本发明专利技术公开白细胞介素21（IL21）在制备检测或辅助检测、筛查或预测原发性胆汁性胆管炎(Primary Biliary Cholangitis,PBC)的产品中的应用。本发明专利技术还公开与原发性胆汁性胆管炎易感性显著相关的白细胞介素21的单核苷酸多态位点为：rs17005934、rs17005953、rs28517551、rs925550、rs60318098、rs1026157、rs6811183。本发明专利技术首次发现IL21的多个基因多态性位点与PBC的发生显著相关，可用于PBC发病风险预测的指标之一。
【技术实现步骤摘要】
与原发性胆汁性胆管炎关联的白细胞介素21及其应用
本专利技术属于免疫学领域，具体涉及与原发性胆汁性胆管炎关联的白细胞介素21(IL21)及其应用。
技术介绍
原发性胆汁性胆管炎(primarybiliarycholangitis,PBC)，旧称原发性胆汁性肝硬化(primarybiliarycirrhosis)，是一种累及肝内胆管系统的慢性进展性自身免疫性疾病，主要表现为肝内小胆管进行性破坏伴门脉炎症性改变，最终导致纤维化及肝硬化。本病主要发生于中年以上女性，男性病例仅占10％。随着对PBC疾病认识的不断提高和诊断方法的建立，PBC的发病率和患病率在全球呈上升趋势。2003年，在上海地区对5011个健康体检者的(26-85岁)PBC特异性抗线粒体抗体(AMA)(PDC-E2)进行筛查，发现AMA阳性率高于0.16％，在中年女性中高于0.3％[5]。2006年，在广东地区对8126个成年人(18-83岁)的普查中发现AMA(PDC-E2)的阳性率高于0.05％，在中年女性中高于0.15％。最近在上海地区对19012个居民的AMA筛查结果发现0.40％的男性和0.94％的女性AMA阳性，其中25人(0.13％)患有PBC。随着我国人口老龄化的加剧，PBC在我国将迅速发展成一种较常见的疾病，在2025年可能达到20-30万患者，到2050年可能高达35-50万患者。早期诊断和治疗是控制PBC疾病发展的最有效手段。目前对PBC的治疗缺少有效的办法，熊去氧胆酸是唯一对早期PBC患者(尤其是黄疸没有出现的患者)进行有效控制的药物，但无治愈作用，而挽救晚期PBC患者的唯一手段是实施肝脏移植。我国是病毒性肝炎高发的国家，PBC的临床症状与病毒性肝炎相似，PBC患者早期常被误诊为病毒性肝炎或药物性肝炎，严重影响了PBC患者的诊疗。因此，对PBC患者进行早期诊断和治疗，具有重要的社会意义。PBC具有很强的遗传易感性，患者的第一代亲属的PBC发病率比一般人群高100倍。综合北美、欧洲和日本的报道，PBC的家族发病率为3.8-9％。2005年，一项在北美的大规模调查结果显示，PBC病人直系亲属发病的相对危险度(oddsratio)高达10.7。通过PBC患者的同卵双生子进行分析，发现其共同发病率达63％。我们团队在过去四年对国内PBC患者的调查中发现了3对同卵双生的PBC患者，三对患者的姐妹发病症状和发病时间都非常接近，结合国际已有数据，PBC患者的同卵双生子共同发病率高达72.7％。自2009年以来，对白人PBC患者全基因组关联分析(GWAS)的一系列结果显示PBC具有很强的遗传易感性。以申请人为核心成员的北美PBC合作组采用GWAS和特定位点高密度基因多态性分析的方法，对北美PBC患者和对照人群进行队列分析，证实了PBC的遗传易感性与HLA-II类抗原、IL12A、IL12RB2、STAT4、IRF5、ch17q12-21、MMEL1和SPIB等位点密切相关，而且揭示了IL12信号传导通路和Toll-like受体(TLR)/TNF信号传导通路的异常可能导致PBC的发生。日本学者的小规模的GWAS研究也发现了TNFSF15位点与PBC密切相关。我国对PBC的遗传学研究已有一定的基础，国内的学者分别就HLA和CTLA4等基因位点与汉族PBC遗传易感性进行了初步研究。我们启动并完成了对1122例汉族PBC样品的Illumina中华芯片扫描工作，结合4046例对照数据，进行了大规模的队列分析，在国际上首次发现并证实了IL21的基因位点达到了GWAS显著性，并首次发现IL21在PBC患者血液中异常高表达，其表达程度与肝脏组织纤维化程度呈正比。目前国际上尚无专利文献提及IL21基因位点以及IL21与PBC的关系。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术所要解决的第一个技术问题是提供了IL21在制备检测或辅助检测、筛查或预测原发性胆汁性胆管炎的产品中的应用。本专利技术所要解决的第二个技术问题是提供了一系列与原发性胆汁性胆管炎显著相关的单核苷酸多态位点(SNP)，并找出其中与原发性胆汁性胆管炎易感性关联最显著的代表性位点，从而提供将所述的单核苷酸多态位点(SNP)用于评估原发性胆汁性胆管炎易感性的用途。本专利技术所要解决的第三个技术问题是提供了IL21在制备PBC动物模型中的应用。本专利技术所要解决的第四个技术问题是提供了IL21在制备PBC治疗药物方面的应用。技术方案：为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案为：第一方面，提供了IL21在制备检测或辅助检测、筛查或预测原发性胆汁性胆管炎的产品中的应用。我们启动并完成了对1122例汉族PBC样品的Illumina中华芯片扫描工作，结合4036例对照数据，进行了大规模的队列分析，在国际上首次发现并证实了IL21的基因位点达到了GWAS显著性，并首次发现IL21在PBC患者肝脏组织中表达程度与肝脏组织纤维化程度呈正比；具体通过全基因组关联分析，发现IL21的基因多态性与PBC发病有密切关系。第二方面提供了一系列与原发性胆汁性胆管炎易感性显著相关的IL21的单核苷酸多态位点，通过对1122例中国汉族PBC患者样品和4036例正常人样品为研究对象，使用了HumanOmniZhongHua-8(v1.1)扫描进行全基因组关联数据分析，进行基因多态性(SNP)的分型，利用芯片得到的数据，采用PLINK软件对所有多态位点的对比分析，发现IL21基因的多个SNP的频数在PBC和正常人群中有显著差异。与原发性胆汁性胆管炎易感性显著相关的IL21的单核苷酸多态位点为：rs17005934，等位基因为C/T；rs17005953，等位基因为T/C；rs28517551，等位基因为A/G；rs925550，等位基因为A/C；rs60318098，等位基因为G/A；rs1026157，等位基因为G/T；rs6811183，等位基因为T/G。第三方面，本专利技术通过对IL21位点的SNP进行连锁不平衡分析，发现多个SNP与rs925550，rs17005934的连锁关系。采用Sequenom的iPlex方法，针对其中rs925550，rs17005934多态性位点进行验证试验；并使用Impute2和PLINK软件，逻辑回归原理进行，以性别为共变量，按叠加效应模型分析；同样发现有显著差异；表1中的所有SNP均为在PBC和对照间有显著差别的基因多态位点，可用于对PBC的风险预测。第四方面，本专利技术通过使用PLINK软件，逻辑回归原理进行分析评估每个SNP位点与原发性胆汁性胆管炎的关系，计算危险等位基因的相对危险度(Oddratio，OR)和95％的可信区间，得到这一系列SNP位点的危险等位基因。IL21的SNP位点的危险等位基因分别是：rs17005934多态性位点为C；s17005953，多态性位点为T；rs28517551多态性位点为A；rs925550多态性位点为A；rs60318098多态性位点为G；rs1026157，多态性位点为G；rs6811183多态性位点为T。第五方面，本专利技术通过对IL21特异的组织化学分析对30例PBC患者，30例自身免疫肝炎患者(AIH)，25例慢性乙型肝炎患者(CHB)，和6例健康对照(HC)的本文档来自技高网...
【技术保护点】
IL21在制备检测或辅助检测、筛查或预测原发性胆汁性胆管炎的产品中的应用。
【技术特征摘要】
1.IL21在制备检测或辅助检测、筛查或预测原发性胆汁性胆管炎的产品中的应用。2.IL21基因多态位点rs17005934的试剂在制备检测或辅助检测、筛查或预测原发性胆汁性胆管炎的产品中的应用，rs17005934序列如序列表中的SEQIDNO.1所示，其中，单核苷酸n为C的携带者原发性胆汁性胆管炎的风险高于等位基因T。3.IL21基因多态位点rs17005953的试剂在制备检测或辅助检测、筛查或预测原发性胆汁性胆管炎的产品中的应用，rs17005953序列如序列表中的SEQIDNO.2所示，其中，单核苷酸n为T的携带者原发性胆汁性胆管炎的风险高于等位基因C。4.IL21基因多态位点rs28517551的试剂在制备检测或辅助检测、筛查或预测原发性胆汁性胆管炎的产品中的应用，rs28517551序列如序列表中的SEQIDNO.3所示，其中，单核苷酸n为A的携带者原发性胆汁性胆管炎的风险高于等位基因G。5.IL21基因多态位点rs925550的试剂在制备检测或辅助检测、筛查或预测原发性胆汁性胆管炎的产品中的应用rs92...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘向东，马雄，陈卫昌，史兴娟，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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