一个与湖羊繁殖性状关联的基因突变位点及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一个与湖羊繁殖性状关联的基因突变位点及其应用，该突变位点位于湖羊FSHR基因核心启动子区‑414位核苷酸处，该位点为A>G突变，与湖羊产羔数显著关联，其中AA型和AG型个体产羔数显著高于GG型，且AA型启动子区基因转录活性显著高于GG型。家畜繁殖性状是一个低遗传力性状，采用常规育种技术遗传进展较慢，由于所述突变位点与湖羊繁殖性能显著关联，采用简便的基因分型技术检测该位点，便可选留高繁殖力基因型个体，淘汰低繁殖力基因型个体，对加快高繁殖力湖羊群体或品系选育进展具有重要的经济价值。

A trait associated with the sheep breeding gene mutation and its application

The invention discloses a trait associated with the sheep breeding gene mutation and its application, the mutation is in the core promoter region of FSHR gene 414 nucleotides at the site of A> G mutation, and the sheep litter size was significantly associated, including type AA and type AG individual litter size was significantly higher than that of GG type. And type AA promoter transcriptional activity was significantly higher than that of GG. The reproductive traits of livestock is a low heritability, using conventional breeding techniques of genetic progress is slow, due to the mutation and sheep reproductive performance significantly associated with a simple genotyping technique for the detection of the site, then leave optional High Prolificacy gene genotype, the elimination of low fecundity genotypes, has important economic value of to speed up the progress of high fecundity sheep population or breeding.

【技术实现步骤摘要】
一个与湖羊繁殖性状关联的基因突变位点及其应用
本专利技术属于分子生物学领域，涉及一个与湖羊繁殖性状关联的基因突变位点及其应用。
技术介绍
促卵泡素受体(Folliclestimulatinghormonereceptor，FSHR)是影响家畜多胎性状的主效基因，调控卵巢颗粒细胞状态(增殖和凋亡)、卵泡发育和排卵。FSHR是雌性哺乳动物卵巢颗粒细胞膜上一种重要的受体蛋白，介导促卵泡素(Folliclestimulatinghormone，FSH)的功能。FSH信号转导必须通过与卵巢颗粒细胞膜上的受体FSHR结合才能作用于卵巢，从而促进卵泡发育、调控配子形成，因此FSHR是母畜生殖和繁殖性能必需的。研究发现FSHR转录水平与绵羊繁殖力(如产羔数、排卵数等)、突变位点多态性与湖羊多胎性状之间关系密切。在高繁殖力绵羊个体卵巢卵泡中FSHR基因转录水平显著高于低繁殖力个体。FSHR基因在绵羊卵巢组织不同大小(4-7mm)和不同状态(优势卵泡、劣势卵泡和黄体化卵泡)的卵泡中均差异表达，说明FSHR基因表达水平与绵羊卵泡发育、优势化和排卵有关。同时，卵巢或卵泡中FSHR高表达被认为是FecB突变影响绵羊高繁殖力的主要机制。FSHR基因5'-调控区(如g.-200G>A、g.-197G>A、g.-98T>C和g.-47C>T)和编码区SNP位点(如c.1235T>C)的多态性均与绵羊多胎性状(如产羔数)显著关联。另外，猪卵泡成熟与排卵依赖FSHR基因的表达，其基因编码区上3个碱基突变(c.74C>G、c.532G>A和c.1166T>C)显著影响猪排卵数，FSHR被认为是影响猪繁殖性状的主效基因。牛FSHR基因碱基突变(如c.337C>G、c.871A>G、c.1973C>G和G-278A)与超数排卵性状显著关联。这些结果充分说明FSHR基因上的突变位点与家畜繁殖性状密切相关，但目前尚未获得一个功能性的、与绵羊繁殖性状显著关联的突变位点。
技术实现思路
本专利技术提供了一个与湖羊产羔数显著关联、且显著影响基因转录活性的突变位点，突变位点检测技术，和筛选高繁殖力绵羊个体的方法。本专利技术的另一目的在于提供上述突变位点在辅助选育高繁殖力湖羊新品系中的应用。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一个与湖羊产羔数显著关联、且显著影响基因转录活性的突变位点，该突变位点位于湖羊FSHR基因核心启动子区-414位核苷酸处，该位点为A>G突变，与湖羊产羔数显著关联，其中AA型和AG型个体产羔数显著高于GG型，且AA型启动子区基因转录活性显著高于GG型。所述的湖羊FSHR基因核心启动子区的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。ctcttaaaagtgccccctaccatctgtccaggggctcactaacccactgcctgtcttctgagctgcmccatgtttggttgttaattccagcaagaaagagaatcagtgactttgacccagaagttctggttttgtatcaagcagcctggaggaagacattgacaccaagactggaaacaggtccctgaccttcactgaggaactctcttaatgatgtttcacactgcagattgcatctgttttggagaaagtcaagcgtgtcactctgttttgagaaaaaaaaaatagtgacccacagggacagtcttacagcgaatttaatataagctattctagacatgcatcaagtttcaatttgcaaacccaaccaaaaaaggtaaagggacagcgtatcttgccacgccctctacctctcccaccccacccccaccaaagtcactgctgtcactcagaaattctgctatttgtctggaagtgaccgataaaaaagaaaaaaaggaaagcggccctgggcgggtcacgtgaccctaccagctcccaatgcagacctcttctcaaaagggctcagtgtggagcctctgaaatctgggcaggattgtgtctgcagaagcagaagcaagcaggtggatggataagtaaacatg(SEQIDNO.4)。其中，m为突变位点，该突变位点位于下划线acc起-414位核苷酸处，atg为起始密码子。一种用于检测湖羊基因组中是否存在上述基因突变位点的特异性引物对，其正反向引物如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。一种用于检测湖羊基因组中是否存在上述基因突变位点的方法，利用设计的特异性引物对SEQIDNO.1和SEQIDNO.2进行PCR扩增，对扩增产物进行直接测序，鉴定不同基因型。一种筛选高繁殖力湖羊个体的方法，采用特异性引物对SEQIDNO.1和SEQIDNO.2对湖羊基因组DNA进行PCR扩增，对PCR扩增产物测序分型，选留AA型和AG型个体作为高繁殖力湖羊个体。上述的基因突变位点在高繁殖力湖羊新品系的辅助选择育种中的应用。上述的特异性引物对在检测权利要求1所述的突变位点中的应用。上述的特异性引物对在高繁殖力湖羊新品系的辅助选择育种中的应用。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了湖羊FSHR基因核心启动子区上一个新的、与繁殖性状显著关联的功能性突变位点及其检测技术，可用于高繁殖力湖羊个体的辅助选择和高繁殖力湖羊新品系的辅助育种。附图说明图1湖羊FSHR基因-414A>G位点测序分型峰图。图2湖羊FSHR基因-414A>G位点不同基因型产羔数。图3湖羊FSHR基因-414A>G位点不同基因型启动子区活性。具体实施方式结合实例，进一步说明本专利技术。实施例一1、实验材料选择健康无病、体况良好的湖羊母羊，记录其产羔数。用耳号钳采集耳组织样，置于-20℃保存，用于基因组DNA的提取。2、基因组DNA提取采用常规的酚/氯仿抽提法提取湖羊耳组织基因组DNA，-20℃保存。3、引物设计根据绵羊基因组序列(GenBankID：NC_019460.1)，利用Primer5.0软件设计1对引物，正向引物序列为：5'-CGGGGTACCCCAAAAGCAAGGGCAATC-3'(SEQIDNO.1)，反向引物序列为：5'-CCCAAGCTTCCTGTTTCCAGTCTTGGTGTC-3'(SEQIDNO.2)。引物由上海英骏生物技术有限公司合成。4、PCR扩增PCR扩增体系为10μL，主要包括：0.5μL湖羊基因组DNA，0.5μM正向游引物，0.5μM反向引物，5μL2×PremixrTaqDNA聚合酶(TaKaRa公司)，用双蒸水定容至10μL。PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，32个循环，最后72℃延伸5min。本专利技术采用的PCR仪为TaKaRa梯度PCR仪。5、测序分型PCR扩增产物采用纯化试剂盒(北京天根生物有限公司)纯化后，直接送交上海英骏生物技术有限公司进行测序，PCR扩增产物的系列如SEQIDNO.3所示。测序峰图用Chromasv2.3软件进行分析，根据峰图判断基因型，其中只有单峰A的为AA型，只本文档来自技高网...

【技术保护点】
一个与湖羊产羔数显著关联、且显著影响基因转录活性的突变位点，其特征在于：该突变位点位于湖羊FSHR基因核心启动子区‑414位核苷酸处，该位点为A>G突变，与湖羊产羔数显著关联，其中AA型和AG型个体产羔数显著高于GG型，且AA型启动子区基因转录活性显著高于GG型。

【技术特征摘要】
1.一个与湖羊产羔数显著关联、且显著影响基因转录活性的突变位点，其特征在于：该突变位点位于湖羊FSHR基因核心启动子区-414位核苷酸处，该位点为A>G突变，与湖羊产羔数显著关联，其中AA型和AG型个体产羔数显著高于GG型，且AA型启动子区基因转录活性显著高于GG型。2.一种用于检测湖羊基因组中是否存在权利要求1所述突变位点的特异性引物对，其特征在于：其正反向引物如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。3.一种用于检测湖羊基因组中是否存在权利要求1中所述突变位点的方法，其特征在于：利用设计的特异性引物对S...

【专利技术属性】
技术研发人员：李齐发，郭晶，杜星，潘增祥，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32