本发明专利技术提供了一种流感病毒介导的抗肿瘤疫苗及其制备方法和应用，疫苗由流感病毒诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡而发挥抗肿瘤效应；流感病毒为甲型流感病毒A/WSN/33 H1N1、肿瘤细胞为B16‑F10肿瘤细胞，流感病毒的添加量为MOI=1，疫苗施用方式为皮下注射。本发明专利技术通过使用流感病毒感染肿瘤细胞并诱导其免疫原性死亡，释放到肿瘤微环境中的细胞碎片和病毒抗原会刺激免疫反应，并且随后产生的具有传染性的病毒后代，扩散到周围的肿瘤细胞，并产生病原相关分子模式、损伤相关分子模式、肿瘤细胞碎片和肿瘤相关抗原等子产物，所有这些活动都有助于对先天性和适应性抗肿瘤免疫反应的局部和全身刺激打破免疫抑制的肿瘤微环境，为肿瘤免疫疗法提供新的治疗思路和平台。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肿瘤免疫治疗，特别涉及一种流感病毒介导的抗肿瘤疫苗及其制备方法和应用。
技术介绍
1、恶性肿瘤以其治愈率低、病死率高而成为目前危害人类健康的最主要疾病。目前，国内针对肿瘤的治疗方式主要包括手术、化疗和放疗，但手术方式创面过大预后不好，放、化疗对机体损伤过大，传统的肿瘤治疗手段难以应对恶性肿瘤。
2、近年来，针对肿瘤治疗的研究如火如荼地进行，免疫疗法成为肿瘤治疗中的研究热点，肿瘤免疫疗法的机制与其他癌症治疗方法的机制有很大不同。与化学疗法或癌基因靶向疗法不同，癌症免疫疗法依赖于促进一种动态的抗癌反应，而不仅限于针对单个致癌基因紊乱或癌细胞的其他自主特征。因此，癌症免疫疗法可以产生抗肿瘤活性，同时靶向许多将肿瘤细胞与正常细胞和组织区分开来的异常。尽管针对免疫检查点ctla4和pd-l1/pd-1的抗体在临床上取得了成功，但只有一部分人表现出持久的反应，并且对实体瘤治疗效果不尽如人意，所以肿瘤治疗的研究仍旧任重而道远。
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种流感病毒介导的抗肿瘤疫苗及其制备方法和应用，一方面利用流感病毒诱导肿瘤细胞免疫原性死亡而引发良好的抗肿瘤反应，另一方面通过流感病毒调节机体的固有免疫，固有免疫与适应性免疫相结合达到强有力的抗肿瘤效应。
2、本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：
3、一种流感病毒介导的抗肿瘤疫苗，所述疫苗由流感病毒诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡而获得；
>4、所述流感病毒为甲型流感病毒a/wsn/33 h1n1；5、所述肿瘤细胞为b16-f10肿瘤细胞。
6、进一步的，所述流感病毒的添加量为moi=1。
7、进一步的，所述疫苗的施用方式为皮下注射。
8、本专利技术的另一方面：
9、所述流感病毒介导的抗肿瘤疫苗的制备方法，以下步骤：
10、步骤1，流感病毒感染肿瘤细胞：
11、向肿瘤细胞中加入配置好的含感染复数moi为1的流感病毒的无血清培养基，使流感病毒吸附并内吞进入肿瘤细胞，保证肿瘤细胞受到流感病毒感染；
12、步骤2，抗肿瘤疫苗的制备：
13、取步骤1获得的被流感病毒感染的肿瘤细胞，通过消化、清洗、计数、稀释的处理后，获得所述抗肿瘤疫苗。
14、本专利技术的另一方面：
15、所述流感病毒介导的抗肿瘤疫苗在制备抗肿瘤药物中的应用。
16、本专利技术相比现有技术的有益效果为：
17、本专利技术通过cell counting kit-8（cck8）和乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase, ldh）的检测发现了流感病毒对b16-f10和a549肿瘤细胞均具有良好的亲嗜性；利用流感病毒诱导b16-f10肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡，制备得到的流感病毒介导的抗肿瘤疫苗具有抗肿瘤作用，一是病毒增强固有免疫，二是病毒杀伤肿瘤细胞，引起肿瘤细胞免疫原性死亡释放damp、pamp、taa和肿瘤碎片等，增强免疫细胞的浸润，并释放病原体继续感染相邻的肿瘤细胞，引发持续的免疫刺激发挥良好的抗肿瘤效应，三是流感病毒感染肿瘤细胞后细胞膜上表达流感病毒血凝素ha，ha会介导溶酶体逃逸，有助于肿瘤抗原的交叉递呈。
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【技术保护点】
1.一种流感病毒介导的抗肿瘤疫苗，其特征在于，所述疫苗由流感病毒诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡而获得；
2.根据权利要求1所述的流感病毒介导的抗肿瘤疫苗，其特征在于，所述流感病毒的添加量为MOI=1。
3.根据权利要求1或2所述的流感病毒介导的抗肿瘤疫苗，其特征在于，所述疫苗的施用方式为皮下注射。
4.一种如权利要求1~3任一项所述流感病毒介导的抗肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
5.一种如权利要求1~3任一项所述流感病毒介导的抗肿瘤疫苗在制备抗肿瘤药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种流感病毒介导的抗肿瘤疫苗，其特征在于，所述疫苗由流感病毒诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡而获得；
2.根据权利要求1所述的流感病毒介导的抗肿瘤疫苗，其特征在于，所述流感病毒的添加量为moi=1。
3.根据权利要求1或2所述的流感病毒介导的...
【专利技术属性】
技术研发人员：马雁冰，杨英，杨颖，胡永茂，刘清文，龙琼，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学生物学研究所，
类型：发明
国别省市：
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