用于检测血浆中游离微卫星不稳定状态的组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了用于检测血浆中游离微卫星不稳定状态的组合物及其应用，综合检测单核苷酸重复位点BAT‑26、BAT‑25、NR‑21、NR‑24、NR‑27、Mono‑27，用于血浆CtDNA中MSI的检测，为了提高6个单核苷重复位点检测灵敏度，对其位点进行特殊的设计，对于blocker引物3’端的修饰进行体系筛选，最终确定ddC 3’端修饰，能够打破常规测序检测灵敏度低(灵敏度20％左右)的瓶颈，能够简单快速且检测灵敏度达到突变低于1％的检测方法，最终本发明专利技术对于MSI的检测不仅提高其在组织中的检测性能，同样依靠其超灵敏性应用到血浆CtDNA中MSI的检测。

Composition for detecting the unstable state of free microsatellite in plasma and its application

【技术实现步骤摘要】
用于检测血浆中游离微卫星不稳定状态的组合物及其应用
本专利技术属于基因检测的
，具体涉及一种用于检测血浆中游离微卫星不稳定状态的组合物及其应用。
技术介绍
目前，微卫星是由2～6个核苷酸的串联重复片段构成，由于重复单位的重复次数在个体间呈高度变异性并且数量丰富，因此微卫星标记应用广泛。在肿瘤细胞中，错配修复系统中相关基因(MismatchRepair,MMR)缺失时,可导致微卫星重复序列不稳定(微卫星突变)，导致其序列缩短或延长，从而引起微卫星不稳定(microsatelliteinstability,MSI)。根据MSI不稳定的程度，可分为微卫星高度不稳定(microsatelliteinstability-high,MSI-H)，微卫星低度不稳定(microsatelliteinstability-low,MSI-L)和微卫星稳定(microsatellitestable,MSS)型。结直肠癌(ColorectalCancer,CRC)发生的遗传因素包括染色体不稳定性(ChromosomeInstability,CIN)和微卫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测血浆中游离微卫星不稳定状态的组合物，其特征在于，所述组合物由分别针对用于检测待检样品中与游离微卫星不稳定状态相关的特异性目的基因的引物对组成，为：/nNR-21基因正向引物F(NR-21-F)：SEQ ID NO.1，/nNR-21基因反向引物R(NR-21-R)：SEQ ID NO.2，/nNR-21基因blocker(NR-21-B)：SEQ ID NO.3-ddC；/nNR-27基因正向引物F(NR-27-F)：SEQ ID NO.4，/nNR-27基因反向引物R(NR-27-R)：SEQ ID NO.5；/nNR-27基因blocker(NR-27-B)：SEQ ID ...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测血浆中游离微卫星不稳定状态的组合物，其特征在于，所述组合物由分别针对用于检测待检样品中与游离微卫星不稳定状态相关的特异性目的基因的引物对组成，为：
NR-21基因正向引物F(NR-21-F)：SEQIDNO.1，
NR-21基因反向引物R(NR-21-R)：SEQIDNO.2，
NR-21基因blocker(NR-21-B)：SEQIDNO.3-ddC；
NR-27基因正向引物F(NR-27-F)：SEQIDNO.4，
NR-27基因反向引物R(NR-27-R)：SEQIDNO.5；
NR-27基因blocker(NR-27-B)：SEQIDNO.6-ddC；
MONO-27基因正向引物F(MONO-27-F)：SEQIDNO.7，
MONO-27基因反向引物R(MONO-27-R)：SEQIDNO.8，
MONO-27基因blocker(MONO-27-B)：SEQIDNO.9-ddC；
BAT-25基因正向引物F(BAT-25-F)：SEQIDNO.10，
BAT-25基因反向引物R(BAT-25-R)：SEQIDNO.11，
BAT-25基因blocker(BAT-25-B)：SEQIDNO.12-ddC；
BAT-26基因正向引物F(BAT-26-F)：SEQIDNO.13，
BAT-26基因反向引物R(BAT-26-R)：SEQIDNO.14，
BAT-26基因blocker(BAT-26-B)：SEQIDNO.15-ddC；
NR-24基因正向引物F(NR-24-F)：SEQIDNO.16，
NR-24基因反向引物R(NR-24-R)：SEQIDNO.17，
NR-24基因blocker(NR-24-B)：SEQIDNO.18-ddC；
PentaD基因正向引物F(PentaD-F)：SEQIDNO.19，
PentaD基因反向引物R(PentaD-R)：SEQIDNO.20；
PentaC基因正向引物F(PentaC-F)：SEQIDNO.21，
PentaC基因反向引物R(PentaC-R)：SEQIDNO.22；
Amel基因正向引物F(Amel-F)：SEQIDNO.23，
Amel基因反向引物R(Amel-R)：SEQIDNO.24。


2.根据权利要求1所述的用于检测血浆中游离微卫星不稳定状态的组合物，其特征在于，对NR-21基因、NR-27基因、MONO-27基因和PentaD基因的正向引物的5’端进行FAM修饰；对BAT-25基因、BAT-26基因和PentaC基因的正向引物的5’端进行HEX修饰；对NR-24基因和Amel基因的正向引物的5’端进行TMR修饰；实现一管内多重多通道荧光位点的检测。


3.根据权利要求1所述的用于检测血浆中游离微卫星不稳定状态的组合物，其特征在于，进行一次检测时，NR-21-F(100μM)加入量0.01-0.03μL，NR-21-R(100μM)加入量0.01-0.03μL，NR-21-B(100μM)加入量0.1-0.3μL，NR-27-F(10...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘沛，王林海，杨磊，
申请(专利权)人：北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11