一种与肉鸡生长性状相关的分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与肉鸡生长性状相关的分子标记及其应用，所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其中在SEQ ID NO:1的第二个内含子第1834bp处有一个T/C单核苷酸突变。所述分子标记可应用于中速型肉鸡的选育，包括以下步骤：待测鸡DNA的提取及扩增，将扩增产物进行测序和序列比对分型，育种时选择保留判定为杂合子基因型的个体。通过本发明专利技术提供的分子标记筛选得到的杂合子基因型个体70、77和84日龄体重显著高于纯合子个体，77日龄胫长和70日龄胫围也显著大于纯合子个体。本发明专利技术提供的分子标记有利于选育优势杂合子肉鸡，提高肉鸡的生产性能。

A molecular marker related to growth traits of Broilers and its application

The invention discloses a trait related molecular markers and its application and the growth of broilers, the molecular marker of the nucleotide sequence of SEQ ID NO:1 shows, including second introns in SEQ ID NO:1 1834bp with a T/C single nucleotide mutation. The molecular marker can be applied to the breeding of medium speed broilers, including the following steps: the extraction and amplification of chicken DNA, sequencing and sequence comparison of the amplified products, and selection of individuals with heterozygous genotype in breeding. The body weight of the heterozygous genotype individuals at 70, 77 and 84 days of age was significantly higher than that of homozygous individuals by the molecular markers provided by the invention, and the tibia length of 77 day old and 70 day old tibia girth were also significantly greater than those of homozygous individuals. The molecular marker provided by the invention is beneficial to breeding superior heterozygote broilers and improving the production performance of broilers.

【技术实现步骤摘要】
一种与肉鸡生长性状相关的分子标记及其应用
本专利技术涉及家禽遗传育种
，具体地，涉及一种与肉鸡生长性状相关的分子标记及其应用。
技术介绍
我国地方品种肉鸡资源非常丰富，但与国外快大型肉鸡相比生产性能较低。而生长是畜禽生产中非常重要的经济性状，因此肉鸡的生长性状一直是家禽育种的重点研究对象，解析生长性状对肉鸡的生长和育种具有重要意义。随着现代分子生物学技术的迅速发展而产生的新技术，能够从分子水平上快速准确地分析畜禽的遗传组成，从而实现对基因型的直接选择，利用分子标记辅助选择育种。肉鸡的生长性状为数量性状，受微效多基因控制，采用传统育种方法遗传进展缓慢，利用分子标记辅助选择结合传统育种可有效提高肉鸡生长性状的遗传进展，缩短育种时间。单核苷酸多态性（SingleNucleotidePolymorphisms，SNPs）具有双等位基因、易于统计、广泛分布于整个基因组等特性，是分子标记辅助选择的有力标记。寻找与肉鸡生长性状相关的SNPs，可应用于分子标记辅助选择育种，提高鸡生长性状遗传进展。Myc基因家族属于编码核蛋白的原癌基因，其产物可促进细胞增殖、永生化、去分化和转化等。c-Myc基因是Myc家族成员，该家族包含c-Myc、N-Myc、L-Myc、S-Myc和Myc-nick5个基因，其中的c-Myc是研究最多，也是功能最广的基因。研究表明鸡c-Myc作为重要的转录因子，可结合于众多microRNAs（miRNA）和长链非编码RNAs基因的启动子区调控它们的转录，包括miR-203、miR-20a-5p和miR-140-3p在内的多个肌肉发育相关miRNAs的转录，从而促进鸡成肌细胞增殖并抑制鸡成肌细胞分化，而胚胎期成肌细胞的增殖和分化影响着肌纤维的形成，决定着出生后肌肉的生长潜力。然而，目前现有技术中尚未有关于鸡c-Myc基因作为鸡生长性状的分子标记的报道。
技术实现思路
本专利技术为了克服现有技术的上述不足，提供一种与肉鸡生长性状相关的分子标记，该分子标记可应用于中速型肉鸡的选育，提高肉鸡的生产性能。本专利技术的另一个目的是提供一种与肉鸡生长性状相关的分子标记在中速型肉鸡选育中的应用。为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：一种与肉鸡生长性状相关的分子标记，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，其中在SEQIDNO:1的第二个内含子第1834bp处有一个T/C单核苷酸突变。所述分子标记位于鸡c-Myc基因（SEQIDNO:1）第二内含子区域的1834bp处，通过与鸡生长性状关联分析，发现该分子标记与鸡的多个生长性状显著相关，包括体重、胫长和胫围。其中杂合子TC型为优势基因型，等位基因T为优势等位基因，TC型个体的70、77和84日龄的体重显著大于野生型个体。本专利技术还请求保护所述分子标记在选育中速型肉鸡中的应用。一种应用与肉鸡生长性状相关的分子标记选育中速型肉鸡的方法，包括如下步骤：S1.提取待检测鸡的DNA；S2.目的片段的获得及测序：利用正反向引物对通过PCR扩增待测鸡的DNA，将获得的产物进行测序和序列比对分型；S3.根据序列比对分型的结果，育种时选择保留判定为杂合子基因型的个体。优选地，步骤S2中所述正反向引物对的序列如下所示：正向引物（SEQIDNO:2）：5’-CAGCGCCAGCCTCCCCAGCAAGAAC-3’；反向引物（SEQIDNO:3）：5’-CCTCGCTAACGTGGCATTTAACAG-3’。优选地，步骤S2中所述PCR扩增的反应条件为：98℃预变性2min，38次循环（98℃变性10s，65℃退火30s，72℃延伸20s），72℃延伸8min。优选地，步骤S2中所述PCR扩增的反应体系包括DNA模板、2×T5SuperPCRMix、5×EnhancerBuffer、正反向引物对。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：（1）通过本专利技术提供的分子标记筛选得到的杂合子基因型个体70、77和84日龄体重显著高于纯合子个体，77日龄胫长和70日龄胫围也显著大于纯合子个体。（2）本专利技术提供的分子标记有利于选育优势杂合子肉鸡，提高肉鸡的生产性能。附图说明图1为扩增目的序列和引物在c-Myc基因上的位置指示图。图2为c-Myc基因g.1834T>C位点基因分型结果图。具体实施方式下面结合说明书附图和具体实施例对本专利技术作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均为可从商业途径得到的试剂和材料。实施例1一种应用与肉鸡生长性状相关的分子标记选育中速型肉鸡的方法，包括如下步骤：1.鸡血样的采集和DNA的提取：被检测鸡群的系谱情况及生长性状测定完成后，翅下静脉采血约1mL，注入经高压灭菌并装有150μL2%无菌EDTA（Ethylenediaminetetraaceticacid,EDTA）抗凝剂的1.5mL离心管中，轻轻摇匀，记录翅号，-20℃保存备用。基因组DNA的抽提采用苯酚—氯仿抽提法（奥斯泊F等，1998）：（1）取全血30μL置于1.5mL离心管，分别加入470μL1×SET缓冲液、12.5μL20%SDS和6μL10mg/mL蛋白酶K，混合均匀后放于55℃水浴过夜；（2）向消化好的血液中加入500μL的Tris-饱和酚，轻摇20min，使溶液的两相充分混匀，6～8℃下转速10,000rpm离心10min；（3）取上清至另一干净的离心管中，再次加入500μL饱和苯酚，轻摇20min，转速10,000rpm离心10min；（4）取上清至另一干净的离心管中，再次加入500μL氯仿：异戊醇（23:1），轻摇20min，使溶液的两相充分混匀，6～8℃下转速10,000rpm离心10min；（5）转移上清至另一干净的离心管中，加入1mL无水乙醇（-20℃）来回摇摆以沉淀DNA，转速10,000rpm离心10min后倒出乙醇；（6）用1mL75%乙醇清洗DNA一次，倒掉乙醇，置于50℃干燥箱内烘干；（7）待DNA完全干燥后加入300μL灭菌后的TE溶液，50℃水浴锅中过夜以溶解DNA；（8）-20℃保存备用。2.鸡c-Myc基因目的片段的获得：根据UCSC数据库(http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgBlat)上鸡(Gallus_gallus-5.0/galGal5)c-Myc基因组DNA序列，该位点位于基因组2号染色体139847558处，利用生物学引物设计软件primerpremier5设计包含该位点的正反向引物，由上海生工生物工程技术服务公司合成。利用PCR技术对待测样品进行扩增，扩增目的序列和引物在c-Myc基因上的位置如图1所示。PCR反应混合体系如表1所示。表1PCR反应混合体系PCR反应程序为：98℃预变性2min；98℃变性10s，65℃退火30s，72℃延伸20s，38个循环；72℃延伸8min；16℃保存。3.待测样品PCR产物测序及基因型判定：取3μL的PCR产物（可直接点样），用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，并以DNAmarker2000作为参照。电泳检测合格的PCR产物获得的产物，委托北京擎科新业生物技本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与肉鸡生长性状相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其中在SEQ ID NO:1的第二个内含子第1834bp处有一个T/C单核苷酸突变。

【技术特征摘要】
1.一种与肉鸡生长性状相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，其中在SEQIDNO:1的第二个内含子第1834bp处有一个T/C单核苷酸突变。2.与肉鸡生长性状相关的分子标记在选育中速型肉鸡中的应用。3.一种应用与肉鸡生长性状相关的分子标记选育中速型肉鸡的方法，包括如下步骤：S1.提取待检测鸡的DNA；S2.目的片段的获得及测序：利用正反向引物对通过PCR扩增待测鸡的DNA，将获得的产物进行测序和序列比对分型；S3.根据序列比对分型的结果，育种时选择保留判定为杂合子基因型的个体。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋明雅，罗文，张细权，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44