一种检测RUNX1rs2268277基因多态性的引物及其PCR方法技术

本发明专利技术公开了一种用PCR方法检测RUNX1rs2268277基因多态性位点的引物对RUNXF/RUNXR，其序列分别如SEQ ID NO.1和2所示。还公开了引物对RUNXF/RUNXR在检测生物样品RUNX1rs2268277基因多态性位点方面的应用，以及由其制备的RUNX1rs2268277基因多态性位点检测试剂盒。利用本发明专利技术的引物对及其PCR方法，可以根据扩增电泳结果确定RUNX1rs2268277基因多态性位点的基因型，对巯基嘌呤类药物的疗效和副作用进行预测，在基因型分析的基础上可以预测患者使用巯基嘌呤类药物的有效性和安全性，指导临床用药，使患者能够进行个体化医疗。

【技术实现步骤摘要】
一种检测RUNX1rs2268277基因多态性的引物及其PCR方法
本专利技术属于医学生物
更具体地，涉及一种检测RUNX1rs2268277基因多态性的引物及其PCR方法。
技术介绍
临床上，硫嘌呤类药物（巯基嘌呤类药物）应用广泛。但是，该类药物的不良反应发生率较高，包括骨髓抑制、肝脏损害、胃肠紊乱、胰腺炎和流行感冒样症状等。目前的研究认为，巯基嘌呤类药物的不良反应可能与药物的代谢途径及基因多态性有关。巯基嘌呤甲基转移酶（thiopurinemethyltransferase，TPMT）和三磷酸肌苷焦磷酸酶（inosinetriphosphatepyrophosphatase，ITPA）是巯基嘌呤类药物的代谢酶，其中TPMT是巯基嘌呤类药物代谢的关键酶，TPMT和ITPA存在明显的遗传多态性。但是仍然有部分患者的不良反应的发生，无法解释。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用PCR方法检测RUNX1rs2268277基因多态性位点的引物对RUNXF/RUNXR。可以根据电泳结果确定RUNX1rs2268277基因多态性位点的基因型，结合个体的其他生物学指标对于巯基嘌呤类药物的疗效和副作用进行预测，克服了临床选择巯基嘌呤类药物的盲目性，在基因型分析的基础上可以预测患者使用巯基嘌呤类药物的有效性和安全性，指导临床用药，使患者能够进行个体化医疗。本专利技术的另一目的是提供上述引物对RUNXF/RUNXR在制备通过PCR扩增生物样品检测RUNX1rs2268277基因多态性位点的试剂中的应用。本专利技术的再一目的是提供一种包含上述引物对RUNXF/RUNXR的RUNX1rs2268277基因多态性位点检测试剂盒。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：一种用PCR方法检测RUNX1rs2268277基因多态性位点的引物对RUNXF/RUNXR，其序列分别如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。上述引物对RUNXF/RUNXR在检测生物样品RUNX1rs2268277基因多态性位点方面的应用，也在本专利技术的保护范围之内。一种通过PCR扩增生物样品检测RUNX1rs2268277基因多态性位点的方法，是以待测生物样品的DNA为模板，以上述引物对RUNXF/RUNXR进行PCR扩增，根据扩增结果确定RUNX1rs2268277基因多态性位点的基因型。其中，所述待测生物样品为患者外周血。优选地，所述PCR扩增的反应体系为25μl，包括：DNA模板3μl，10×Taqbuffer2.5μl，0.25mmol/LdNTPs2μl，10μmol/L上下游引物各1μl，5U/μlExTaq®0.15μl，余量ddH2O。优选地，所述PCR扩增的反应条件为：94℃2min；94℃30s，62℃30s，72℃30s，20个循环；72℃7min；4℃保存。另外，上述引物对RUNXF/RUNXR在制备通过PCR扩增生物样品检测RUNX1rs2268277基因多态性位点的试剂盒中的应用，以及包含上述引物对RUNXF/RUNXR的RUNX1rs2268277基因多态性位点检测试剂盒，也在本专利技术的保护范围之内。优选地，所述试剂盒还含有dNTPs、ExTaq聚合酶。优选地，所述试剂盒还含有0.25mmol/L的dNTPs、5U/μl的ExTaq聚合酶。本专利技术上述引物对RUNXF/RUNXR以及用PCR方法检测RUNX1rs2268277基因多态性位点的方法和试剂盒，可以用于检测RUNX1rs2268277基因多态性位点的基因型。本专利技术的引物对RUNXF/RUNXR以及用PCR方法可以检测RUNX1rs2268277基因多态性，RUNX1rs2268277基因多态性与巯嘌呤类药物不良反应有关，可根据扩增电泳结果确定RUNX1rs2268277基因多态性位点的基因型，对巯基嘌呤类药物的疗效和副作用进行预测，预测患者使用巯基嘌呤类药物的有效性和安全性，指导临床用药，使患者能够进行个体化医疗。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术公开了一种用PCR方法检测RUNX1rs2268277基因多态性位点的引物对RUNXF/RUNXR，其序列分别如SEQIDNO.1和2所示。利用本专利技术的引物对及其PCR方法，可以根据扩增电泳结果确定RUNX1rs2268277基因多态性位点的基因型，对巯基嘌呤类药物的疗效和副作用进行预测，在基因型分析的基础上可以预测患者使用巯基嘌呤类药物的有效性和安全性，指导临床用药，使患者能够进行个体化医疗，克服临床选择巯基嘌呤类药物的盲目性，避免用药不良反应。而且，本专利技术的方法简单易行，应用前景广泛。附图说明图1为基因分型结果的基因型电泳图谱（PCR-RFLP）；HW为野生型纯合子，HM为突变型纯合子，HT为突变杂合子。具体实施方式以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，本专利技术所用试剂和材料均为市购。实施例1检测RUNX1rs2268277基因多态性的引物及其PCR方法1、实验所需试剂及其配置（1）DNA提取试剂6mol/LNaI（上海生工生物工程技术服务有限公司，上海），氯仿，异丙醇，异戊醇，乙醇均为市售分析纯产品。（2）PCR扩增试剂ExTaq®酶（Takara公司，日本），合成引物（上海生工生物工程技术服务有限公司，上海）。（3）琼脂糖凝胶电泳试剂普通琼脂糖（Biowest公司，西班牙），低熔点琼脂糖（上海生物工程技术服务有限公司，上海），5×TBE电泳液储存液（0.45mol/LTris碱，0.45mol/L硼酸，0.01mol/LEDTA，调pH至8.0；Tris、硼酸、EDTA购自上海生工生物工程技术服务有限公司）稀释10倍使用，GoldviewTMNucleicAcidstain（北京赛百盛生物工程公司，北京）。（4）DL1000、DL2000DNALadderMarker（Takara公司，日本）。（5）0.5MEDTA溶液称取186.1gEDTA·2H2O于1L烧杯中，加800ml去离子水，充分搅拌，加NaOH调节pH至8.0，搅拌至完全溶解，加去离子水定容至1L，高温高压灭菌。（6）5×TBE溶液称取54gTris，27.5g硼酸，置于烧杯，加适量双蒸水搅拌溶解；加入0.5MEDTA溶液20ml，加双蒸水定容至1L，制成5×TBE储备液。储备液将稀释10倍为0.5×TBE溶液使用。（7）6MNaI溶液称取45gNaI置于烧杯中，加双蒸水搅拌溶解，定容至50ml，避光保存。2、实验所需主要仪器ABIGeneAmp®PCRSystem2700(AppliedBiosystems公司，美国)EppendorfMasterCycler®epGradientPCR仪（Eppendorf公司，德国）DYY－11131C型水平电泳槽（北京六一仪器厂，北京）DYY－6C型稳压稳流电泳仪（北京六一仪器厂，北京）EC3凝胶成像系统（UVP公司，美国）Eppendorf5417R低温离心机（Eppendorf公司，德国）富华SHA-C型恒温振荡水浴器（常州菲普实验仪器厂，江苏）DZF-6050真空干本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用PCR方法检测RUNX1rs2268277基因多态性位点的引物对RUNXF/RUNXR，其特征在于，其序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种用PCR方法检测RUNX1rs2268277基因多态性位点的引物对RUNXF/RUNXR，其特征在于，其序列分别如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。2.权利要求1所述引物对RUNXF/RUNXR在检测生物样品RUNX1rs2268277基因多态性位点方面的应用。3.一种通过PCR扩增生物样品检测RUNX1rs2268277基因多态性位点的方法，其特征在于，以待测生物样品的DNA为模板，以权利要求1所述引物对RUNXF/RUNXR进行PCR扩增，根据扩增结果确定RUNX1rs2268277基因多态性位点的基因型。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为25μl，包括：DNA模板3μl，10×Taqbuffer2.5μl，0.25mmol/LdNTPs2μl，...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄民，王雪丁，管少兴，郑洪，朱霞，周珊，张财斌，胡品津，高翔，郅敏，晁康，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44