人源化广谱抗新型冠状病毒单克隆抗体及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人源化广谱抗SARS

【技术实现步骤摘要】
人源化广谱抗新型冠状病毒单克隆抗体及应用


[0001]本专利技术公开了一种多肽，更具体地，本专利技术公开一种抗体。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒（SARS Cov
‑
2，也称为2019
‑
nCov） 属于正链 RNA 病毒的一种，属于冠状病毒家族的
ꢀßꢀ
属，其编码四种结构蛋白：spike (S), envelope(E), membrane (M)，nucleocapsid (N)，16 种非结构蛋白及 5
‑
8 种辅助蛋白质。SARS Cov
‑
2利用病毒表面的 S 蛋白与宿主细胞受体
‑
血管紧张素转换酶 II（ACE2）进入细胞。S 蛋白根据蛋白结构功能又被分为两个功能单位，即 S1 和 S2 蛋白亚基。S1 可分为 NTD（N
‑
terminal domain）和 RBD（Receptor binding site），RBD 区域长约 240 个氨基酸，主要与宿主细胞受体结合，S2 在病毒和细胞膜融合起作用。根据已有的报导，中和抗体主要作用于 RBD 区域，抗体结合于 RBD，阻碍 RBD 与ACE2 的结合，从而阻止病毒感染细胞。
[0003]目前国内外均有新冠中和抗体的分离研究报道，采用单细胞分选、抗体基因组深度测序方法，一批针对 RBD 的人源化单克隆抗体被分离出来，如 LYCoV555, REGN
‑
COV2, TY027, CT
‑r/>P59, JS016, BRII
‑
196, BRII
‑
198 and SCTA01等，这些抗体展现出了较强的体外中和活性（IC50<1μg/ml），在表达 ACE2 的转基因小鼠动物体内也展现出了较好的治疗效果，可以显著降低小鼠肺部的病毒载量。但 SARS
‑
Cov
‑
2 处于不断变异中，一旦感染了中和表位发生变异的病毒，则已有的中和抗体将不再具有中和作用。尤其是Omicron毒株快速流行以来，由于其较强的传播能力和多变异位点，与Alpha、Beta、Gamma和Delta毒株一起被世界卫生组织并列为VOC（Variants of concern, 受关注的变异病毒）。现有上市的单克隆抗体对Omicron中和能力大幅下降，甚至完全失效。因此，有必要分离出更多的强效广谱中和抗体作为备选，才可以更有效地避免病毒发生免疫逃逸。本专利技术的目的就是提供一组具有广谱高中和活性抗新型冠状病毒单克隆抗体，在此基础上提供所述高中和活性抗新型冠状病毒单克隆抗体在制备新冠病毒病治疗药物中的应用。

技术实现思路

[0004]基于上述专利技术目的，本专利技术首先提供了一种人源化广谱抗新型冠状病毒单克隆抗体，所述抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如下所示：（1）SEQ ID NO.1的第26
‑
33、51
‑
58 和97
‑
110位氨基酸以及SEQ ID NO.3的第27
‑
38、56
‑
58、95
‑
103位氨基酸；或者（2）SEQ ID NO.5的第26
‑
33、51
‑
57和96
‑
106位氨基酸以及SEQ ID NO.7的第27
‑
33、51
‑
53和90
‑
94位氨基酸；或者（3）SEQ ID NO.9的第26
‑
33、51
‑
58 和97
‑
112位氨基酸以及SEQ ID NO.11的第27
‑
33、51
‑
53、90
‑
98位氨基酸；（4）SEQ ID NO.13的第26
‑
33、51
‑
58 和97
‑
112位氨基酸以及SEQ ID NO.15的第
27
‑
33、51
‑
53、90
‑
98位氨基酸。
[0005]在一个优选的实施方案中，所述抗体重链的可变区以及轻链的可变区的氨基酸序列分别如下所示：（1）SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.3，具有该技术方案的抗体在本专利技术中被命名为“SWB8”；或者（2）SEQ ID NO.5以及SEQ ID NO.7，具有该技术方案的抗体在本专利技术中被命名为“LHC11”；或者（3）SEQ ID NO.9以及SEQ ID NO.11，具有该技术方案的抗体在本专利技术中被命名为“LHD2”；（4）SEQ ID NO.13以及SEQ ID NO.15；具有该技术方案的抗体在本专利技术中被命名为“LHD7”。
[0006]在一个更为优选的实施方案中，所述抗体重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示，所述抗体轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO.19所示。
[0007]其次，本专利技术还提供了一种编码上述人源化广谱抗新型冠状病毒单克隆抗体的多核苷酸，编码所述抗体重链的可变区的多核苷酸以及编码所述抗体轻链的可变区的多核苷酸组合分别如下所示：（1）SEQ ID NO.2以及SEQ ID NO.4，具有该技术方案的抗体在本专利技术中被命名为“SWB8”；或者（2）SEQ ID NO.6以及SEQ ID NO.8，具有该技术方案的抗体在本专利技术中被命名为“LHC11”；或者（3）SEQ ID NO.10以及SEQ ID NO.12，具有该技术方案的抗体在本专利技术中被命名为“LHD2”；（4）SEQ ID NO.14以及SEQ ID NO.16，具有该技术方案的抗体在本专利技术中被命名为“LHD7”。
[0008]在一个优选的实施方案中，编码所述抗体重链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示，所述抗体轻链恒定区的多核苷酸序列如SEQ ID NO.20。
[0009]第三，本专利技术还提供了一种表达上述人源化广谱抗新型冠状病毒单克隆抗体的载体，所述载体含有上述编码所述抗体重链的可变区的多核苷酸以及编码所述抗体轻链的可变区的多核苷酸，所述载体可以是基因工程中常规使用的真核表达载体，在本专利技术的一个具体实施方案中，所述载体为 IgH（重链表达载体）、Igκ（κ轻链表达载体）、Igλ（λ轻链表达载体）（具体参见Tiller et al. Efficient generation of monoclonal antibodies from single human B cells by single cell RT
‑
PCR and expression vector cloning, J Immunol Methods. 2008 January 1; 329(1
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人源化广谱抗新型冠状病毒单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如下所示：（1）SEQ ID NO.1的第26
‑
33、51
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58 和97
‑
110位氨基酸以及SEQ ID NO.3的第27
‑
38、56
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58、95
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103位氨基酸；或者（2）SEQ ID NO.5的第26
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33、51
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57和96
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106位氨基酸以及SEQ ID NO.7的第27
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33、51
‑
53和90
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94位氨基酸；或者（3）SEQ ID NO.9的第26
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33、51
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58 和97
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112位氨基酸以及SEQ ID NO.11的第27
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33、51
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53、90
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98位氨基酸；（4）SEQ ID NO.13的第26
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33、51
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58 和97
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112位氨基酸以及SEQ ID NO.15的第27
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33、51
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53、90
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98位氨基酸。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体重链的可变区以及轻链的可变区的氨基酸序列分别如下所示：（1）SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.3；或者（2）SEQ ID NO.5以及SEQ ID NO.7；或者（3）SEQ ID NO.9以及SEQ ID NO.11；或者（4）SEQ ID NO.13以及SEQ ID NO.15。3.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示，所述抗体轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO.19所示。4.一种编码权利要求2或3所述人源化广谱抗新型冠状病毒单克隆抗体的多核苷酸，其特征在于，编码所述抗体重链的可变区的多核苷酸以及编码所述抗体轻链的可变区的多核苷酸组合分别如下所示：（1）SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵一鸣，王铮，李丹，苏俊威，靳昌忠，任莉，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：