一种在毕赤酵母和汉逊酵母中进行异源蛋白表达的通用载体的构建与应用制造技术

技术编号:11235313 阅读:218 留言:0更新日期:2015-04-01 09:03
本发明专利技术涉及构建基于甲醇营养型汉逊酵母和毕赤酵母的通用载体,其构建方法包括如下步骤:步骤(1),用限制性内切酶BglⅡ和BamHⅠ双酶切质粒pHanMOX-GFP,得到pHan载体;步骤(2),用限制性内切酶BglⅡ和BamHⅠ双酶切消化载体质粒pPinkAOX1-HPV16L1,回收片段PAOX1-HPV16L1-CYC1TT后与步骤(1)所得pHan载体以T4连接酶16℃连接过夜,转化并涂布含0.1mg/mL卡那霉素的LB平板,提取质粒酶切鉴定,得到重组汉逊酵母质粒pHanAOX1-HPV16L1。本发明专利技术使用上述通用载体指导了人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1在毕赤酵母和汉逊酵母中的表达。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种在毕赤酵母和汉逊酵母中进行异源蛋白表达的通用载体的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤(1),用限制性内切酶BglⅡ和BamHⅠ双酶切质粒pHanMOX‑GFP,得到pHan载体;步骤(2),用限制性内切酶BglⅡ和BamHⅠ双酶切消化载体质粒pPinkAOX1‑HPV16L1,回收片段PAOX1‑HPV16L1‑CYC1TT后与步骤(1)所得pHan载体以T4连接酶16℃连接过夜,转化并涂布含0.1mg/mL卡那霉素的LB平板,提取质粒酶切鉴定,得到重组汉逊酵母质粒pHanAOX1‑HPV16L1,该质粒即为通用载体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:马雁冰金晓媚刘存宝姚宇峰杨旭黄惟巍孙文佳龙琼李杨褚晓杰
申请(专利权)人:中国医学科学院医学生物学研究所
类型:发明
国别省市:云南;53

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