特异性结合蛋白及其用途制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合成员，特别是抗体及其片段，其与扩增的表皮生长因子受体（EGFR）和EGFR的de2-7 EGFR截短结合。特别地，由特异性结合成员特别是抗体及其片段识别的表位在异常翻译后修饰后是增强的或明显的。这些特异性结合成员在癌症诊断和治疗中是有用的。本发明专利技术的结合成员还可以与化学治疗或抗癌剂和/或与其他抗体或其片段组合在治疗中使用。

【技术实现步骤摘要】
特异性结合蛋白及其用途本申请是国际申请日为2010年2月17日、国际申请号为PCT/US2010/024407、进入国家阶段的申请号为201080017279.4、专利技术名称为“特异性结合蛋白及其用途”的PCT申请的分案申请。相关申请数据本国际PCT专利申请要求于2009年2月18日提交的美国专利申请号12/388,504的优先权，其公开内容在此整体引入作为参考。本国际PCT专利申请还整体引入下述各自的公开内容作为参考：于2002年5月13日提交的美国专利申请号10/145,598(现在的美国专利号7,589,180，于2009年9月15日授权)；于2001年5月11日提交的美国临时专利申请号60/290,410；于2001年9月28日提交的美国临时专利申请号60/326,019；于2001年12月21日提交的美国临时专利申请号60/342,258；于2002年5月13日提交的国际PCT专利申请号PCT/US02/15185(于2002年11月21日作为WO02/092771公开)；于2008年8月14日提交的国际PCT专利申请号PCT/US2008/009771(于2009年2月19日作为WO2009/023265公开)；和于2007年8月14日提交的美国临时专利申请号60/964,715。
本专利技术涉及特异性结合成员，特别是抗体及其片段，其与扩增的表皮生长因子受体(EGFR)和EGFR外显子2-7的框内缺失结合，所述缺失导致缺少来自细胞外结构域的267个氨基酸的截短的EGFR受体(de2-7EGFR)。特别地，由特异性结合成员特别是抗体及其片段识别的表位在异常翻译后修饰后是增强的或明显的。这些特异性结合成员在癌症诊断和治疗中是有用的。本专利技术的结合成员还可以与化学治疗或抗癌剂和/或与其他抗体或其片段组合在治疗中使用。
技术介绍
增殖性疾病特别是癌症通过化学治疗手段的治疗通常依赖于利用人或动物体内靶增殖细胞和其他正常细胞中的差异。例如，许多化学试剂设计为由快速复制DNA吸收，从而使得PCR复制和细胞分裂的过程被破坏。另一种方法是鉴定在肿瘤细胞或其他异常细胞表面上的抗原，其在发育人组织中通常不表达，例如肿瘤抗原或胚胎抗原。此类抗原可以由结合蛋白例如可以阻断或中和抗原的抗体靶向。此外，包括抗体及其片段的结合蛋白可以递送毒性试剂或能够直接或间接激活在肿瘤部位上的毒性试剂其他物质。EGFR是用于肿瘤靶向抗体治疗的吸引人的靶，因为它在许多类型的上皮肿瘤中是超表达的(Voldborg等人(1997).Epidermalgrowthfactorreceptor(EGFR)andEGFRmutations，functionandpossibleroleinclinicaltrials.AnnOncol.8，1197-206；denEynde，B.和Scott，A.M.TumorAntigens.In：P.J.Delves和I.M.Roitt(编辑)，EncyclopediaofImmunology，第二版，第2424-31页.London：AcademicPress(1998))。此外，EGFR的表达与许多肿瘤类型中的不良预后相关，包括胃、结肠、膀胱、乳腺、前列腺、子宫内膜、肾和脑(例如神经胶质瘤)。因此，许多EGFR抗体已在文献中由几项正在进行的临床评估报道(Baselga等人(2000)PhaseIStudiesofAnti-EpidermalGrowthFactorReceptorChimericAntibodyC225AloneandinCombinationWithCisplatin.J.Clin.Oncol.18，904；Faillot等人(1996)：AphaseIstudyofananti-epidermalgrowthfactorreceptormonoclonalantibodyforthetreatmentofmalignantgliomas.Neurosurgery.39，478-83；Seymour，L.(1999)Novelanti-canceragentsindevelopment：excitingprospectsandnewchallenges.CancerTreat.Rev.25，301-12))。来自在具有头与颈癌、鳞状细胞肺癌、脑神经胶质瘤和恶性星形细胞瘤的患者中使用EGFRmAbs的研究的结果是鼓舞人心的。大多数EGFR抗体的抗瘤活性通过其阻断配体结合的能力得到增强(Sturgis等人(1994)Effectsofantiepidermalgrowthfactorreceptorantibody528ontheproliferationanddifferentiationofheadandneckcancer.Otolaryngol.HeadNeck.Surg.111，633-43；Goldstein等人(1995)Biologicalefficacyofachimericantibodytotheepidermalgrowthfactorreceptorinahumantumorxenograftmodel.Clin.CancerRes.1，1311-8)。此类抗体可以通过细胞增殖和抗体依赖性免疫功能(例如补体激活)的调节介导其功效。然而，这些抗体的使用可以通过器官中的摄取受到限制，所述器官具有高内源水平的EGFR，例如肝脏和皮肤(Baselga等人，2000；Faillot等人，1996)。包含EGFR基因扩增(即EGFR基因的多个拷贝)的显著比例的肿瘤也共表达截短形式的受体(Wikstrand等人(1998)TheclassIIIvariantoftheepidermalgrowthfactorreceptor(EGFR)：characterizationandutilizationasanimmunotherapeutictarget.J.Neurovirol.4，148-158)，其称为de2-7EGFR、ΔEGFR或Δ2-7(本文可互换使用的术语)(Olapade-Olaopa等人(2000)EvidenceforthedifferentialexpressionofavariantEGFreceptorproteininhumanprostatecancer.Br.J.Cancer.82，186-94)。de2-7EGFR中可见的重排导致缺乏跨越外显子2-7的801个核苷酸的框内成熟mRNA(Wong等人(1992)Structuralalterationsoftheepidermalgrowthfactorreceptorgeneinhumangliomas.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89，2965-9；Yamazaki等人(1990)Adeletionmutationwithintheligandbindingdomainisresponsibleforactivationofepidermalgrowthfactorreceptorgeneinhumanbraintumors.Jpn.J.CancerRes.81，77本文档来自技高网...

【技术保护点】
能够结合EGFR的分离抗体，所述EGFR在包含EGFR基因扩增的肿瘤上，其中所述肿瘤的细胞包含EGFR基因的多个拷贝，以及所述EGFR在表达截短形式的EGFR受体de2‑7的肿瘤上，其中所述抗体不与由SEQ ID NO:13的氨基酸序列组成的de2‑7 EGFR连接肽结合，其中所述抗体与人野生型EGFR的残基287‑302（SEQ ID NO:14）序列内的表位结合，并且其中所述抗体不包括具有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的重链可变区序列且不包括具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。

【技术特征摘要】
2009.02.18 US 12/3885041.分离的抗表皮生长因子受体（EGFR）抗体在制备用于治疗人中的癌症的药物中的用途，所述抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的特征在于SEQIDNO:164中所示的氨基酸序列，所述轻链可变区的特征在于SEQIDNO:166中所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1的用途，其中所述抗体包括重链恒定区，所述重链恒定区的特征在于SEQIDNO:43中所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1的用途，其中所述抗体包括轻链恒定区，所述轻链恒定区的特征在于SEQIDNO:48中所示的氨基酸序列。4.根据权利要求3的用途，其还包括IgG1重链恒定区。5.根据权利要求1的用途，其包括IgG1重链恒定区和κ轻链恒定区。6.根据权利要求1-5任一项的用途，其中所述分离抗体是抗体F（ab'）2、scFv片段、双抗体、三抗体或四抗体的形式。7.根据权利要求1-5任一项的用途，其进一步包括可检测或功能标记。8.根据权利要求7的用途，其中所述可检测或功能标记是共价附着的。9.根据权利要求7的用途，其中所述可检测标记是放射性标记。10.根据权利要求9的用途，其中所述放射性标记选自3H、14C、32P、35S、36Cl、51Cr、57Co、58Co、59Fe、90Y、121I、124I、125I、131I、111In、211At、198Au、67Cu、225Ac、213Bi、99Tc和186Re。11.根据权利要求7的用途，其中所述可检测标记是成像剂。12.根据权利要求11的用途，其中所述成像剂是磁共振成像增强剂。13.根据权利要求1-5任一项的用途，其中所述分离抗体是加入聚乙二醇的。14.根据权利要求1-5任一项的用途，其中所述癌症选自成胶质细胞瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、赘生性星形细胞瘤和赘生性动静脉畸形。15.根据权利要求1-5任一项的用途，其中所述癌症是实体瘤。16.根据权利要求15的用途，其中所述实体瘤是神经胶质瘤。17.根据权利要求15的用途，其中所述实体瘤选自上皮肿瘤、乳腺肿瘤、肺肿瘤、前列腺肿瘤、膀胱肿瘤、头肿瘤、结肠肿瘤、胰腺肿瘤和颈肿瘤。18.根据权利要求1-5任一项的用途，其中所述抗体与第二...

【专利技术属性】
技术研发人员：LJ奥尔德，TG约翰斯，C帕诺西斯，AM斯科特，C伦纳，G里特，A荣布卢特，E斯托克特，P科林斯，WK凯夫尼，HJS黄，AW伯盖斯，EC尼斯，A默里，G马克，
申请(专利权)人：路德维格癌症研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH