以人ALDH2*2基因1510位点AA型为模板的阳性参考品制造技术

以人ALDH2*2基因1510位点AA型为模板的阳性参考品，其特征在于：所述阳性参考品是一种以碱基序列为主要成分的试剂，该碱基序列包含人ALDH2*2基因片段，所述人ALDH2*2基因片段如SEQ NO:5所示，其中，带有下划线的碱基位点是人ALDH2*2基因的1510位点，所述1510位点用于表征人ALDH2*2基因的AA型可突变为人ALDH2*2基因的GG型的位置。本发明专利技术用于验证被检样本中是否含有人ALDH2*2基因1510位点AA型这一检测结果是否准确，解决了人ALDH2*2基因的质量检测问题。

The positive reference material of human ALDH2*2 gene 1510 locus AA type was used as template

The ALDH2*2 1510 gene AA as positive reference template, which is characterized in that the positive reference is a kind of reagent to the base sequence as the main component, the nucleotide sequence containing ALDH2*2 gene fragment of the human ALDH2*2 gene such as SEQ NO:5 shows, the base site underlined. The human ALDH2*2 gene 1510 loci, 1510 loci for the AA characterization of ALDH2*2 gene mutation in GG ALDH2*2 gene location. The invention is used to verify whether the detected sample contains the human ALDH2*2 gene 1510 locus AA type, whether the detection result is accurate or not, and solves the quality detection problem of human ALDH2*2 gene.

【技术实现步骤摘要】
以人ALDH2*2基因1510位点AA型为模板的阳性参考品
本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及一种以人ALDH2*2基因1510位点AA型为模板的阳性参考品，该阳性参考品用于验证ALDH2*2基因型检测试剂盒在应用于样本检测时样本是否为阳性的辅助判断。
技术介绍
质控品是指用于体外诊断的质量控制物质，其具有已知浓度含量的目标检测物，为使人们确信某一产品或服务质量能满足规定的质量要求所必须的产品。质控品的使用目的是为了验证整个PCR反应过程具有准确性、有效性和特异性，并监控检测系统的状态。仪器在正式投入使用后，应定期对其校准，避免由于仪器原因导致的实验偏差。再次，在收到每批新试剂后，应首先对其进行预实验，确证新试剂质量后，再用于对临床标本的检测。但是据申请人了解，目前在检测人ALDH2*2基因1510位点AA型质量控制方面没有阳性参考品。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种以人ALDH2*2基因1510位点AA型为模板的阳性参考品，用于验证被检样本中是否含有人ALDH2*2基因1510位点AA型这一检测结果是否准确，解决了人ALDH2*2基因的质量检测问题。为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种以人ALDH2*2基因1510位点AA型为模板的阳性参考品，该阳性参考品是一种以碱基序列为主要成分的试剂，该碱基序列包含人ALDH2*2基因片段，所述人ALDH2*2基因片段为5’-GAGCCCAGTCACCCTTTGGTGGCTACAAGATGTCGGGGAGTGGCCGGGAGTTGGGCGAGTACGGGCTGCAGGCATACACTAAAGTGAAAACTGTGAGTGTGGGACCTGCTGGGGGCTCAGGGCCTGTTGGGGCTTGAGGGCTGCTGGTGGCTCGGAGCCT-3’，其中，带有下划线的碱基位点是人ALDH2*2基因的1510位点，所述1510位点用于表征人ALDH2*2基因的AA型可突变为人ALDH2*2基因的GG型的位置。上述技术方案中的有关内容解释如下：1、上述方案中，所述阳性参考品中还含有缓冲试剂，该缓冲试剂选自pH7.6的Tris-HCl缓冲液或pH7.6的TE缓冲液。2、上述方案中，所述阳性参考品中含有的人ALDH2*2基因1510位点AA型的基因序列是构建到质粒载体上保存，根据现有技术即可得到，质粒构建过程如下：引物设计——PCR扩增——割胶回收DNA片段——构建载体——转化培养——阳性克隆鉴定——37℃摇床培养——质粒抽提——测序确认碱基序列。抽提后的质粒再配制成所述阳性参考品，配制方法如下：（1）配制稀释液：加入50%配方量的纯化水→加入Tris-HCl缓冲液（pH7.6）→加入剩余的纯化水（涡旋震荡3次，每次5秒）→得0.002mol/L的Tris-HCl（pH7.6）稀释液；（2）人ALDH2*2基因1510位点AA纯合载体质粒预稀释：加入50%配方量的所述稀释液→加入人ALDH2*2基因1510位点AA纯合载体质粒溶液→加入剩余的所述稀释液（涡旋震荡3次，每次5秒）→得到X拷贝/微升人ALDH2*2基因1510位点AA纯合质粒溶液（X代表质粒浓度的具体数值）；（3）得到AA型阳性参考品：加入50%配方量的稀释液→加入X拷贝/微升人ALDH2*2基因1510位点AA纯合质粒溶液→加入剩余的稀释液（涡旋震荡3次，每次5秒）→得到AA型阳性参考品。本专利技术的特点以及有益效果是：所述阳性质控品实质是事先设计好的、当做已知浓度及碱基序列的样本，和其他被检样本（即人全血）一起利用相关的ALDH2*2基因型检测试剂盒进行检测，从而验证被检样本检测结果的准确性。也就是说，在利用ALDH2*2基因型检测试剂盒检测被检样本时，本专利技术的阳性参考品相当于是一种已知浓度的阳性样本，用于验证ALDH2*2基因型检测试剂盒的检测结果是否真实、有效，解决了人ALDH2*2基因的质量检测问题。附图说明附图1为人ALDH2*2基因的1510位点为GG型时的荧光定量PCR扩增熔解曲线图，横坐标是温度，纵坐标是荧光微分值；附图2为人ALDH2*2基因的1510位点为AA型时的荧光定量PCR扩增熔解曲线图，横坐标是温度，纵坐标是荧光微分值；附图3为人ALDH2*2基因的1510位点为AG型时的荧光定量PCR扩增熔解曲线图，横坐标是温度，纵坐标是荧光微分值；附图4为空白对照时的荧光定量PCR扩增熔解曲线图，横坐标是温度，纵坐标是荧光微分值。具体实施方式下面结合附图及实施例对本专利技术作进一步描述：实施例：一种以人ALDH2*2基因1510位点AA型为模板的阳性参考品GG型阳性参考品是一种以碱基序列为主要成分的试剂，该碱基序列包含人ALDH2*2基因片段，所述人ALDH2*2基因片段为5’-GAGCCCAGTCACCCTTTGGTGGCTACAAGATGTCGGGGAGTGGCCGGGAGTTGGGCGAGTACGGGCTGCAGGCATACACTGAAGTGAAAACTGTGAGTGTGGGACCTGCTGGGGGCTCAGGGCCTGTTGGGGCTTGAGGGCTGCTGGTGGCTCGGAGCCT-3’（如SEQNO:4所示），其中，带有下划线的碱基位点是人ALDH2*2基因的1510位点，所述1510位点用于表征人ALDH2*2基因的GG型可突变为人ALDH2*2基因的AA型的位置。所述GG型阳性参考品中还含有缓冲试剂，该缓冲试剂选自pH7.6的Tris-HCl缓冲液。AA型阳性参考品是一种以碱基序列为主要成分的试剂，该碱基序列包含人ALDH2*2基因片段，所述人ALDH2*2基因片段为5’-GAGCCCAGTCACCCTTTGGTGGCTACAAGATGTCGGGGAGTGGCCGGGAGTTGGGCGAGTACGGGCTGCAGGCATACACTAAAGTGAAAACTGTGAGTGTGGGACCTGCTGGGGGCTCAGGGCCTGTTGGGGCTTGAGGGCTGCTGGTGGCTCGGAGCCT-3’（如SEQNO:5所示），其中，带有下划线的碱基位点是人ALDH2*2基因的1510位点，所述1510位点用于表征人ALDH2*2基因的AA型可突变为人ALDH2*2基因的GG型的位置。所述AA型阳性参考品中还含有缓冲试剂，该缓冲试剂选自pH7.6的Tris-HCl缓冲液或pH7.6的TE缓冲液。AG型阳性参考品是通过所述GG型阳性参考品与AA型阳性参考品按等体积混合配制而成。所述GG型阳性参考品中含有GG纯合型DNA序列的浓度为500拷贝/微升，所述AA型阳性参考品中含有AA纯合型DNA序列的浓度为500拷贝/微升，那么，所述AG型阳性参考品中含有GG纯合型DNA序列和AA纯合型DNA序列的浓度均为500拷贝/微升。所述GG型阳性参考品、AA型阳性参考品以及AG型阳性参考品作为ALDH2*2基因型检测试剂盒中的一部分。在本实施例中，ALDH2*2基因型检测试剂盒包括KODDNA聚合酶、上游引物、下游引物、特异性靶向荧光探针、GG型阳性参考品、AA型阳性参考品以及GA型阳性参考品；所述上游引物为针对人ALDH2*2基因设计的上游引物，上游引物的序列为5’-CCCAGTC本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以人ALDH2*2基因1510位点AA型为模板的阳性参考品，其特征在于：所述阳性参考品是一种以碱基序列为主要成分的试剂，该碱基序列包含人ALDH2*2基因片段，所述人ALDH2*2基因片段为5’‑GAGCCCAGTCACCCTTTGGTGGCTACAAGATGTCGGGGAGTGGCCGGGAGTTGGGCGAGTACGGGCTGCAGGCATACACT

【技术特征摘要】
1.一种以人ALDH2*2基因1510位点AA型为模板的阳性参考品，其特征在于：所述阳性参考品是一种以碱基序列为主要成分的试剂，该碱基序列包含人ALDH2*2基因片段，所述人ALDH2*2基因片段为5’-GAGCCCAGTCACCCTTTGGTGGCTACAAGATGTCGGGGAGTGGCCGGGAGTTGGGCGAGTACGGGCTGCAGGCATACACTAAAGTGAAAACTGTGAGTGTGGGACCTGCTGGGGGCTCAGG...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙茜，
申请(专利权)人：踏石生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32