一种鼻咽癌转移诊断和/或预后评估的生物标记制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别是涉及一种鼻咽癌转移诊断和/或预后评估的生物标记。MiR‑449b‑3p/ADAM17/NF‑κB蛋白作为生物标记物在制备鼻咽癌转移诊断和/或预后评估试剂、试剂盒或检测装置中的应用。本发明专利技术提供了一种鼻咽癌转移诊断和/或预后评估的生物标记。在本发明专利技术中，ADAM17活化的NF‑κB通过与miR‑449b‑3p启动子结合而负调节miR‑449b‑3p表达。本发明专利技术在miR‑449b‑3p，ADAM17和NF‑κB驱动的NPC转移中揭示了新的反馈环。该环可能揭示NPC转移和治疗失败的新分子机制。

A biomarker for metastasis diagnosis and / or prognosis evaluation of nasopharyngeal carcinoma

【技术实现步骤摘要】
一种鼻咽癌转移诊断和/或预后评估的生物标记
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种鼻咽癌转移诊断和/或预后评估的生物标记。
技术介绍
鼻咽癌(NPC)是东南亚最常见的恶性肿瘤之一，具有独特的特征，与Epstein-Barr病毒密切相关，转移率高。超过70％的鼻咽癌患者经常被诊断为晚期，这种情况与早期阶段隐藏症状导致的预后不良有关。放疗联合化疗可改善晚期鼻咽癌患者的局部区域控制，但远处转移仍是治疗失败的主要原因。因此，必须通过靶向一些候选分子来降低远处转移的速率。不幸的是，人们对NPC转移的潜在分子机制知之甚少。鼻咽癌是指发生于鼻咽腔顶部和侧壁的恶性肿瘤，是我国高发恶性肿瘤之一，发病率为耳鼻咽喉恶性肿瘤之首。鼻咽癌的发病部位隐蔽，早期症状不明显，难以早期发现，误诊误治率高。因此，对鼻咽癌进行筛查和诊断，尤其是创伤性低、取材方便的体液检查，对进行早期治疗，提高患者生存率具有重要意义。MicroRNAs(miRNAs)是一类约22个核苷酸(nt)的非编码单链RNA分子，在真核生物中可负调控基因表达。mirna在肿瘤进展中起重要作用，包括凋亡、增殖、侵袭和迁移。许多mirna，如miR-23a、miR-34a、miR-203a-3p、miR-101，都与鼻咽癌转移相关。然而，寻找新的鼻咽癌预测和治疗的分子靶点仍然具有挑战性。miR-449家族(miR-449a,miR-449b,miR-449c)对肿瘤转移影响的研究较少。Sandbothe等报道，miR-449家族作为肝癌的抑癌基因，能够抑制细胞迁移，诱导细胞死亡；然而，miR-449家族在鼻咽癌转移中的研究尚未见报道。解聚素和金属蛋白酶17(ADAM17)是ADAM家族的成员，可以处理单一的跨膜蛋白，如生长因子、细胞因子、趋化因子、疾病的受体和调节剂等。ADAM17在几种人类肿瘤中过表达，如鼻咽癌、前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌。NF-κB可作为NPC细胞转化和肿瘤发生过程中的转录因子(TF)。基于在线数据集搜索，本专利技术发现miR-449b-3p启动子中存在两个推定的NF-κB结合位点。此外，ADAM17可通过促进TNF信号传导来激活NF-κB信号通路。因此，本专利技术假设ADAM17可能通过激活NF-κB来调节miR-449b-3p的表达。
技术实现思路
本专利技术提供了一种鼻咽癌转移诊断和/或预后评估的生物标记。在本专利技术中，ADAM17活化的NF-κB通过与miR-449b-3p启动子结合而负调节miR-449b-3p表达。本专利技术在miR-449b-3p，ADAM17和NF-κB驱动的NPC转移中揭示了新的反馈环。该环可能揭示NPC转移和治疗失败的新分子机制。本专利技术的技术方案如下：MiR-449b-3p/ADAM17/NF-κB蛋白作为生物标记物在制备鼻咽癌转移诊断和/或预后评估试剂、试剂盒或检测装置中的应用。检测MiR-449b-3p/ADAM17/NF-κB蛋白表达的产品在鼻咽癌转移诊断和/或预后评估中的应用。一种鼻咽癌检测试剂盒，其特征在于，包括与MiR-449b-3p/ADAM17/NF-κB蛋白特异性结合的检测物。所述检测物包括与MiR-449b-3p/ADAM17/NF-κB蛋白特异性结合的引物对、探针和抗体中的至少一种。所述引物对序列如下：5'-GCATTCTCAAGTCTCCACAAG-3'和5'-CCTCATTCGGGGCACATTCTG-3'用于ADAM17,5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'和5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'用于U6和5'-GGACTTCGAGCAAGAGATGG-β-肌动蛋白的3'5'-AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3'；2-ΔΔCt-方法用于计算ADAM17和miR-449b-3p表达的倍数变化。本专利技术的有益效果是：本专利技术揭示异常下调的miR-449b-3p靶向ADAM17以促进NPC转移，并且ADAM17活化的NF-κB可依次转录抑制miR-449b-3p基因表达(如图7H中总结的)。理论上，miR-449b-3p，NF-κB抑制剂和ADAM17干扰可用于抑制NPC临床治疗中的转移。这项研究提供了对NPC侵袭和转移潜在机制的潜在新见解，并揭示了一种新的miR-449b-3p抑制NPC的转移的调节环。新出现的大量证据促进了对microRNAs(miRNAs)在肿瘤发生和进展中的作用的理解，但miRNAs在鼻咽癌(NPC)发展中的调节功能仍未得到充分阐明。在本专利技术中，本专利技术证明了miR-449b-3p在NPC标本(p<0.001)和细胞(p<0.05)中被下调。细胞学和动物实验证明miR-449b-3p能够抑制鼻咽癌的体内外转移。此外，揭示了解整合素和金属蛋白酶17(ADAM17)作为miR-449b-3p的直接靶标。拯救实验表明，miR-449b-3p中ADAM17的下调抑制了细胞，部分逆转了对细胞侵袭和迁移的抑制作用。荧光素酶报告基因测定、ChIP测定和Western印迹分析表明，ADAM17可以通过诱导NF-κB转录活动而相反地抑制启动子活性和miR-449b-3p的表达。总之，本专利技术的研究为NPC侵袭和转移的潜在机制提供了新的见解。NPC中的新型MiR-449b-3p/ADAM17/NF-κB反馈回路可能是NPC临床治疗的潜在靶点。附图说明图1A为本专利技术的MiR-449b-3p在鼻咽癌组织中的表达水平下调示意图。图1B为本专利技术的GEO数据库(GSE36682)的证实示意图。图1C本专利技术的鼻咽癌细胞系的miR-449b-3p表达明显低于长生代鼻咽癌上皮细胞NP-69的示意图。图2A为本专利技术选择了CNE2和SUNE1细胞进行进一步的研究，通过恢复miR-449b-3p在这两个细胞系中的表达的示意图。图2B为本专利技术mir-449b-3psd对SUNE1和CNE2细胞的增殖、集落形成和凋亡没有显著影响的示意图之一。图2C为本专利技术mir-449b-3psd对SUNE1和CNE2细胞的增殖、集落形成和凋亡没有显著影响的示意图之二。图2D为本专利技术mir-449b-3psd对SUNE1和CNE2细胞的增殖、集落形成和凋亡没有显著影响的示意图之三。图2E为本专利技术miR-449b-3p过表达显著抑制鼻咽癌细胞侵袭示意图。图2F本专利技术miR-449b-3p过表达显著抑制鼻咽癌细胞迁移示意图之一。图2G本专利技术miR-449b-3p过表达显著抑制鼻咽癌细胞迁移示意图之二。图3A为本专利技术选择了CNE2和SUNE1细胞进行进一步的研究，通过下调miR-449b-3p在这两个细胞系中的表达的示意图。图3B为本专利技术miR-449b-3p抑制则产生相反的作用示意图之一。图3C为本专利技术miR-449b-3p抑制则产生相反的作用示意图之二。图3D为本专利技术miR-449b-3p抑制则产生相反的作用示意图之三。图2H为本专利技术vim本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.MiR-449b-3p/ADAM17/NF-κB蛋白作为生物标记物在制备鼻咽癌转移诊断和/或预后评估试剂、试剂盒或检测装置中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.MiR-449b-3p/ADAM17/NF-κB蛋白作为生物标记物在制备鼻咽癌转移诊断和/或预后评估试剂、试剂盒或检测装置中的应用。


2.检测MiR-449b-3p/ADAM17/NF-κB蛋白表达的产品在鼻咽癌转移诊断和/或预后评估中的应用。


3.一种鼻咽癌检测试剂盒，其特征在于，包括与MiR-449b-3p/ADAM17/NF-κB蛋白特异性结合的检测物。


4.如权利要求3所述的鼻咽癌检测试剂盒，其特征在于，所述检测物包括与MiR-449b-3p/ADAM17/NF-κB蛋白特异性结合...

【专利技术属性】
技术研发人员：何侠，尹丽，邹美英，朱宏明，费倩，
申请(专利权)人：江苏省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32