本发明专利技术涉及表达人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）抗原的复制型艾滋病活载体疫苗及其用途，所述疫苗基于复制型痘苗病毒如痘苗病毒天坛株而构建。本发明专利技术的复制型活载体疫苗能够诱导高水平的抗ＨＩＶ的体液和细胞免疫应答。本发明专利技术提供了用于构建所述艾滋病疫苗的载体。本发明专利技术还涉及使用所述艾滋病疫苗的免疫接种方案。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗病毒免疫学领域。更具体地，本专利技术涉及基于复制型痘苗病毒载体的抗人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)的疫苗及其制备方法和用途。本专利技术的艾滋病疫苗能够诱导高水平的抗HIV的体液和细胞免疫应答。
技术介绍
获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS)简称艾滋病，是由人免疫缺陷病毒(Human ImmunodeficiencyVirus，HIV)感染引起的一种传染性疾病。自从1981年发现第一例病例以来，艾滋病一直以惊人的速度在全球蔓延，成为世界上危害人类生命和健康最严重的病毒性疾病之一。艾滋病的流行给世界的社会和经济发展带来了巨大影响。在一些发展中国家，HIV感染已造成了人均寿命缩短、劳动力减少、食品短缺，使经济和社会发展倒退了20年。HIV在中国的流行经历了传入期(1 985-1988)、播散期(1989-1994)和增长期(1995年至今)三个阶段。近年来，中国HIV流行形势日趋严峻。截止2003年底，估计中国HIV感染者已达84万，全人群感染率为0.07％，累计死于艾滋病的人数已达到16万。目前中国艾滋病的流行趋势处于世界第14位，在亚洲排名第2位，而且，HIV感染者数目以每年40％的速度在递增。近年来抗HIV病毒药物的研制和应用取得了很大进展，部分感染者得到了较好的治疗。然而，耐药株的出现使这些药物不是对每个病人都有效，复杂的服药过程使部分病人不能坚持按时服药而导致治疗失败，昂贵的费用也使治疗难以大规模推广。历史经验证明，控制疾病流行最经济有效的方法就是应用疫苗，成功的实例如天花、脊髓灰质炎、麻疹、肝炎等，因此，研制安全有效的艾滋病疫苗一直是科学工作者们奋斗的目标。各国科学家一致认为有效的艾滋病疫苗必须能够诱导机体产生HIV特异性的CD8+细胞毒T淋巴细胞反应(CTL)和中和抗体反应。目前各单一疫苗难以实现这一目标，需要采用不同类型疫苗联合免疫的策略才能提高艾滋病疫苗的免疫效果。可供选择的候选疫苗包括下列几种传统疫苗(灭活疫苗和减毒活疫苗)、合成肽和蛋白亚单位疫苗、DNA疫苗以及活载体疫苗。与其它类型疫苗相比，活载体疫苗的优势体现在(1)能主动感染靶组织或细胞，提高了外源基因进入细胞的效率；(2)载体自身有佐剂效应，能诱导细胞因子和趋化因子的产生；(3)多数能诱导长期的免疫应答。其中以痘苗病毒为载体的活载体疫苗研究进行得最为深入和广泛，但目前进入临床试验阶段的多为非复制型载体，如MVA、NYVAC和ALVAC。但临床试验显示非复制型载体免疫原性相对较弱，而且同一种疫苗在人体中诱导的免疫反应明显弱于猴体内的免疫应答。这可能与其非复制的特性有关。非复制型载体疫苗感染宿主细胞后，只能进行一个周期的抗原表达、加工和呈递过程，无法产生有感染性的病毒并开始新一轮的感染，因而它对免疫系统的刺激是有限的和短暂的。有鉴于此，国际上活载体疫苗的研究重点已从非复制型转向复制型，以充分发挥活载体能够复制的特点，更好地刺激机体产生免疫反应。
技术实现思路
本专利技术提供了针对HIV感染的新的疫苗和免疫接种方法，其中采用复制型痘苗病毒为载体构建了表达HIV抗原的活载体艾滋病疫苗。本专利技术提供了一种表达HIV抗原的活载体艾滋病疫苗，其包含复制型痘苗病毒作为载体，其中所述痘苗病毒基因组的胸苷激酶(TK)区插入了至少一种编码HIV抗原的多核苷酸。在本专利技术的艾滋病疫苗中，所述复制型痘苗病毒例如是痘苗病毒天坛株。优选地，所述重组的复制型痘苗病毒，不含有选择标记基因。优选地，在本专利技术的艾滋病疫苗中，所述至少一种编码HIV抗原的多核苷酸来源于中国HIV主要流行毒株97CN54。可用于构建本专利技术的疫苗的HIV抗原例如为gag-pol和/或gp140TM。因此，在一个具体的实施方式中，本专利技术涉及一种复制型的艾滋病活载体疫苗，所述疫苗通过将中国HIV主要流行毒株97CN54的gag-pol和gp140TM基因整合入痘苗病毒天坛株的TK区构建而成。优选地，可以对疫苗中的编码HIV抗原的多核苷酸进行修饰，例如同义突变和/或部分删除的修饰。本专利技术的艾滋病疫苗还可包含药用可接受的佐剂和/或载体。本专利技术还提供了一种艾滋病免疫试剂盒，所述试剂盒包含多个成份和指示免疫程序的说明书，其中一个成份为本专利技术的上述艾滋病疫苗。附图说明图1显示转移载体质粒pVTT1.0的构建路线。图2显示载体pVTT1.0经KpnI、NdeI和EcoRV酶切分析结果。泳道M显示为DNA分子量MarkerDL15000的；泳道1、pVTT1.0/KpnI 2、pVTT1.0/NdeI 3、pVTT1.0/EcoRV。图3显示质粒pVTT-gagpol的酶切电泳图。质粒pVTT-gagpol分别用PstI、XbaI、NcoI酶切进行鉴定，泳道1.λDNA/HindIII+EcoRI marker；2.pVTT-gagpol/PstI；3.pVTT-gagpol/XbaI；4.pVTT-gagpol/NcoI；5.λDNA/HindIII marker；6.DL15000marker。图4显示质粒pVTT-mgp140TM的酶切电泳图。质粒pVTT-mgp140TM分别进行NdeI，SalI酶切分析，冰道1.marker DL2000；2.pVTT-mgp140TM质粒；3.pVTT-mgp140TM/NdeI；4.pVTT-mgp140TM/SalI。图5显示质粒pVTT-gagpolenv的构建流程。pVTT-gagpol经PmeI和PacI双酶切之后，补平并回收3.0kb的pE/L-gagpol片段；质粒pVTT-mgp140TM用PmeI单酶切后，与片段pE/L-gagpolΔ连接。图6显示质粒pVTT-gagpolenv的酶切电泳图。质粒pVTT-gagpolenv经HindIII、PstI酶切鉴定分析，泳道1.pVTT-gagpolenv/HindIII；2.pVTT-gagpolenv/pstI；3.Marker DL2000；4.Marker DL15000。图7显示重组病毒筛选原理。图8显示抗体染色法筛选重组病毒，A痘苗病毒天坛株形成的噬斑(阴性对照)；BHIV抗原表达阳性的噬斑。图9显示VTKgagpolenv的PCR鉴定结果，泳道1.VTKgagpolenv/gagpol；2.天坛株/gagpol；3.VTKgagpolenv/gp140TM；4.天坛株/gp140TM；5.Marker DL2000。图10显示VTKgagpolenv的WB鉴定结果，泳道1.BENCHMARKTMPrestained protein Ladder；2-3.VTKgagpolenv感染的细胞。图11显示Dot Blotting检测筛选标记丢失的结果。1.VTKgagpolenv；2.阴性对照痘苗病毒天坛株；3.阳性对照质粒pVI-gagpol。图12显示重组病毒VTKgagpolenv免疫家兔后诱导的HIV特异性免疫应答。图13显示DNA疫苗初始免疫-VTKgagpolenv加强免疫诱导恒河猴产生针对Env蛋白的细胞免疫应答。图14显示DNA疫苗初始免疫-VTKg本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种表达ＨＩＶ抗原的活载体艾滋病疫苗，其包含复制型痘苗病毒作为载体，其中所述痘苗病毒基因组的胸苷激酶（ＴＫ）区插入了至少一种编码ＨＩＶ抗原的多核苷酸。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邵一鸣，刘颖，刘建元，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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