一种基于8E5细胞的HIV-1病毒载量检测能力验证质控品的制备方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种基于8E5细胞的HIV

【技术实现步骤摘要】
一种基于8E5细胞的HIV
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1病毒载量检测能力验证质控品的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物制品
，具体涉及一种基于8E5细胞的HIV
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1病毒载量检测能力验证质控品的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]为了加强HIV
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1病毒载量检测的质量控制，了解和评价各个机构和实验室的技术状况和检测能力，定期进行HIV
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1病毒载量检测能力验证(Proficiency Testing，PT)考评活动成为HIV
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1病毒载量检测实验室质量保证系统的重要组成之一。因此，一个稳定可靠，且无生物传染危险性的能力验证质控品，对于保证HIV
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1病毒载量的检测质量具有重要意义。
[0003]目前，无论是国内还是国外，大部分HIV
‑
1病毒载量检测能力验证质控品主要分为两类：一类是由HIV
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1临床样本制备而成，中国疾控中心和美国疾控中心都是用临床样本制备实验室检测能力验证质控品，其优点是真实，但缺点也很明显：1.样本来源受限，可能导致制备的质控品数量有限或批次差异较大；2.可能存在潜在感染风险：在制备HIV
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1临床样本时，存在一定的感染风险；3.制备复杂，成本高昂，需要处理和保存，且对运输条件要求严格；4.存在检测方法的限制：由于临床样本中病毒载量的变异性和复杂性，可能会影响不同检测方法的准确性和可靠性；5.缺乏标准化的质控品：由于质控品制备的复杂性和样本来源的受限，HIV
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1临床样本制备的质控品往往缺乏标准化和统一性。第二类是采用MS2原核系统构建HIV
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1假病毒，不同企业或研究机构已通过MS2噬菌体构建了各类HIV
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1假病毒颗粒。已报道的商品化产品有用pol、gap、env等不同基因片段构建假病毒，但所选择的长度普遍在300bp
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500bp，导致构建的假病毒颗粒的应用范围严重受到限制，只与相对应的试剂盒相匹配，这也是目前各类HIV
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1病毒载量检测试剂盒不能共用质控品和定量存在差异性的主要原因。其它缺点包括：1.受限于重组病毒的基因序列，不能涵盖所有可能存在的病毒变异类型；2.由于制备过程中的种种因素，例如杂交效率，制备得到的重组病毒可能存在一定的变异率，影响其使用的精确性和可靠性；3.与使用临床样本制备质控品相比，使用重组病毒制备的质控品对于不同HIV
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1亚型的覆盖可能会有所欠缺；4制备和保存条件严格，需要专业的技术和设备支持。此外，采用常规的假病毒构建手段，限制了插入的外源片段的大小，有研究证实，超过500bp其包装效率快速降低，使得假病毒产率大大的下降，将HIV
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1各基因片段序列串联连接到质粒上，其包装片段的大小超过500bp，影响包装效率，即假病毒颗粒的得率下降。因此，亟需一种制备简单，病毒载量覆盖范围广，基质效应小，安全且品质良好的HIV
‑
1病毒载量检测能力验证质控品。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种基于8E5细胞的HIV
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1病毒载量检测能力验证质控品的制备方法及应用，得到的质控品不仅具有较强的病毒颗粒性和免疫原性，可以
较好模拟真实HIV
‑
1病毒颗粒，适用于各类商品化HIV
‑
1病毒载量检测试剂盒，而且病毒载量覆盖范围广、基质效应小，具有较强的均一性和稳定性。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供了以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种基于8E5细胞的HIV
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1病毒载量检测能力验证质控品的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
[0007]8E5细胞培养物离心去除沉淀细胞，得到细胞上清液；
[0008]利用人源HIV
‑
1阴性血浆对所述细胞上清液进行倍比稀释即可得到所述HIV
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1病毒载量检测能力验证质控品。
[0009]优选的，所述8E5细胞培养物由8E5细胞依次经复苏、培养与计数后得到。
[0010]更优选的，所述培养的时间为3
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5天。
[0011]优选的，所述离心的条件为1500
‑
1700rpm/min，离心5
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7min。
[0012]优选的，所述细胞上清液中HIV
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1病毒载量浓度介于107‑
108拷贝/mL。
[0013]优选的，所述倍比稀释后的HIV
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1病毒载量介于103‑
107拷贝/mL。
[0014]本专利技术还提供了利用上述方法制备得到的HIV
‑
1病毒载量检测能力验证质控品。
[0015]本专利技术还提供了上述方法或上述的质控品在HIV
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1病毒载量检测能力验证中的应用。
[0016]本专利技术提供了一种基于8E5细胞的HIV
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1病毒载量检测能力验证质控品的制备方法。基于8E5细胞培养上清液，利用人源HIV
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1阴性血浆倍比稀释，制备得到了无生物传染危险性，包含HIV
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1各基因片段且适用于各类商品化HIV
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1病毒载量检测试剂盒的能力验证质控品。经试验证实可知，本专利技术所述的质控品通过细胞培养，易于大规模制备；而且，所述质控品具有病毒颗粒性及免疫原性，可以很好地模拟真实病毒颗粒，用来完成从HIV
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1病毒的RNA提取、逆转录扩增到检测的整个过程；同时所述质控品基质效应小，不同浓度的质控品变异系数均小于5％，具有良好的均一性和较强的生物稳定性。
附图说明
[0017]图1为不同培养时间细胞上清液的病毒载量值。
[0018]图2为质控品的线性范围测定。
[0019]图3为不同浓度的病毒载量检测能力验证质控品。
[0020]图4为质控品扩增产物电泳图。
[0021]图5中，A为8E5细胞分泌的非感染性病毒颗粒；B为被HIV
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1病毒感染细胞分泌的感染性病毒颗粒。
[0022]图6为质控品基因组序列分析序列图：其中，A为与HXB2标准株基因序列对比图；B为质控品POL区分析图。
[0023]图7中，A为质控品同源性分析图；B为质控品进化树分析图。
[0024]图8为不同类型商品化HIV
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1病毒载量检测试剂盒的可适性。
[0025]图9为基质效应评价图。
具体实施方式
[0026]本专利技术提供了一种基于8E5细胞的HIV
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1病毒载量检测能力验证质控品的制备方
法，所述制备方法包括如下步骤：
[0027]8E5细胞培养物进行离心去除沉淀细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于8E5细胞的HIV
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1病毒载量检测能力验证质控品的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：8E5细胞培养物离心去除沉淀细胞，得到细胞上清液；利用人源HIV
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1阴性血浆对所述细胞上清液进行倍比稀释即可得到所述HIV
‑
1病毒载量检测能力验证质控品。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述8E5细胞培养物由8E5细胞依次经复苏、培养与计数后得到。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述培养的时间为3
‑
5天。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述离心的条件为1500
‑
1700rpm/m...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕毅，金聪，姚均，邢文革，潘品良，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：