【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽及其应用。
技术介绍
1、免疫系统作为机体抵御外界侵害的天然屏障，可识别并消灭病毒、细菌等病原体，防止严重的感染和疾病。营养不良、衰老和精神压力等都会导致机体免疫功能降低，从而导致各种疾病的发生。目前，有许多药物可用于调节人体的免疫功能，比如左旋咪唑、大环内酯类等。但多数化学合成类免疫调节药物对人体有毒副作用。近年来，安全、有效的食源性免疫调节剂逐渐映入大众眼帘。
2、鮟鱇鱼(lophius litulon)主要分布于北太平洋西部和中国沿海水域。研究表明，来自鮟鱇鱼加工副产物的生物活性肽显示出丰富的生物活性，如自由基清除活性、抗高血压能力和对慢性肾损伤的保护作用，然而关于来自鮟鱇鱼的免疫调节肽的报道较少。
技术实现思路
1、本专利技术课题组前期使用酶解和超滤技术从鮟鱇鱼籽中分离提取出小于1kda的活性肽并命名为mrp。通过巨噬细胞raw 264.7模型以及环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠模型验证了mrp在体内外都具有较好的免疫调节活性，然而mrp中何种明确氨基酸序列的小肽在发挥免疫调节作用还未进行深入研究。因此，本文通过lc-ms/ms及免疫调节肽的特征结构等筛选出mrp中可能具有免疫调节活性的肽段、验证其体外免疫活性，并利用分子对接技术初步阐明其发挥免疫调节活性的作用机制，从而为开发鮟鱇鱼加工副产物的高附加值利用提供科学依据。
2、一方面，本专利技术提供了一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽，其氨基酸序列为：phe-arg-p
3、
4、一方面，本专利技术提供了一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽的制备方法，其包括以下步骤：
5、1)预处理：将鱼籽匀浆，用95％乙醇脱脂，用纯水洗净至无味，将纯水加入已预处理的鱼籽匀浆制备反应体系；
6、2)酶解：在反应体系中加入胃蛋白酶，调节ph值至2.0，在37℃水浴锅中水解反应4h；然后，将整个酶解体系的ph调节到8.0使胃蛋白酶失活，加入胰蛋白酶继续在37℃水浴锅中反应4h，随后，将溶液加热以使酶失活并冷却，调节ph值为7.0，离心，收集上清液并用0.22μm滤膜抽滤，最后，用1kda膜进行超滤，收集超滤液(<1kda)并冷冻干燥，命名为mrp；
7、3)mrp样品通过进行高效液相色谱分离纯化，鉴定后得phe-arg-phe。
8、作为优选，所述步骤2)中胰蛋白酶的添加量为1500u/g。
9、作为优选，所述步骤2)中胃蛋白酶的添加量为1500u/g。
10、作为优选，所述步骤3)中的高效液相色谱分离纯化的步骤如下：通过eclipseplus c18分析柱(100mm×4.6mm，5μm)进行梯度洗脱。其中流动相a为0.1％甲酸，流动相b为乙腈，流速为0.5ml/min。梯度洗脱程序如下：0-1min，2％b；1-18min，2％-30％b；18-22min，30-80％b；22-28min，80％b；28-35min，2％b。在正离子检测模式下工作，喷雾电压为3.0kv，扫描范围200-1600m/z。
11、另一方面，本专利技术提供了一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽用于制备免疫调节相关疾病的药物中的用途。
12、本专利技术phe-arg-phe结构简单，具有安全无毒副作用、可显著增强raw 264.7细胞的吞噬能力，可增强raw 264.7细胞中no的含量，具有很强的免疫调节功能。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽，其特征在于，所述氨基酸序列为：Phe-Arg-Phe，其结构式如式I所示，ESI-MS测定其分子量为235.1Da。
2.如权利要求1所述一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中胰蛋白酶的添加量为1500U/g。
4.根据权利要求2所述一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中胃蛋白酶的添加量为1500U/g。
5.根据权利要求2所述一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中的高效液相色谱分离纯化的步骤如下：通过Eclipse Plus C18分析柱(100mm×4.6mm，5μm)进行梯度洗脱。其中流动相A为0.1％甲酸，流动相B为乙腈，流速为0.5mL/min。梯度洗脱程序如下：0-1min，2％B；1-18min，2％-30％B；18-22min，30-80％B；22-28min，80％B；28-35min，2％B。在正离子检测模式下工作，喷雾电压为3.0kV，
6.如权利要求1所述一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽在用于制备免疫调节相关疾病的药物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽，其特征在于，所述氨基酸序列为：phe-arg-phe，其结构式如式i所示，esi-ms测定其分子量为235.1da。
2.如权利要求1所述一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中胰蛋白酶的添加量为1500u/g。
4.根据权利要求2所述一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中胃蛋白酶的添加量为1500u/g。
5.根据权利要求2所述一种鮟鱇鱼籽免疫调节肽的制备...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐叶竹，唐云平，赵瑞，单婧晶，赵玉娣，王瑞敏，向旺，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。