本发明专利技术属于生物技术微生物领域，涉及1株液体发酵生产Lovastatin的草酸青霉（Penicillium oxalicum）Po‑25菌株、用途和发酵生产方法。草酸青霉（Penicillium oxalicum）Po‑25菌株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M 2016381，保藏日期为：2016年7月7日。本发明专利技术青霉Po‑25菌株具有高产Lovastatin、生长速度快、产孢量多、培养简单等优良特性。在发酵培养基初始pH为5.0~5.5，培养温度为28℃条件下，青霉Po‑25菌株通过液体发酵培养基和发酵条件优化后，发酵81 h~105 h，Lovastatin产量可达260 mg/L以上。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术微生物领域，涉及1株液体发酵生产Lovastatin的草酸青霉（Penicilliumoxalicum）Po-25菌株、用途和发酵生产方法。
技术介绍
洛伐他汀（Lovastatin）是各国公认的降低胆固醇的理想药剂，具有高效、低毒、安全的特点，它能选择性抑制羟甲基戊二酸辅酶A（HMG-CoA）还原酶活性，并阻断胆固醇生物合成，近年来在临床治疗方面应用十分广泛。从1979年，日本学者远滕章（AkiraEndo）教授从红色红曲霉（Monascusruber）的培养液中分离出一种能够强力抑制胆固醇合成的活性物质，命名为MonacolinK（莫纳可林K）开始，时隔1年，美国Albert等从土曲霉（Aspergillusterrers）中发现了相似的物质，并命名为Mevinolin，现称Lovastatin。此后发现Lovastatin存在于包括侧耳属（Pleurotus）、茎点菌属（Phoma）、青霉属（Penicillium）、发光类脐菇（Omphalotusolearius）在内的多种真菌中。这一连串的发现引起了世界的轰动，掀起了真菌产Lovastatin的研究热潮。青霉（Penicillium）通常在柑桔及其他水果上，冷藏的干酪及被它们的孢子污染的其他食物上均可找到，其分生孢子在土壤内，空气中及腐烂的物质上也到处存在。青霉营腐生生活，其营养来源极为广泛，是一类杂食性真菌，可生长在任何含有机物的基质上。青霉（Penicillium）是我国重要的工业微生物资源，在人类生活中的使用广泛。自从1929年弗莱明（Fleming），发现点青霉（Penicilliumnotatum）产生抑制细菌生长抗生素青霉素以来，已对该属菌的很多种进行了深入研究。常见的青霉种类有：点青霉（Penicilliumnotatum）、产黄青霉（P.chrysogenum）、草酸青霉（P.oxalicum）、桔青霉（P.citrinum）、斑点青霉（P.meleagrinum）、灰黄青霉（P.griseofulvum）等。青霉（Penicillium）在生长过程中会产生多种有用代谢产物，如Lovastatin，可抑制胆固醇合成；纤维素酶、果胶酶、糖化酶、等多种酶，可用于制备酶制剂；有机酸如柠檬酸、葡萄糖酸等，可用于工业生产等，均引起了国内外研究学者的广泛关注。
技术实现思路
为了解决上述的技术问题，本专利技术的第一个目的是提供草酸青霉（Penicilliumoxalicum）Po-25菌株，具有高产Lovastatin、生长快、产孢量大、培养简单等优良特性。本专利技术的第二个目的是提供上述的草酸青霉（Penicilliumoxalicum）Po-25菌株在制备洛伐他汀的应用。为了实现上述的第一个目的，本专利技术采用了以下的技术方案：草酸青霉（Penicilliumoxalicum）Po-25菌株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCM2016381，保藏日期为：2016年7月7日。本专利技术从浙江省各地不同生境收集的自然发酵样品（食品、土壤、空气、有机质等）中分离纯化获163株青霉纯菌株；经筛选获1株高产Lovastatin的编号为Po-25优质菌株，该菌株分离自腐烂的桔子；根据的形态特征和18SrDNA基因序列，鉴定Po-25菌株为草酸青霉（Penicilliumoxalicum）；Po-25菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCM2016381，保藏日期为：2016年7月7日。Po-25菌株的形态特征：在PDA培养基上28℃培养3d即形成较典型的菌落。菌落初期为白色绒毛状，2d后中心菌丝开始变绿，培养3d后逐渐变为暗绿色；菌落平坦，质地绒状，气生菌丝密而短小，分生孢子结构大量产生，呈深橄榄绿色，易脱落（附图1）；显微镜观察菌丝细胞丝状交织，具隔膜，直径6~8μm；分生孢子梗发生于基质，有横隔，壁平滑，基部无足细胞，经过分枝后，产生二轮不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体；帚状体通常双轮生，梗基每轮2~3个，13~20μm×3.2~3.7μm，彼此通常较紧贴；瓶梗每轮5~8个或更多，10~15μm×2.5~3.2μm，幼龄时呈现瓶状或披针状，充分成熟时近圆柱状（附图2）；瓶梗顶端产生链状的分生孢子，分生孢子椭圆形、大小4.5~5.5μm×3.0~4.0μm，壁光滑，呈蓝绿色（附图3）。18SrDNA基因序列分析结果表明，其长度为1231bp（附图4），与草酸青霉（Penicilliumoxalicum）的进化距离最近（附图5）。根据Po-25菌株的形态特征，结合青霉属（Penicillium）分种检索表，将Po-25菌株鉴定为草酸青霉（Penicilliumoxalicum）。为了实现上述的第二个目的，本专利技术采用了以下的技术方案：一种洛伐他汀的制备方法，该方法包括以下的步骤：1）用接种针挑取少量权利要求1所述的草酸青霉Po-25菌株菌丝，转接于PDA培养基平皿中，活化培养3d；2）取2菌饼接种于一级种子培养液中，摇床培养2d，制得一级种子液；3）在二级种子培养液中，按10%加入一级种子液，200r/min摇床培养1d成二级种子液；在5L发酵罐发酵培养液中按20%接入二级种子液，发酵培养液初始pH为5.0~5.5，培养温度为28℃条件下，发酵时间为81h~105h。作为优选，所述的PDA培养基由以下的组分构成：马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂粉2.0%、水1L、pH5.0~5.5。作为优选，所述的一级种子培养液由以下的组分构成：马铃薯20%、葡萄糖2%、水1L、pH5.0~5.5。作为优选，所述的二级种子培养液由以下的组分构成：马铃薯20%、葡萄糖2%、牛肉膏0.5%、水1L、pH5.0~5.5。作为优选，所述的发酵培养液由以下的组分构成：马铃薯20%、葡萄糖2%、酵母膏0.5%、NaCl0.2%、水1L、pH5.0~5.5。青霉Po-25菌株具有高产Lovastatin、生长速度快、产孢量多、培养简单等优良特性。在发酵培养基初始pH为5.0~5.5，培养温度为28℃条件下，青霉Po-25菌株通过液体发酵培养基和发酵条件优化后，发酵81h~105h，Lovastatin产量可达260mg/L以上（附图6）；用液相色谱-质谱联用技术分离检测发酵液中的Lovastatin，结果表明分离物的结构、分子量与Lovastatin准品一致（附图7）。青霉Po-25菌株可为Lovastatin的生产提供优良菌种。附图说明图1青霉Po-25菌株PDA培养基上培养3d菌落正面。图2青霉Po-25菌株分生孢子头显微特征（400X）。图3青霉Po-25菌株分生孢子显微特征（400X）。图4青霉Po-25菌株18SrDNA基因序列（1231bp）。图5基于18SrDNA基因序列建立的青霉Po-25菌株系统发育树。图6青霉Po-25菌株在5L发酵罐中的生物量和Lovastatin产量随发酵时间变化曲线。图7青霉Po-25菌株发酵液Lovastatin液相色谱-质谱联用检测图。图850株代表性青霉菌株发酵液中Lovastatin的产量。具体实施方式下面对本专利技术具体实施方式做一个详细的说明。实施例1草酸青霉（Pe本文档来自技高网...
【技术保护点】
草酸青霉（Penicillium oxalicum）Po‑25菌株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M 2016381，保藏日期为：2016年7月7日。
【技术特征摘要】
1.草酸青霉（Penicilliumoxalicum）Po-25菌株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCM2016381，保藏日期为：2016年7月7日。2.权利要求1所述的草酸青霉Po-25菌株用于生产洛伐他汀（Lovastatin）。3.一种洛伐他汀的制备方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：1）用接种针挑取少量权利要求1所述的草酸青霉Po-25菌株菌丝，转接于PDA培养基平皿中，活化培养3d；2）取2菌饼接种于一级种子培养液中，摇床培养2d，制得一级种子液；3）在二级种子培养液中，按10%加入一级种子液，200r/min摇床培养1d成二级种子液；在5L发酵罐发酵培养液中按20%接入二级种子液，发酵培养液初始pH为5.0~5.5，培养温度为...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋冬花，郑婕施，钱彦宇，林雨珊，韩肖飞，
申请(专利权)人：浙江师范大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。