用于检测HIV感染者免疫重建状况的试剂和方法技术

本发明专利技术提供了用于表达干扰素刺激基因(Interferon stimulatedgenes)IFI27和IFI6的引物组、探针、试剂盒、以及其用于评价艾滋病感染者免疫重建状况的用途。染者免疫重建状况的用途。染者免疫重建状况的用途。

【技术实现步骤摘要】
用于检测HIV感染者免疫重建状况的试剂和方法


[0001]本专利技术涉及艾滋病(HIV)感染者免疫重建状况的检测领域，具体地涉及一种用于表达干扰素刺激基因IFI27和/或IFI6的引物组、探针、试剂盒及其用于检测HIV感染者免疫重建状况的应用。

技术介绍

[0002]艾滋病的抗病毒治疗能够有效抑制病毒复制，但仍有20％
‑
30％经治疗的感染者不能实现有效的免疫重建，尽管HIV病毒载量得到了有效的控制，但CD4
+
T淋巴细胞一直处于较低的水平，这些感染者被称为“免疫不应答者”。这些感染者“非AIDS相关疾病”的发病率和病死率远高于免疫应答的患者。目前，国内外未有对HIV感染者的免疫重建状况进行早期评价的成熟方法。
[0003]在现有技术中，病毒载量和CD4
+
T细胞这两个临床用于评价治疗效果的常规指标不适于评价HIV感染者的免疫重建状况。一方面，由于参与改善免疫重建水平临床治疗研究的HIV感染者都经历了长期抗病毒治疗，这些患者的病毒载量已经很低，不能用病毒载量来评价新型治疗方案的疗效。另一方面，临床评价病人免疫重建主要依赖CD4
+
T淋巴细胞的计数，但大多数HIV感染者在治疗后CD4
+
T细胞数目增长缓慢，短时间内难以看到CD4
+
T细胞的显著提高，通常治疗多年后才能获知病人免疫重建是否良好，以致延缓对病人进行CD4
+
T淋巴细胞重建的辅助性治疗，且长时间的观察会显著增加成本严重制约临床实验的开展。迄今为止，评价免疫不应答者的CD4
+
T细胞的重建水平尚无特异的临床检测指标和有效的临床检测工具。因此，亟需建立新型的评价免疫重建状况的手段。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种检测艾滋病感染者免疫重建状况的新手段。本申请的专利技术人将人源化动物模型和临床队列样本结合，通过流式细胞分选技术和RNA
‑
seq技术筛选鉴定出与HIV临床疗效最为相关的干扰素刺激基因(Interferon stimulated genes，以下简称ISG)，并将其用作评价HIV感染者中非特异性免疫活化的指标，设计特异性引物组和探针，选择合适的内标，建立了临床适用的实时荧光定量PCR检测方法，为评价HIV感染者的免疫重建状况提供切实可行的新手段，由此得到本专利技术。
[0005]因此，在第一方面，本专利技术提供了针对干扰素刺激基因IFI27的引物组，包括：
[0006]IFI27上游引物：GGGAATCGCCTCGTCCTC(SEQ ID NO:1)，以及
[0007]IFI27下游引物：GTAGAACCTCGCAATGACAGC(SEQ ID NO:2)。
[0008]在第二方面，本专利技术提供了针对干扰素刺激基因IFI27的探针，包括：
[0009]IFI27探针：CCCAGTGACTGCAGAGTAGCCACA(SEQ ID NO:3)。
[0010]在第三方面，本专利技术提供了针对干扰素刺激基因IFI6的引物组，包括：
[0011]IFI6上游引物：TGATGAGCTGGTCTGCGA(SEQ ID NO:4)，以及
[0012]IFI6下游引物：ATCAGGGCACCAATATTACCTA(SEQ ID NO:5)。
[0013]在第四方面，本专利技术提供了针对干扰素刺激基因IFI6的探针，包括：
[0014]IFI6探针：CTGCCACCAGCCCCGAGG(SEQ ID NO:6)。
[0015]在第五方面，本专利技术提供了一种用于检测干扰素刺激基因IFI27和/或IFI6的表达水平的试剂盒，所述试剂盒包括：
[0016]‑
本专利技术第一方面和/或第三方面的引物组；以及
[0017]‑
本专利技术第二方面和/或第四方面的探针。
[0018]在第六方面，本专利技术提供了干扰素刺激基因IFI27和/或IFI6的检测剂在制备用于评价HIV感染者免疫重建状况的试剂中的用途。
[0019]本专利技术的有益之处在于：本专利技术通过筛选与HIV的免疫重建最为相关的干扰素刺激基因(ISG)，将其用作评价HIV感染者中非特异性免疫活化的指标，建立能够评价HIV感染者在治疗早期如开始治疗的第2
‑
3年的免疫活化水平和免疫重建状况的临床检测技术，有助于在免疫不应答者在抗病毒的治疗早期发现其免疫重建水平不良，从而能够对免疫不应答者提供及时且有针对性的治疗方案。
附图说明
[0020]得益于以下具体实施方式以及参考附图，本专利技术的技术方案和益处对本领域技术人员会变得显而易见。
[0021]图1示出了在THP
‑
1细胞模型中干扰素刺激基因Siglec1、MX2、IFI6和IFI27在干扰素刺激条件下的表达情况。
[0022]图2示出了通过实时荧光定量PCR检测方法得到的数百个免疫应答者和免疫不应答者的干扰素刺激基因IFI6和IFI27的表达量分析(*代表p<0.05,**代表p<0.01)。
[0023]图3示出了通过实时荧光定量PCR检测方法得到的数百个免疫应答者和免疫不应答者的干扰素刺激基因MX2和Siglec1的表达量分析。
具体实施方式
[0024]下面对本专利技术进行详细的描述。需理解，以下描述仅以示例方式来对本专利技术进行说明，而无意于对本专利技术的范围进行限制，本专利技术的保护范围以随附权利要求为准。并且，本领域技术人员理解，在不背离本专利技术的精神和主旨的情况下，可以对本专利技术的技术方案进行修改。若并未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0025]如上所述，本领域需要一种能够在HIV感染者的早期治疗中评价其免疫活化水平和免疫重建状况的手段，从而为免疫不应答者提供切实可行的针对性治疗方案。
[0026]近年的研究表明，I型干扰素(IFN
‑
1)在HIV引起的异常免疫活化中发挥着关键作用，然而HIV感染者外周血中干扰素的表达水平较低，难以直接检测。但是干扰素会诱导一系列干扰素刺激基因(ISG)的表达，ISG的表达水平代表干扰素信号通路活化水平，并在前期研究中显示与HIV感染者的异常免疫活化和免疫重建不良具有相关性。经干扰素治疗的HIV感染者会出现CD4
+
T淋巴细胞减少，而阻断抗逆转录病毒治疗的HIV感染者的外源性干扰素能够增加CD4
+
T淋巴细胞。另外，抗逆转录病毒治疗后在一些免疫不应答者中存在ISG持续异常表达的现象，表明ISG的表达水平和抗逆转录病毒治疗后的免疫重建状况呈一定
相关性。
[0027]例如，在HIV感染的人源化小鼠模型的研究中发现，抗逆转录病毒治疗且同时阻断I型干扰素(IFN
‑
1)，可以抑制非特异性的免疫活化、恢复免疫细胞功能。阻断干扰素之后，HIV本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.针对干扰素刺激基因IFI27的引物组，包括：IFI27上游引物：GGGAATCGCCTCGTCCTC(SEQ ID NO:1)，以及IFI27下游引物：GTAGAACCTCGCAATGACAGC(SEQ ID NO:2)。2.针对干扰素刺激基因IFI27的探针，包括：IFI27探针：CCCAGTGACTGCAGAGTAGCCACA(SEQ ID NO:3)。3.针对干扰素刺激基因IFI6的引物组，包括：IFI6上游引物：TGATGAGCTGGTCTGCGA(SEQ ID NO:4)，以及IFI6下游引物：ATCAGGGCACCAATATTACCTA(SEQ ID NO:5)。4.针对干扰素刺激基因IFI6的探针，包括：IFI6探针：CTGCCACCAGCCCCGAGG(SEQ ID NO:6)。5.一种用于检测干扰素刺激基因IFI27和/或IFI6的表达的试剂盒，所述试剂盒包括：
‑
权利要求1和/或3所述的引物组；以及
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权利要求2和/或4所述的探针。6.干扰素刺激基因IFI27和/或IFI6的检测剂在制备用于评价HIV感染者免疫重建状况的试剂中的用途。7.根据权利要求6所述的用途，其中，所述干扰素刺激基因IFI27的检测剂包括针对该基因的引物；优选地，所述引物为SEQ ID NO:1所示的上游引物和SEQ ID NO:2所示的下游引物；更优选地，所述干扰素刺激基因IFI27的检测剂还包括针对该基因的探针；优选地，所述探针为SEQ I...

【专利技术属性】
技术研发人员：金聪，张鑫，何林，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：