高比活HuG-CSF酵母表达载体、高产菌株及HuG-CSF生产方法技术

本发明专利技术涉及ＨｕＧ－ＣＳＦ分泌表达的酵母菌株ＨｕＧ－ＣＳＦ／ｐＧＡＰＺ　　α－Ａ／ＧＳ１１５构建的关键技术、构建结果及利用此菌株生产ＨｕＧ－ＣＳＦ的纯化方法。本发明专利技术采用酵母分泌表达系统取代大肠杆菌包涵体表达系统，发酵液上清中的ＨｕＧ－ＣＳＦ蛋白含量占总分泌蛋白的８０％以上，目标蛋白ＨｕＧ－ＣＳＦ不需要复性，其生物比活性可达到８．０×１０↑［８］单位／毫克蛋白，毒副作用低；分离纯化过程中只需要将离心后的上清液直接过离子交换柱和疏水柱即可达到９８％以上的纯度，大大简化了生产工序，降低了生产成本，在工业生产中应用将有良好的经济效益。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种ＨｕＧ－ＣＳＦ酵母表达载体ＨｕＧ－ＣＳＦ／ｐＧＡＰＺα－Ａ，其特征在于将克隆修饰的ＨｕＧ－ＣＳＦ基因插入ｐＧＡＰＺα－Ａ之ＧＡＰ启动子／α－ｆａｃｔｏｒ信号肽下游位点，删除载体上Ｋｅｘ２位点Ｌｙｓ－Ａｒｇ之后的Ｓｔｅ１３位点Ｇｌｕ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ａｌａ，构建成ＨｕＧ－ＣＳＦ分泌型表达载体ＨｕＧ－ＣＳＦ／ｐＧＡＰＺα－Ａ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：梁国栋，陈海宁，邓刚，蒲广西，郝新保，白玉杰，
申请(专利权)人：海南国栋药物研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：66[中国|海南]