一种茶多酚中EC含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种茶多酚中EC含量的检测方法，包括(1)设定高效液相色谱条件；(2)制备对照品溶液；(3)制备供试品溶液；(4)含量测定；分别取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，进行高效液相色谱仪的操作，并记录色谱图，然后利用色谱图计算EC的含量。本发明专利技术所述检测方法以梯度洗脱方式，能有效地分离开茶多酚中较难分离的EGCG和EC两种主要成分；且该方法简便，灵敏度高，重现性好，样品分离度、对称性及峰形均较好，且保留时间适中，更加适合于常规检测，可有效用于EC含量的检测和质量控制。

Method for detecting EC content in tea polyphenol

The invention discloses a method for detecting EC content in tea polyphenols, including (1) the set of HPLC conditions; (2) preparation of the reference solution; (3) the preparation of the test solution; Determination of content; (4) were obtained from the standard solution and the test solution, liquid injection chromatography, high performance liquid chromatography for operation, and record the chromatograms, and content of EC was calculated with the chromatographic diagram. The detection method with gradient elution method, two main components of EGCG and EC were difficult to separate effectively from tea polyphenols; and the method is simple, high sensitivity, good reproducibility, sample separation, symmetry and shape are better, and the retention time is moderate, more suitable for routine detection, can be effectively used for the detection and quality control of EC content.

【技术实现步骤摘要】
一种茶多酚中EC含量的检测方法
本专利技术涉及一种化合物检测方法，具体涉及一种茶多酚中EC含量的检测方法。
技术介绍
癌症已成为21世纪威胁人类生存的头号杀手，平均每年有600多万人死于各种癌症。中国已成为世界癌症高发国之一，每年新增200多万名癌症患者，占全球总数的20％，并且每年呈快速增长趋势。临床上目前治疗癌症的药物主要是化学药品，但由于化学药物毒性大，在杀死肿瘤细胞的同时也无选择性的杀死白细胞、淋巴细胞等自身免疫细胞，导致各种并发症和严重的不良反应，而且疗程长，费用高，在临床使用中有较大的局限性。中药在治疗癌症方面有独特的优势，以中药为代表的天然药物具有毒副作用小、作用靶点多样、耐受性好等特点，在治疗肿瘤方面越来越受到重视。茶多酚，又名抗氧灵、维多酚、防哈灵，是茶叶中所含的一类多羟基类化合物，简称TP，主要化学成分为儿茶素类(黄烷醇类)、黄酮及黄酮醇类、花青素类、酚酸及缩酚酸类、聚合酚类等化合物的复合体。其中儿茶素类化合物为茶多酚的主体成分，占茶多酚总量的65％～80％。儿茶素类化合物主要包括儿茶素(EC)、没食子儿茶素(EGC)、儿茶素没食子酸酯(ECG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)4种物质。研究表明，茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用，能有效地阻止放射性物质侵入骨髓，并可使锶90和钴60迅速排出体外，被健康及医学界誉为“辐射克星”。EC为茶多酚中的主要的组成成分之一，本专利技术的专利技术者研究发现，目前尚未有有效的检测方法对其进行质量控制，研究及开发一种适合于常规检测EC含量的检测方法则显得尤为重要。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种茶多酚中EC含量的检测方法,该方法操作简单，具有良好的精密度、重现性和可靠性，可用于EC含量的检测和质量控制。技术方案：为了实现上述目的一种茶多酚中EC含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤:(1)设定高效液相色谱条件：色谱柱为C18，以浓度为0.1％-0.2％的乙酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，洗脱方式为梯度洗脱，流速为0.8-1.2mL·min-1，柱温为20-40℃，检测波长为275-281nm，进样量10-20μl；所述流动相A和B在液相进行过程中的体积比为(69-92)：(8-31)；(2)制备对照品溶液：称取EC对照品，加入流动相A制成溶液，作为对照品溶液；(3)制备供试品溶液：称取茶多酚粉末，加入流动相A，超声提取，静置，摇匀，滤过，作为供试品溶液；(4)含量测定：分别取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，进行高效液相色谱仪的操作，并记录色谱图，然后，利用色谱图计算EC的含量。作为优选，步骤(1)所述流动相A中乙酸的浓度为0.1％。作为优选，步骤(1)所述检测波长为278nm。作为优选，步骤(1)所述流速为1.00mL·min-1，柱温为35℃，进样量20μl。作为优选，所述流动相A和B在液相进行过程中0分钟开始的体积比为92：8；25分钟开始为69：31；35分钟开始后为92：8。所述检测方法，还包括对EC对照品溶液浓度X和峰面积积分值Y进行线性回归的步骤；所述步骤为制备不同浓度的对照品溶液按上述色谱条件进行测定，得到不同的峰面积积分值，以峰面积积分值(Y)和对照品溶液浓度(X)进行线性回归，得回归方程。所述检测方法，还包括对高效液相色谱仪进行精密度检测的步骤；所述步骤为将制备的对照品溶液，按上述色谱条件连续进样进行测定，得到不同的峰面积积分值，计算RSD，分析仪器精密度。所述检测方法，还包括对供试品溶液的稳定性进行检测的步骤；所述步骤为制备供试品溶液，按上述色谱条件在不同时间分别进样测定，测得不同峰面积积分值，计算RSD，分析供试品溶液的稳定性。所述检测方法，还包括检验EC含量的检测方法的重复性的步骤；所述步骤为制备多份平行供试品溶液，按上述色谱条件分别进样测定，测得不同峰面积积分值，计算RSD，分析所述方法重复性。所述检测方法，还包括进行加样回收率实验的步骤；所述步骤为取已知含量的EC样品，加入相应量的对照品，按上述方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算加样回收率。所述检测方法，还包括进行EC定量限测定的步骤；所述步骤为将制备的对照品溶液稀释测定，测得信噪比10∶1时，分析EC的最低检测浓度。所述检测方法，还包括EC检测限测定的步骤；所述步骤为将制备的对照品溶液稀释测定，测得信噪比3：1时，分析EC的最低检测浓度。有益效果：与现有技术相比，本专利技术的茶多酚中EC含量的检测方法具有以下优点；本专利技术所述检测方法以梯度洗脱方式，能有效地分离开茶多酚中较难分离的EGCG和EC两种主要成分；且该方法简便，灵敏度高，重现性好，样品分离度、对称性及峰形均较好，且保留时间适中，更加适合于常规检测，可有效用于EC含量的检测和质量控制。附图说明图1为EC的结构示意图；图2为实施例4EC对照品溶液的高效液相色谱图；图3为实施例7EC样品重复性检测的高效液相色谱图；图4为某一批次的EC样品的高效液相色谱图；图5为另一批次的EC样品的高效液相色谱图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1检测方法(1)设定高效液相色谱条件：色谱柱为AgilentEclipseXDB-C18：4.6×250mm，5um，以浓度为0.1％的乙酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，洗脱方式为梯度洗脱，流速为1.0mL·min-1，柱温为35℃，检测波长为278nm，进样量20μl，流动相A和B在液相进行过程中0分钟开始的体积比为92：8；25分钟开始为69：31；35分钟开始后为92：8；理论板数按EC计算应不低于2000。(2)制备对照品溶液：称取EC对照品25mg，精密称定，置于50ml容量瓶中，加入流动相A，稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.400mg·ml-1的溶液，作为对照品溶液(3)制备供试品溶液:称取供试品粉末30mg，置于50ml容量瓶中，加入流动相A30ml，超声提取20min，静置，再用流动相A稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。(4)含量测定：分别取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，进行高效液相色谱仪的操作，并记录色谱图，然后利用色谱图计算EC的含量。实施例2设定高效液相色谱条件中：以浓度为0.2％的乙酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，洗脱方式为梯度洗脱，流速为1.2mL·min-1，柱温为40℃，检测波长为281nm，进样量15μl。其他步骤与实施例1相同。实施例3设定高效液相色谱条件中：以浓度为0.15％的乙酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，洗脱方式为梯度洗脱，流速为0.8mL·min-1，柱温为20℃，检测波长为275nm，进样量10μl。其他步骤与实施例1相同。实施例4：对EC对照品溶液浓度X和峰面积积分值Y进行线性回归精密量取对照品贮备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL，置于10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得到含EC分别为0.004、0.008、0.02、0.04、0.08mg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取上述各对照品溶液20μL，按实施例1色谱条件进行测定，分别得到峰面积积分值为135112、309673、73本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种茶多酚中EC含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤:(1)设定高效液相色谱条件：色谱柱为C

【技术特征摘要】
1.一种茶多酚中EC含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤:(1)设定高效液相色谱条件：色谱柱为C18，以浓度为0.1％-0.2％的乙酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，洗脱方式为梯度洗脱，流速为0.8-1.2mL·min-1，柱温为20-40℃，检测波长为275-281nm，进样量10-20μl；所述流动相A和B在液相进行过程中的体积比为(69-92)：(8-31)；(2)制备对照品溶液：称取EC对照品，加入流动相A制成溶液，作为对照品溶液；(3)制备供试品溶液：称取茶多酚粉末，加入流动相A，超声提取，静置，摇匀，滤过，作为供试品溶液；(4)含量测定：分别取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，进行高效液相色谱仪的操作，并记录色谱图，然后，利用色谱图计算EC的含量。2.根据权利要求1所述的一种茶多酚中EC含量的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述流动相A中乙酸的浓度为0.1％。3.根据权利要求1所述的一种茶多酚中...

【专利技术属性】
技术研发人员：季浩，徐娟，阚建伟，于燕燕，孔繁博，张宇，闫成亮，胡亚京，
申请(专利权)人：江苏天晟药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32