本发明专利技术涉及一种利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法及应用。该方法中的微生物采用产朊假丝酵母(Candida utilis)CICC1769、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CCTCC AY 93161和异常汉逊酵母(Hansenulaanomala var.anomala)CCTCC AY 93047中的一种或两种以上。本发明专利技术利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法吸附效果好、成本低、绿色环保，不会产生二次污染，也不会破坏柑橘汁的营养价值，具有较好的市场应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品安全
，具体而言，涉及一种利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法及应用。
技术介绍
PAT(patulin，PAT)，又名棒曲霉素，是一种半缩醛内酯，分子式为C7H6O4，化学名称为4-羟基-4-氢-呋喃-[3,2碳]-吡喃-2(6氢)酮。PAT具有急性毒性，包括对动物的肺、脑水肿、肝脏、脾脏、肾的损害和免疫系统的毒害作用；也具有慢性毒性，表现在对动物的细胞毒性，基因毒性和免疫毒性。对巯基有强亲和力，可与含巯基的蛋白和多肽反应，破坏DNA单链和双链，从而抑制DNA和RNA的合成，也可抑制多种酶活性，特别是一些生化指标中的酶，如碱性磷酸酶、二磷酸果糖酶和己糖激酶等。此外，PAT对成年哺乳动物和胚胎期动物的肾脏也有毒害作用。直接接触皮肤，可引起DNA损伤，从而造成细胞周期阻滞和内部介导细胞凋亡，积累大量具有皮肤毒性的聚胺产物。PAT是水果中常见的真菌毒素，在霉烂的杏、李、桃、梨、香蕉、菠萝、青梅、蜜瓜、蕃茄、樱桃、辣椒、葡萄、柿子、黄瓜、胡萝卜、蕃茄酱、苹果汁、苹果酱、葡萄汁、苹果制品、谷物、糕点及豆科植物、陈的火腿、干香肠等食品中均有发现。目前，世界上已经有很多国家制定了水果及其制品中PAT的最高限量标准。1995年，联合国粮农组织和世界卫生组织下的食品添加剂联合专家委员会(JECFA)将PAT的每天容许摄入量定为0.4μg/kg bw。在欧洲，由欧洲卫生与消费者保护委员会发起的一项科学研究表明，PAT每日允许摄入量要远远低于JECFA设定的水平。我国规定在苹果和山楂制品中限量值为50μg/kg。目前，国内外对柑橘属中PAT的限量标准属于空白，亟待针对不同柑橘种类、不同食用方式等进行相关PAT限量标准的研究和完善。为了降低食品中PAT的含量，人们尝试了很多控制方法，比较传统的方法主要可归纳为物理法和化学法。物理方法如加强原料的挑选和清洗、物理吸附和澄清等，但是这种方法耗时又费力，而且据报道PAT可以从腐烂部位渗透至未腐烂部位，在完整的水果部位仍然可以检测到PAT。另外，清洗会使PAT进入清洗用水中造成清洗容器、工具及环境的二次污染。再者，在果汁加工过程中使用活性炭进行吸附，但活性炭也
严重影响了果汁的颜色并且大大降低了总酚含量。化学方法主要为使用添加剂或化学杀菌剂等手段降低PAT的含量，但是这些添加剂只能抑制PAT产生菌的生长和产毒，不能够直接去除食品中已经含有的PAT。目前，世界范围内柑橘汁中的PAT污染都很严重，严重影响人们的身体健康，因此研究如何去除柑橘汁中PAT，这显得尤为重要。
技术实现思路
鉴于现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法及应用。为了实现本专利技术的目的，专利技术人利用多年的科研实践经验，并结合大量试验研究，优选出灭活后能在柑橘汁中高效去除展青霉素的微生物菌株，从而实现了本专利技术的目的。具体地，本专利技术的技术方案概况如下：一种利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法，该方法包括如下步骤：(1)将酵母菌接种液体培养基中培养，所述的酵母菌选自产朊假丝酵母(Candida utilis)CICC1769、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CCTCC AY 93161和异常汉逊酵母(Hansenula anomala var.anomala)CCTCC AY 93047中的一种或两种以上，至细胞数达到0.5×1010～2.0×1010CFU/mL，然后在1-5℃下3000～5000r/min离心10-30min，离心得到的菌泥用蒸馏水洗涤1～3次；(2)将菌泥以高压蒸汽灭菌法灭活，然后在-22～-18℃下的预冷8-16h，之后再将预冷的冷冻菌泥放入冷冻干燥机进行干燥，设置温度为-56～-52℃，真空度4-6mtorr，时间20-30h，冷冻干燥完成之后，即得到失活微生物菌粉；(3)将失活微生物菌粉加入柑橘汁中，置于4-10℃温度下震荡或搅拌处理10～24h，处理结束后进行离心，过滤，得去除展青霉素的柑橘汁。优选地，如上所述利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法，其中步骤(2)的技术参数为：预冷温度-20℃，预冷时间12h，冷冻温度-54℃，真空度5mtorr，时间26h。优选地，如上所述利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法，其中步骤(3)中失活微生物菌粉的用量与柑橘汁中展青霉素的质量比为2000～10000:1。进一步优选地，如上所述利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法，其中的酵母菌为产朊假丝酵母(Candida utilis)CICC1769。再进一步优选地，如上所述利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法，其中的柑橘汁为橙汁。另外，由于上述失活微生物利用其细胞上的化学键与展青霉素结合，产生吸附或/和降解的作用，从而可以高效去除柑橘汁中展青霉素，因此本专利技术还提供了上述失活微生物菌株的新应用，即：失活微生物在制备柑橘汁中展青霉素吸附剂中的应用，所述的失活微生物选自失活的产朊假丝酵母(Candida utilis)CICC1769、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CCTCC AY 93161和异常汉逊酵母(Hansenula anomala var.anomala)CCTCC AY 93047中的一种或两种以上。优选所述的失活微生物选自失活的产朊假丝酵母(Candida utilis)CICC1769。优选所述的柑橘汁为橙汁。与现有技术相比，本专利技术利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法吸附效果好、成本低、绿色环保，不会产生二次污染，也不会破坏柑橘汁的营养价值，具有较好的市场应用前景。附图说明图1为利用HPLC检测展青霉素的标准曲线。图2为8种菌株对酸化水中展青霉素去除能力的测定结果。图3为优选的3种菌株对橙汁中展青霉素去除能力的测定结果。图4为Candida.utilis CICC1769菌株的细胞形态显微图。图5为Candida.utilis CICC1769的生长曲线图。具体实施方式以下试验例进一步描述本专利技术方法的实施过程和有益效果，试验例仅用于例证的目的，不限制本专利技术的范围，同时本领域普通技术人员根据本专利技术所做的显而易见的改变也包含在本专利技术范围之内。需要说明的是，本专利技术所采用的菌株均购买于中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)或中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。试验例1：8种菌株在模拟酸化水体系中对展青霉素去除能力的评价1、主要试剂的配制CM0005乳酸菌培养基：酵母膏7.5g，葡萄糖10.0g，番茄汁100mL，蛋白胨7.5g，KH2PO42.0g，吐温80 0.5mL，蒸馏水900mL，pH 7.0。121℃下，灭菌15min。C0006MRS培养基：酪蛋白胨10.0g，牛肉粉8.0g，酵母粉4.0g，葡萄糖20g，硫酸
镁0.2g，乙酸钠5.0g，柠檬酸三铵2.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸锰0.05g，吐温80 1.0g，蒸馏水1000mL，pH 6.2±0.2。121℃下，灭菌15min。CM0181酵母菌培养基：酵母膏3.0g，麦芽浸膏3.0g，蛋白胨5.0g，葡萄糖10.0g，琼脂20.0g，蒸馏水10本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)将酵母菌接种液体培养基中培养，所述的酵母菌选自产朊假丝酵母(Candida utilis)CICC1769、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CCTCC AY 93161和异常汉逊酵母(Hansenula anomala var.anomala)CCTCC AY 93047中的一种或两种以上，至细胞数达到0.5×1010～2.0×1010CFU/mL，然后在1‑5℃下3000‑5000r/min离心10‑30min，离心得到的菌泥用蒸馏水洗涤1～3次；(2)将菌泥以高压蒸汽灭菌法灭活，然后在‑22～‑18℃下的预冷8‑16h，之后再将预冷的冷冻菌泥放入冷冻干燥机进行干燥，设置温度为‑56～‑52℃，真空度4‑6mtorr，时间20‑30h，冷冻干燥完成之后，即得到失活微生物菌粉；(3)将失活微生物菌粉加入柑橘汁中，置于4‑10℃温度下震荡或搅拌处理10～24h，处理结束后进行离心，过滤，得去除展青霉素的柑橘汁。
【技术特征摘要】
1.一种利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)将酵母菌接种液体培养基中培养，所述的酵母菌选自产朊假丝酵母(Candida utilis)CICC1769、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CCTCC AY 93161和异常汉逊酵母(Hansenula anomala var.anomala)CCTCC AY 93047中的一种或两种以上，至细胞数达到0.5×1010～2.0×1010CFU/mL，然后在1-5℃下3000-5000r/min离心10-30min，离心得到的菌泥用蒸馏水洗涤1～3次；(2)将菌泥以高压蒸汽灭菌法灭活，然后在-22～-18℃下的预冷8-16h，之后再将预冷的冷冻菌泥放入冷冻干燥机进行干燥，设置温度为-56～-52℃，真空度4-6mtorr，时间20-30h，冷冻干燥完成之后，即得到失活微生物菌粉；(3)将失活微生物菌粉加入柑橘汁中，置于4-10℃温度下震荡或搅拌处理10～24h，处理结束后进行离心，过滤，得去除展青霉素的柑橘汁。2.根据权利要求1所述利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法，其特征在于，步骤(2)的技术参数为：预冷温度-20℃...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭帮柱，潘思轶，薛淑静，关键，胡昊，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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