一种检测ALDH2基因*2多态性的引物与方法技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，尤其涉及一种检测ALDH2基因*2多态性的引物与方法。本发明专利技术提供的检测ALDH2基因*2多态性的引物包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物。本发明专利技术提供的检测ALDH2基因*2多态性的引物与方法可以实现ALDH2基因*2多态性的特异性检测，检测特异性和灵敏度高，准确性和精密性好，可用于临床检测ALDH2基因*2多态性，检测结果可用于指导硝酸甘油临床合理用药与健康饮酒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测
，尤其涉及一种检测ALDH2基因*2多态性的引物与方法。
技术介绍
乙醛脱氢酶（ALDH2基因编码）是酒精代谢的关键酶，其突变可影响酒精代谢进而引起乙醛等有害物质的堆积，影响身体健康。ALDH2基因*2多态性(NM_000690.3:c.1510G>A,p.Glu504Lys)可导致乙醛脱氢酶酶活性显著降低，乙醛代谢至乙酸速度较慢，促进了体内乙醛的堆积。ALDH2基因*2基因多态性可导致饮酒后体内乙醛堆积，当血液中乙醛达到一定浓度时，会出现面红、头痛、心动过速、呼吸苦难等不适，表现为对酒精的不耐受性，称为面红反应。硝酸甘油是心绞痛急性发作时的常规首选药物，但该药的临床疗效常因人而异。研究显示，中国汉族人群中，硝酸甘油含服无效的比例高达25%以上，而ALDH2基因*2多态性与部分国人含服硝酸甘油治疗心绞痛无效相关。硝酸甘油主要的药理作用是通过舒张血管，降低心脏前后负荷，扩张冠状动脉，减少心肌耗氧，从而缓解心绞痛症状，而其舒张血管作用主要是通过释放NO所介导的。研究发现，乙醛脱氢酶是使硝酸甘油活化并释放NO的关键酶，硝酸甘油需先在体内经乙醛脱氢酶生物转化，然后才能释放出有药理活性的一氧化氮(NO)，发挥其抗心绞痛作用。ALDH2基因*2多态性导致乙醛脱氢酶酶活性显著降低，从而影响了硝酸甘油治疗心绞痛的有效率。检测ALDH2基因*2多态性对硝酸甘油的临床用药及指导人们健康饮酒具有重要的意义。中国专利申请201510085568.2公开了一种检测ADH1B基因的单一核苷多型性R49H的基因型和ALDH2基因的单一核苷多型性E487K的基因型的引物组和定序引物，但其用于检测ALDH2基因*2和ADH1B基因*2多态性准确度不足。现有技术缺少一种检测特异性和灵敏度高、准确性和精密性好的ALDH2基因*2多态性检测引物及其方法。
技术实现思路
为解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种检测ALDH2基因*2多态性的引物与方法，具有检测特异性和灵敏度高，准确性和精密性好等优点，实现了ALDH2基因*2多态性的检测。本专利技术检测的位点为ALDH2基因*2(NM_000690.3:c.1510G>A，p.Glu504Lys，rs671)。本专利技术提供一种检测ALDH2基因*2多态性的引物，包括PCR扩增引物和SNaPshotPCR引物；所述PCR扩增引物为上游引物5’-TGGTGGCTACAAGATGTCG-3’(SEQIDNO.1)和下游引物5’-GCAGGTCCCACACTCACA-3’(SEQIDNO.2)；所述SNaPshotPCR为针对5’-ACGGGCTGCAGGCATACACT-3’(SEQIDNO.3)。采用上述技术方案，本专利技术提供的检测ALDH2基因*2多态性的引物，可以实现ALDH2基因*2多态性的特异性检测，准确性好。相应地，本专利技术还提供一种检测ALDH2基因*2多态性的方法，包括如下步骤：S1、提取DNA样品；S2、以步骤S1所述的DNA样本为模板，利用权利要求1中所述的PCR扩增引物进行多重PCR扩增，并对扩增产物进行纯化，；S3、以步骤S2所述的纯化后的PCR扩增产物为模板，利用权利要求1中所述的SNaPshotPCR引物进行SNaPshotPCR扩增，并对SNaPshotPCR扩增产物进行纯化；S4、采用毛细管电泳技术对步骤S3所述的纯化后的SNaPshotPCR扩增产物进行检测，并对检测结果进行分析，确定SNP位点及其基因型。优选地，所述步骤S1中的DNA样品为EDTA抗凝外周血的DNA样品。优选地，所述步骤S2中的多重PCR扩增反应条件包括：98℃预变性3min，98℃变性10s，58℃退火30s，72℃延伸1min，进行29个循环，最后72℃延伸5min，结束后25℃保温。优选地，所述步骤S3中的SNaPshotPCR扩增反应条件包括：96℃变性10s，55℃退火5s，60℃延伸30s，进行25个循环，结束后4℃保温。优选地，所述步骤S4中，采用GENEMAPPERIDV4.1软件对检测结果进行分析。此外，本专利技术还提供检测ALDH2基因*2多态性的引物在制备检测ALDH2基因*2多态性试剂中的用途。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种检测ALDH2基因*2多态性的引物，该引物的特异性和准确性好，可用于实现ALDH2基因*2多态性的检测，检测效率高。此外，本专利技术还提供了一种检测ALDH2基因*2多态性的SNaPshot法，通过使用特异性的PCR扩增引物和SNaPshotPCR引物，具有特异性好、灵敏度高、准确性和精密性好等优点，检测结果可以为硝酸甘油的临床用药与健康饮酒提供指导。附图说明图1本专利技术提供的ALDH2基因*2引物的部分扩增片段。图2本专利技术提供的ALDH2基因*2引物扩增产物的部分测序图。图3样品的ALDH2基因*2多态性检测结果图。具体实施方式以下内容是结合具体的优选实施方式对本专利技术所作的进一步详细说明，不能认定本专利技术的具体实施只局限于这些说明。对于本专利技术所属
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本专利技术的保护范围。实施例一引物专利技术人针对ALDH2基因*2的基因多态性位点，设计了大量引物，通过引物反应条件的优化和比较，筛选出了特异性好的引物。本专利技术提供的引物如表1所示。本专利技术提供的所有引物序列均通过UCSC数据库比对，无已知SNP位点。实施例二引物的特异性将本专利技术提供的ALDH2基因*2引物于UCSC中进行Blasting，结果如下：ALDH2基因*2扩增片段位于chr12：112241598+112241871，长度为274bp。ALDH2基因*2特异引物的扩增片段及基因组位置如图1所示，引物的扩增片段覆盖了相应的检测位点ALDH2基因*2，无其它同源基因。使用表1中PCR扩增引物分别对检测样品DNA进行扩增及Sanger测序，部分测序结果如图2所示。测序结果显示，引物扩增片段与ALDH2基因*2基因参考序列吻合。ALDH2基因*2基因参考序列号为ALDH2NC_000012.12，NM_000690.3。使用表1中SNaPshotPCR引物，SNaPshot法进行检测，部分结果如图3所示。从图3可知，产物峰的相对位置及测序反应掺入的碱基与预期相符，且无其它干扰峰。实施例三ALDH2基因*2多态性的检测1、提取EDTA抗凝外周血的DN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测ALDH2基因*2多态性的引物，其特征在于：包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；所述PCR扩增引物为上游引物5’‑TGGTGGCTACAAGATGTCG‑3’和下游引物5’‑GCAGGTCCCACACTCACA‑3’；所述SNaPshot PCR引物为5’‑ACGGGCTGCAGGCATACACT‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种检测ALDH2基因*2多态性的引物，其特征在于：包括PCR扩增引物和SNaPshot
PCR引物；所述PCR扩增引物为上游引物5’-TGGTGGCTACAAGATGTCG-3’和下游引物5’-
GCAGGTCCCACACTCACA-3’；所述SNaPshotPCR引物为5’-ACGGGCTGCAGGCATACACT-3’。
2.一种检测ALDH2基因*2多态性的方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1、提取DNA样品；
S2、以步骤S1所述的DNA样本为模板，利用权利要求1中所述的PCR扩增引物进行多重
PCR扩增，并对扩增产物进行纯化；
S3、以步骤S2所述的纯化后的PCR扩增产物为模板，利用权利要求1中所述的SNaPshot
PCR引物进行SNaPshotPCR扩增，并对SNaPshotPCR扩增产物进行纯化；
S4、采用毛细管电泳技术对步骤S3所述的纯化后的SNaPshotPCR扩增产物进行检测，
并对检测结果进行分析，确定SNP位点及其基因型。
3....

【专利技术属性】
技术研发人员：燕启江，赵薇薇，胡昌明，梁耀铭，于世辉，郭周萍，
申请(专利权)人：广州金域体检门诊部有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44