多价和多特异性结合DR5的融合蛋白制造技术

本公开大体上涉及特异性接合TNF受体超家族(TNFRSF)的成员死亡受体5(DR5)的分子。更具体地说，本公开涉及至少结合DR5的多价和多特异性分子。

Multivalent and multispecific binding DR5 fusion protein

The present disclosure generally relates to a molecule that specifically joins the member of the TNF receptor superfamily (TNFRSF), a member of the death receptor 5 (DR5). More specifically, the present invention relates to a combination of at least DR5 multivalent and multispecific molecules.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多价和多特异性结合DR5的融合蛋白相关申请本申请要求于2015年7月16日提交的美国临时申请号62/193,309的权益，该申请的内容以全文引用的方式并入本文中。专利
本公开大体上涉及特异性接合TNF受体超家族(TNFRSF)成员死亡受体5(DR5)的分子。更具体地说说说，本公开涉及至少结合DR5的多价和多特异性分子。专利技术背景肿瘤坏死因子受体超家族由若干结构相关细胞表面受体组成。由多聚体配体活化为这些受体中的许多的共同特征。如果被适当活化，那么TNFRSF的许多成员在许多病理学中具有治疗效用。重要的是适当地使此受体家族激动通常需要更高级别的群集，而常规的二价抗体对此并不理想。因此，对TNFRSF的更有效激动剂分子存在治疗需求。专利技术概要本公开提供多价融合多肽，所述多价融合多肽至少结合死亡受体5(DR5，也称为TRAIL受体2(TRAILR2)，或肿瘤坏死因子受体超家族成员10B(TNFRSF10B))。这些结合DR5的融合多肽在本文中也被称为DR5靶向分子。DR5为TNF受体超家族(TNFRSF)的成员和TNF-受体超家族的细胞表面受体，其结合TNF-相关凋亡诱导配体(TRAIL)。TRAIL进化成通过选择性消灭健康细胞群体中不需要的、感染的以及恶性的细胞而在哺乳动物发育和宿主防御中发挥关键作用。在结合TNF受体家族成员DR4或DR5时，TRAIL经由半胱天冬酶依赖性凋亡诱导细胞死亡。DR5似乎是肿瘤细胞上促成所观测到的TRAIL途径肿瘤倾向活性的主要受体。DR5由天然配体TRAIL活化，所述天然配体TRAIL使三个DR5受体紧密接近，由此活化细胞内半胱天冬酶-8，并且启动诸如半胱天冬酶-9和半胱天冬酶-3等其他死亡诱导性半胱天冬酶的活化。因此，此细胞死亡途径的启动需要DR5受体群集以实现有效细胞死亡。已证明如由抗体对DR4、DR5、GITR以及OX40的活性必需Fc-γ受体(FcγR)所证实，靶向TNF受体超家族(TNFRSF)成员的常规抗体需要外源性交联以获得足够的激动剂活性(Ichikawa等人2001alNat.Med.7,954–960；Li等人2008DrugDev.Res.69,69–82；Pukac等人2005Br.J.Cancer92,1430–1441；Yanda等人2008Ann.Oncol.19,1060–1067；Yang等人2007CancerLett.251:146–157；Bulliard等人2013JEM210(9):1685；Bulliard等人2014ImmunolandCellBiol92:475-480)。除经由FcγR交联之外，已证实其他外源药剂，包括添加寡聚配体或抗体结合实体(例如蛋白A和二次抗体)也增强抗TNFRSF抗体群集和下游信号传导。举例来说，CD137抗体PF-05082566的体外激动剂活性需要经由二次抗体交联(Fisher等人CancerImmunolImmunother201261:1721–1733)。这些发现表明需要超过二聚体的TNFRSF群集。临床上利用TRAIL途径进行癌症治疗的努力依赖于天然配体TRAIL的重组型式和对DR5具特异性的抗体。在临床前体外实验中抗体激动剂靶向DR5需要交联剂。举例来说，添加DR5配体TRAIL增强抗DR5抗体AMG655的凋亡诱导能力(Graves等人2014CancerCell26:177-189)。常规抗体为二价的并且仅能够使两个DR5受体(每个FAB臂一个)群集。与TNFRSF的其他成员一致，两个DR5受体的群集不足以介导信号传导并活化体外细胞死亡途径。令人惊讶地，在人类癌症的临床前小鼠模型中体内施用DR5靶向抗体在多种肿瘤类型中展示显著活性。此活性后来据证实依赖于小鼠FcγR受体。在人类中的临床研究未能重现在这些临床前小鼠模型中所见到的强烈反应。假设在人类中缺乏活性是归因于抗体交联不足。这可能是归因于免疫受损的小鼠和人类癌症患者之间的血清IgG、FcγR和或TRAIL浓度的差异。本公开提供靶向DR5的多价融合蛋白，所述多价融合蛋白能够有效地使介导直接细胞死亡的DR5信号传导激动。本公开的融合蛋白可为二价、三价、四价、五价或六价的。重要的是，本公开的融合蛋白能够独立于外源性交联剂而引发表达DR5的细胞的凋亡。在一些实施方案中，本公开的融合蛋白合并了结合DR5的结合域(DR5BD)。在优选实施方案中，结合DR5的DR5BD不结合DR4、诱饵R1、诱饵R2、骨桥蛋白或任何其他TNFRSF成员。在优选实施方案中，结合DR5的DR5BD结合人类和食蟹猴DR5。在一些实施方案中，结合DR5的DR5BD阻断DR5与其配体TRAIL的相互作用。在其他实施方案中，结合DR5的DR5BD不阻断DR5与其配体TRAIL的相互作用。在一些实施方案中，本公开的融合蛋白合并了多个结合DR5的DR5BD，所述多个结合DR5的DR5BD识别DR5上的不同表位。在一些实施方案中，本公开的融合蛋白合并了多个结合DR5的DR5BD，其中一些DR5BD阻断DR5-TRAIL相互作用，而其他不阻断DR5-TRAIL相互作用。在优选实施方案中，本公开的DR5靶向融合蛋白诱导肿瘤细胞的直接细胞死亡。本公开的DR5靶向融合蛋白在治疗本质上为血液学和实体肿瘤的肿瘤方面有效用。本公开提供多价结合DR5的融合蛋白，所述多价结合DR5的融合蛋白包含2个或更多个DR5结合域(DR5BD)。在一些实施方案中，本公开的融合蛋白在治疗赘瘤方面有效用。在一些实施方案中，本公开的融合蛋白结合肿瘤细胞上所表达的DR5。在一些实施方案中，融合蛋白含有两个或更多个不同的DR5BD，其中每一个DR5BD结合DR5。在一些实施方案中，融合蛋白含有结合DR5的DR5BD的多个拷贝。举例来说，在一些实施方案中，融合蛋白含有结合DR5的DR5BD的至少两个拷贝。在一些实施方案中，融合蛋白含有结合DR5的DR5BD的至少三个拷贝。在一些实施方案中，融合蛋白含有结合DR5的DR5BD的至少四个拷贝。在一些实施方案中，融合蛋白含有结合DR5的DR5BD的至少五个拷贝。在一些实施方案中，融合蛋白含有结合DR5的DR5BD的至少六个拷贝。在一些实施方案中，融合蛋白含有结合DR5的DR5BD的六个或更多个拷贝。本公开的多价结合DR5的融合蛋白能够诱导受损、转化、病毒感染或赘生性细胞的直接细胞死亡，而不需要外源交联剂。另外，本公开的结合DR5的融合蛋白不诱导正常未转化细胞、非病毒感染或非赘生性细胞的直接细胞死亡。重要的是，本公开的DR5BD和由其组成的融合蛋白使预先存在的抗体对存在于一些人类受试者中的单域抗体的识别减少或消除。TAS266为基于四价人源化DR5靶向纳米抗体的治疗剂，所述治疗剂与二价抗体相比表现出优异的凋亡诱导能力，而不需要由FcγR进行额外的交联。(Huet,H.A.等人,Multivalentnanobodiestargetingdeathreceptor5elicitsuperiortumorcellkillingthroughefficientcaspaseinduction.mAbs第6卷发行编号6,2014)。先前已预测约一半的健康人类受试者具有预本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离多肽，所述分离多肽至少结合死亡受体5(DR5)，并且包含多个DR5结合域(DR5BD)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.16 US 62/193,3091.一种分离多肽，所述分离多肽至少结合死亡受体5(DR5)，并且包含多个DR5结合域(DR5BD)。2.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述分离多肽为单特异性的。3.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述分离多肽为多特异性的。4.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述分离多肽为双特异性的。5.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述多肽包含结合第二抗原的至少一个第二结合域(BD2)。6.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD结合DR5上的相同表位。7.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD中的至少两个DR5BD结合DR5上的不同表位。8.如权利要求1、6或7中任一项所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD包含至少两个DR5BD。9.如权利要求1、6或7中任一项所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD包含至少四个DR5BD。10.如权利要求1、6或7中任一项所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD包含至少六个DR5BD。11.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD中的至少一个DR5BD包含选自由SEQIDNO:15-91组成的组的氨基酸序列。12.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD中的每一个DR5BD包含选自由SEQIDNO:15-91组成的组的氨基酸序列。13.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD中的每一个DR5BD包含选自由SEQIDNO:15-91组成的组的相同氨基酸序列。14.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD中的至少一个DR5BD包含：互补决定区1(CDR1)，所述互补决定区1包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:31、128、134、138、141、142、159、162、163、168、173、176、178、181以及188；互补决定区2(CDR2)，所述互补决定区2包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:28、129、131-133、135、137、139、143、160、164、166、167、169、171、172、174、177、179、182、184、185以及189；以及互补决定区3(CDR3)，所述互补决定区3包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:130、136、140、144-158、161、165、170、175、180、183、186、187以及190。15.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD中的每一个DR5BD包含：互补决定区1(CDR1)，所述互补决定区1包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:31、128、134、138、141、142、159、162、163、168、173、176、178、181以及188；互补决定区2(CDR2)，所述互补决定区2包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:28、129、131-133、135、137、139、143、160、164、166、167、169、171、172、174、177、179、182、184、185以及189；以及互补决定区3(CDR3)，所述互补决定区3包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:130、136、140、144-158、161、165、170、175、180、183、186、187以及190。16.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD中的每一个DR5BD包含相同氨基酸序列，所述相同氨基酸序列包含：互补决定区1(CDR1)，所述互补决定区1包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:31、128、134、138、141、142、159、162、163、168、173、176、178、181以及188；互补决定区2(CDR2)，所述互补决定区2包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:28、129、131-133、135、137、139、143、160、164、166、167、169、171、172、174、177、179、182、184、185以及189；以及互补决定区3(CDR3)，所述互补决定区3包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:130、136、140、144-158、161、165、170、175、180、183、186、187以及190。17.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD中的每一个DR5BD经由接头多肽可操作地连接。18.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述分离多肽包含结合第二靶标的至少一个结合域。19.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述分离多肽包含免疫球蛋白Fc区多肽。20.如权利要求19所述的分离多肽，其中所述免疫球蛋白为IgG1Fc区多肽、IgG2Fc区多肽、IgG3Fc区多肽或IgG1Fc区多肽。21.如权利要求19所述的分离多肽，其中所述免疫球蛋白Fc区多肽包含选自由SEQIDNO:1-5或127组成的组的氨基酸序列。22.如权利要求1至21中任一项所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD中的至少一个DR5BD包含抗体或其抗原结合片段。23.如权利要求1至21中任一项所述的分离多肽，其中所述多个DR5BD中的每一个DR5BD包含抗体或其抗原结合片段。24.如权利要求22或权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·C·蒂默，K·S·琼斯，A·S·拉扎伊，A·侯赛因，K·M·威利斯，Q·德沃拉克斯，B·P·艾克尔曼，
申请(专利权)人：印希比公司，
类型：发明
国别省市：美国,US