一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物及其应用，通过FAM、HEX、ROX(修饰)三通道多重PCR反应对MTHFR和MTRR基因中的单核苷酸多态性位点进行检测。为了提高检测的简便性和特异性，通过探针分型的技术手段实现一管分型检测，使得整个操作以及反应过程简单化，并在此基础上，对探针进行锁核酸修饰和二级结构修饰，增加探针的Tm值，进一步提高探针结合的特异性的，最后通过调整引物对的配比、Taq酶的用量、镁离子的用量等，提高整个试剂盒的最低检测限、准确性和特异性，试剂盒最低检测浓度能够达到1ng/μL，准确性和特异性均能够达到100％。

A composition for detecting polymorphisms of MTHFR and MTRR genes and its application

The present invention discloses a composition for detecting the polymorphism of MTHFR and MTRR genes and its application, and detects single nucleotide polymorphism loci in MTHFR and MTRR genes by three channel multiplex PCR reaction of FAM, HEX and ROX (modified). In order to improve the detection of the simplicity and specificity of technology through the probe type implementation of tube type detection, which simplify the operation and reaction process, and on this basis, were locked nucleic acid modified and two structural modification of the probe, the probe Tm value increase, and further improve the specificity of probe binding the last, by adjusting the ratio of primer and Taq enzyme dosage, the dosage of magnesium ion, raise the minimum detection limit, accuracy of the whole kit and specific kit for the lowest detectable concentration can reach 1ng/ L, accuracy and specificity were able to reach 100%.

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物及其应用
本专利技术属于基因检测
，具体涉及一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的技术。
技术介绍
叶酸是一种水溶性B族维生素，因最初从菠菜叶中提取得到，故称为叶酸。叶酸是合成核酸所必须的元素，是细胞生长和组织修复所必需的物质，更是胚胎发育过程中不可缺少的营养素。近年来大量研究已经证实，叶酸缺乏是导致出生缺陷的主要原因。叶酸的临床功能除了预防胎儿神经管缺陷外，还能降低孕妇妊娠高血压、自发性流产和胎儿宫内发育迟缓、早产以及新生儿低出生体重等发病率。机体缺乏叶酸有两个方面的原因：一是叶酸摄入量不足，二是由于遗传(基因)突变导致机体对叶酸的利用能力低下。前者通过多食用富含叶酸食物，或适量补充叶酸制剂即可满足机体需求；而携带相关基因突变的人群，即使按常量补充叶酸，也不能满足机体代谢所需。叶酸代谢基因的差异，决定了叶酸利用能力的不同，因此，叶酸补充剂量应因人而异。参与叶酸代谢最重要的两个基因是亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶还原酶基因(MTRR)。研究发现，MTHFR的活性与C677T和A1298C基因位点有关本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物，其特征在于，所述组合物包括分别针对用于检测待检样品中与MTHFR和MTRR基因相关的特异性目的基因的引物对，包括：MTHFR677引物：MTHFR677基因正向引物(MTHFR677‑F):SEQ ID NO.1；MTHFR677基因反向引物(MTHFR677‑R):SEQ ID NO.2；MTHFR677‑CFP：SEQ ID NO.3；MTHFR677‑TFP：SEQ ID NO.4；MTHFR1298引物对：MTHFR1298基因正向引物(MTHFR1298‑F):SEQ ID NO.5；MTHFR1298基因反向引物(MTHFR129...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物，其特征在于，所述组合物包括分别针对用于检测待检样品中与MTHFR和MTRR基因相关的特异性目的基因的引物对，包括：MTHFR677引物：MTHFR677基因正向引物(MTHFR677-F):SEQIDNO.1；MTHFR677基因反向引物(MTHFR677-R):SEQIDNO.2；MTHFR677-CFP：SEQIDNO.3；MTHFR677-TFP：SEQIDNO.4；MTHFR1298引物对：MTHFR1298基因正向引物(MTHFR1298-F):SEQIDNO.5；MTHFR1298基因反向引物(MTHFR1298-R):SEQIDNO.6；MTHFR1298-AF：SEQIDNO.7；MTHFR1298-CFP：SEQIDNO.8；MTRR66引物对：MTRR66基因正向引物(MTRR66-F)：SEQIDNO.9；MTRR66基因反向引物(MTRR66-R)：SEQIDNO.10；MTRR66-AFP:SEQIDNO.11；MTRR66-GFP:SEQIDNO.12；内标引物对：HER2-F:SEQIDNO.13；HER2-R:SEQIDNO.14；HER2-FP:SEQIDNO.15；其中对MTHFR677-CFP、MTHFR1298-AF和MTRR66-AFP的5’端进行FAM修饰，3’端进行BHQ1修饰；对MTHFR677-TFP、MTHFR1298-CFP和MTRR66-GFP的5’端进行ROX修饰，3’端进行BHQ2修饰；对HER2-FP的5’端进行HEX修饰，3’端进行BHQ1修饰；在MTHFR677-CFP序列的第13位碱基C上增加锁核酸(LNA)的修饰；在MTHFR677-TFP序列的第13位碱基T上增加锁核酸(LNA)的修饰；在MTHFR1298-AF序列的第13位碱基A上增加锁核酸(LNA)的修饰；在MTHFR1298-CFP序列的第13位碱基C上增加锁核酸(LNA)的修饰；在MTRR66-AFP序列的第15位碱基A上增加锁核酸(LNA)的修饰；在MTRR66-GFP序列的第14位碱基G上增加锁核酸(LNA)的修饰。2.根据权利要求1所述的用于检测MTHFR和MTRR基因多态性的组合物，其特征在于，一人份加入量为：MTHFR677-F加入量0.1-0.3μL，MTHFR1298-F加入量0.1-0.3μL，MTRR66-F加入量0.1-0....

【专利技术属性】
技术研发人员：刘沛，王林海，
申请(专利权)人：北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11