本发明专利技术提供了一种用于检测饮品总多酚含量的试剂盒、制备方法和使用试剂盒进行饮品中总多酚含量检测的方法，属于食品营养检测领域。所述的试剂盒包括显色剂、显色稳定剂和标准品，本发明专利技术采用优化的Folio-Ciocalteu法，饮品样本与组合试剂在45℃水浴反应0.5h后显色，降低了显色反应时间；所述试剂盒在紫外分光光度计和半自动生化分析仪的应用简单易行、灵敏度高、无需制定标曲，大大缩短检测时间，尤以半自动生化分析仪的应用，可直观读取检测结果，降低检测难度；可同时对多个饮品样本进行显色和检测，高效、准确、快捷，易于批量检测。因此，本申请的试剂盒和检测方法在液体或固体饮品总多酚含量检测中具有很大的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术提供了一种用于检测饮品总多酚含量的试剂盒、制备方法和使用试剂盒进 行检测的方法，尤其涉及一种适用于半自动生化分析仪的饮品总多酚测定试剂盒及检测方 法，可以进行液体及固体饮品总多酚含量的测定，属食品营养检测领域。
技术介绍
植物多酚是多羟基类化合物的总称，狭义上是单宁或鞣质，广义上还包括小分子 酚类化合物，如花青素、儿茶素、栎精、没食子酸等。其广泛存在于蔬菜、水果、豆类、谷物类 等植物中，尤以种子植物中更为常见，苹果、葡萄、荔枝、浆果等水果中植物多酚含量很高。 它们也存在于茶叶、啤酒、果酒、果汁等饮料中，与人类的生活和健康密切相关。 植物多酚是植物体内复杂的酚类次生代谢物，具有多元酚结构，酚羟基中的邻位 酚羟基可与金属离子发生络合反应，且极易被氧化，对活性氧等自由基有较强的捕捉能力， 使其具有很强的抗氧化性和清除自由基的能力。多酚还可以通过疏水键和多点氢键与蛋白 质、生物碱、多糖等发生复合反应。另外，植物多酚在200~300nm波长间有较强的紫外吸 收能力。 近年来发现植物多酚能够抑制动物和人类肿瘤的发展，防治心脑血管疾病、提高 免疫力、调解内分泌系统、保肝以及抗炎、抗癌、抗氧化、抗衰老等功效，被称作人类健康的 "第七营养素"。其功能活性被很好地应用于医药、化妆品、食品、环境等领域，在美、德、法、 意、日、澳大利亚、加拿大、罗马尼亚、匈牙利等国己有许多植物多酚专利及产品问世。尼柯 维斯基公司成功开发并推出了以"苹果酚"命名的苹果多酚产品，并得到广泛的应用。此外， 茶多酚和银杏黄酮也已被广泛运用于食品、医药、精细化工等领域。而对食品的理化性质和 营养高低的鉴别，取决于其中营养活性成分的种类和含量。液体饮品中多酚物质的含量，对 其色泽、风味和非生物稳定性有重要影响。啤酒中过高量的多酚物质可使啤酒口味粗涩、苦 味不正、后苦味长，并且会引起啤酒冷浑浊和永久性浑浊，过低量的多酚对啤酒的稳定性以 及风味又有不良影响。果酒中多酚物质不仅影响果酒的颜色、风味和香气，还能抑制微生物 生长，且在储藏过程中参与沉淀物的形成。然而，在贮藏及加工过程中，过多的多酚物质会 使果酒褐变，导致货架期简短，经济效益降低。 多酚，作为饮品中一个重要的营养素指标，其分析方法对于饮品的质量检测具有 重要意义。目前多酚含量的测定方法主要有以下这些： 高锰酸钾滴定法，原理是在靛红作指示剂的情况下，高锰酸钾氧化具还原性的多 酚物质。此法虽简便易行，但滴定终点较难观察，测定灵敏度低。 香草醛盐酸法，在酸性条件下，多酚与香草醛发生缩合，产物在浓酸作用下形成有 色的正碳离子。其对测定条件要求严格，干扰因素多，稳定性较差。 酒石酸压铁法，是茶多酚含量检测的国标方法。其测定原理是茶多酚类物质能与 过量的亚铁离子形成紫蓝色络合物，颜色的深浅与多酚含量成正比，具有良好的重现性。此 法多适用于低含量多酚的茶叶原料，测出的数值往往偏高。 普鲁士蓝法，在酸性条件下，多酚能将Fe(CN) 63还原成Fe(CN) 64，还原产物 Fe(CN)64与Fe3+反应生成Fe3(普鲁士蓝）供定量测定。反应中不好控制高铁溶 液用量，用量少时会生生成成藤氏蓝Fe32沉淀，不适测定。 高效液相色谱法，准确性高，灵敏度好，检测限低，但其前处理复杂，成本高，不适 于大量的定量分析，多用于单体酚类的测定。 F〇lin-Denis(FD)法，利用样品测试液中易氧化的羟基与FD试剂作用，产生蓝色， 于波长725nm处有最大吸收而用比色法测定。但FD显色剂稳定性差，灵敏度低，测定结果 误差较大。 Folin-Ciocalteu法，其原理是在碱溶液中，酚类化合物可将钨钼酸定量还原（W6+ 变成W5+)，其自身被氧化为蓝色化合物，颜色深浅程度与酚含量正相关。此法价格低、灵敏 度高，但反应时间较长，不适于批量产品的快速测定。 综上所述，各种检测方法的灵敏度、准确度、检测繁简程度和成本等方面均存在较 大差异，因而建立新的简便易行、灵敏度高、准确性好、成本低廉，耗时少的绿色检测方法仍 是社会的迫切要求和重要的研究目标。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于克服上述不足之处，提供一种用于检测饮品总多酚含量的 试剂盒、制备方法和使用方法，以及上述检测试剂盒其制备方法在检测饮品中总多酚含量 的应用。所述的试剂盒包括显色剂、显色稳定剂和标准品， 本专利技术还提供了一种快速测定液体或固体饮品总多酚含量试剂盒的制备方法和 使用方法，以及上述检测试剂盒其制备方法在检测饮品中总多酚含量的应用。 本专利技术采用优化的Folio-Ciocalteu法检测总多酚含量，饮品样本与组合试剂在 45°C水浴反应0. 5h后显色，降低了显色反应时间。 本专利技术用于检测饮品总多酚含量的试剂盒是通过以下技术方案达到上述目的：试 剂盒包括显色剂（氧化剂）、显色稳定剂和标准液； 其中所述显色剂为氧化剂，显色剂采用福林酚试剂，体积浓度为10% ; 所述显色稳定剂为碳酸钠溶液，质量体积浓度为12% ; 所述标准液为没食子酸溶液，质量浓度为0.lmg/mL。 所述的试剂盒检测体系中优选地的多酚终浓度范围为0~6iig/mL，所述显色体 系中标准液的终浓度为4yg/mL -种用于检测饮品总多酚含量试剂盒的制备方法，其特征在于制备过程包括以下 步骤： (1)测定波长的确定 用移液枪分别移取没食子酸标准液a和茶多酚标准液b，所述的没食子酸标准液a 和茶多酚标准液b的取样体积均为0. 16mL，分别置于标准管a和标准管b中；向两支标准 管中均加入超纯水和10%福林酚试剂，所述的超纯水和10%福林酚试剂的取样体积分别 为0. 8mL、0. 4mL;祸旋振荡，混匀静止3min后分别向两支标准管加入12%碳酸钠溶液，所述 的碳酸钠溶液的体积均为〇. 64mL;最后用超纯水定容至4mL，35°C水浴反应1. 5h后，用紫外 分光光度计在400~800nm范围内扫描，选择最佳测定波长； 茶多酚标准液b为5mg茶多酚标准品溶解于50mL超纯水中，涡流震荡充分溶解而 成； (2)显色稳定剂和显色剂体积比的确定 显色稳定剂用量的确定：用移液枪分别移取7份没食子酸标准液a，所述超纯水和 标准液的体积均为〇. 16mL，分别置于1支空白管和6支标准管中；向7支试管均加入超纯水 和10%福林酚试剂，所述超纯水和10%福林酚试剂的取样体积分别为0. 8mL、0. 4mL;涡旋 振荡，混匀静止3min后向7支试管加入12%碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液的体积分别为 0mL、0. 16mL、0. 32mL、0. 48mL、0. 64mL、0. 8mL、0. 96mL，最后 7 支试管均用超纯水定容至 4mL， 35°C水浴反应1. 5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定碳酸钠溶液的用量； 显色剂用量的确定：用移液枪分别移取7份没食子酸标准液a，所述标准液a的体 积均为〇. 16mL，分别置于1支空白管和6支标准管中；7支试管均加入超纯水，所述超纯水 的取样体积为〇.8mL，而后向7支试管中均加入10%福林酚试剂，所述10%福林酚试剂的 取样体积分别为 〇mL、0. 08mL、0. 16mL、0. 24mL、0. 32mL、0. 4mL、0. 48mL;涡旋振本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测饮品总多酚含量的试剂盒，其特征在于试剂盒包括显色剂(氧化剂)、显色稳定剂和标准液；其中所述显色剂为氧化剂，显色剂采用福林酚试剂，体积浓度为10％；所述显色稳定剂为碳酸钠溶液，质量体积浓度为12％；所述标准液为没食子酸溶液，质量浓度为0.1mg/mL。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈朝银，李杰，赵声兰，葛锋，刘迪秋，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：云南;53
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