下水相通过SPG膜进入油相中，得SAL乳状液；2)将CaCl2溶液与步骤1)中的油相混合，超声后得乳状液，再与步骤1)所得SAL乳状液混合，即得乳白色乳状液，离心后，除去上清液，离心清洗，再除去上清液后，得到海藻酸钠‑钙微球，抽滤清洗，除去微球表面的有机溶剂，然后将微球分散到O‑CMC溶液中，得到负载VLPVP的O‑CMC‑SAL微球，再抽滤，除去表面残留的O‑CMC，干燥后即得降血压肽微球。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨剑，郝鲁青，黄国清，肖军霞，
申请(专利权)人：深圳职业技术学院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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