促进安吉白茶愈伤组织增殖和提高其中茶多酚含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高其中茶多酚含量的方法。该方法包括如下步骤：将安吉白茶愈伤组织置于培养基A中进行培养，从而促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安吉白茶愈伤组织中茶多酚含量；所述培养基A是在MS固体培养基中加入TDZ、IAA和苯丙氨酸后得到的培养基；所述培养基A中TDZ的终浓度为0.5mg/L、IAA的终浓度为1.0mg/L、苯丙氨酸的终浓度为0.1-1.0mg/L。实验证明，采用本发明专利技术所提供的培养基可使安吉白茶愈伤组织的鲜重和干重比与对照显著提高，且使其中茶多酚的含量最高达26.72％。本发明专利技术对于安吉白茶资源的开发利用及茶多酚的工业化生产具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
促进安吉白茶愈伤组织增殖和提高其中茶多酚含量的方法
本专利技术属于植物组织培养领域，涉及一种促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高其中茶多酚含量的方法。
技术介绍
安吉白茶是一种汉族名茶，产自浙江省安吉县溪龙乡，是茶(Camelliasinensis)中一种能稳定遗传的白化突变品种。春季幼叶呈白色，尤以一芽二叶为最白，经脉翠绿。随着气温升高，光照增强，叶色逐渐转化为白色，夏秋茶为绿色。安吉白茶原产于浙江省安吉县，目前已有江苏、江西、河南、四川、重庆、贵州等地引种安吉白茶。安吉白茶具有很好的保健功效。如安吉白茶含有多种氨基酸的复合物和茶叶脂质中的二苯胺，能够保肝护胃，可促进肝脏合成凝血素，具有抗衰老的功效；再如安吉白茶富含氨基丁酸，能降血压、降血脂、降血糖；又如安吉白茶含微量元素锰、锌、硒及茶多酚类物质，能增强记忆力，保护神经细胞，对脑损伤有很大的帮助；还如安吉白茶的茶多酚能防癌抗癌等。目前尚未有关于如何促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高其中茶多酚含量的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种促进安吉白茶愈伤组织增殖和/提高安吉白茶愈伤组织中茶多酚含量的方法。本专利技术所提供的促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安吉白茶愈伤组织中茶多酚含量的方法，具体包括如下步骤：将安吉白茶愈伤组织置于培养基A中进行培养，从而促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安吉白茶愈伤组织中茶多酚含量；所述培养基A是在MS固体培养基中加入TDZ、IAA和苯丙氨酸后得到的培养基；所述培养基A中TDZ的终浓度可为0.5mg/L、IAA的终浓度可为1.0mg/L、苯丙氨酸的终浓度可为0.1-1.0mg/L；pH5.8。进一步，所述培养基A中TDZ的终浓度具体为0.5mg/L、IAA的终浓度具体为1.0mg/L、苯丙氨酸的终浓度具体为0.5mg/L；pH5.8。本专利技术的另一个目的是提供一种促进安吉白茶愈伤组织增殖的方法。本专利技术所提供的促进安吉白茶愈伤组织增殖的方法，包括如下步骤：将安吉白茶愈伤组织置于培养基B中进行培养，从而促进安吉白茶愈伤组织增殖；所述培养基B是在MS固体培养基中加入TDZ和IAA后得到的培养基；所述培养基B中TDZ的终浓度可为0.5-4.0mg/L、IAA的终浓度可为0.5-4.0mg/L；pH5.8。进一步，所述培养基B中TDZ的终浓度具体为0.5mg/L、IAA的终浓度具体为1.0mg/L；pH5.8。在上述两种方法中，所述培养的条件均可为：温度25±2℃、光照时间12h/天、光照强度30～40mmol·m-2·s-1。所述培养的周期均可为45天。进一步，所述安吉白茶愈伤组织可按照包括如下步骤的方法制备获得：将安吉白茶的叶片接种于愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养，获得所述安吉白茶愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基在MS固体培养基中加入TDZ后得到的培养基；所述愈伤组织诱导培养基中TDZ的终浓度可为1.0-2.0mg/L(如1.0mg/L)；pH5.8；其中，所述愈伤组织诱导培养的条件可为：温度25±2℃、光照时间12h/天、光照强度30～40mmol·m-2·s-1；所述愈伤组织诱导培养的周期可为45天。在上述方法的步骤(1)中，所述安吉白茶的叶片为消毒后的叶片，大小约为0.5×0.5cm；所述消毒具体可为：将待消毒的安吉白茶的叶片用流水冲洗1h，将冲洗过的叶片用体积分数为70％的酒精消毒30s，再用质量分数为0.1％的升汞水溶液消毒8min，最后用无菌水冲洗(如冲洗5次)。本专利技术的又一个目的是提供一种用于促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安吉白茶愈伤组织中茶多酚含量的培养基。本专利技术所提供的用于促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安吉白茶愈伤组织中茶多酚含量的培养基，具体可为如下(A)或(B)：(A)所述培养基A；(B)由所述培养基A以及所述愈伤组织诱导培养基组成的成套培养基。本专利技术的还一个目的是提供一种用于促进安吉白茶愈伤组织增殖的培养基。本专利技术所提供的用于促进安吉白茶愈伤组织增殖的培养基，具体可为如下(C)或(D)：(C)所述培养基B；(D)由所述培养基B以及所述愈伤组织诱导培养基组成的成套培养基。如下(E)或(F)的应用也属于本专利技术的保护范围：(E)所述(A)或所述(B)的培养基在促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安吉白茶愈伤组织中茶多酚含量中的应用；(F)所述(C)或所述(D)的培养基在促进安吉白茶愈伤组织增殖中的应用。在本专利技术中，所述MS固体培养基中的碳源为蔗糖；所述MS固体培养基中的凝胶剂为琼脂。所述蔗糖在所述MS固体培养基中的终浓度为30g/L；所述琼脂在所述MS固体培养基中的终浓度为7g/L。更加具体的，所述MS固体培养基的pH5.8，溶剂为水，溶质及其浓度如下：a.大量：NH4NO31.65g/L，KNO31.9g/L，MgSO4.7H2O0.37g/L，KH2PO40.17g/L，CaCl2·2H2O0.44g/L；b.微量：KI0.83mg/L，H3BO36.2mg/L，MnSO4.4H2O22.3mg/L，ZnSO4.7H2O8.6mg/L，Na2MoO4.2H2O0.25mg/L，CuSO4.5H2O0.025mg/L，CoCl2.6H2O0.025mg/L；c.维生素：烟酸0.5mg/L，盐酸吡哆素0.5mg/L，盐酸硫胺素0.1mg/L，甘氨酸2mg/L；d.铁盐：FeSO4.7H2O27.8mg/L，Na2EDTA37.3mg/L；e.肌醇0.1g/L；f.蔗糖30g/L；g.琼脂7g/L。以上各浓度为相应组分在所述MS固体培养基中的终浓度。本专利技术以安吉白茶的嫩叶为外植体，研究了其愈伤组织诱导、增殖和茶多酚合成的最佳条件。研究结果表明：MS+TDZ1.0-2.0mg/mL为愈伤组织诱导的最佳培养基，诱导率为86.54％-90.21％；愈伤组织呈红色，质地疏松、生长旺盛。2,4-D、NAA、6-BA不利于愈伤组织的增殖，IAA、TDZ有利于其增殖。MS+TDZ0.5-4.0mg/L+IAA0.5-4.0mg/L是愈伤组织增殖的最佳培养基，鲜重增殖倍数最高可达16.89倍，干重增殖倍数最高可达20.75倍。培养基中添加TDZ、IAA和苯丙氨酸有利于愈伤组织中茶多酚的合成与积累。当TDZ为0.5mg/L、IAA为1.0mg/L、苯丙氨酸为0.5mg/L时，茶多酚的含量最高，达26.72％。MS+TDZ0.5mg/L+IAA1.0mg/L+苯丙氨酸0.5mg/L是安吉白茶愈伤组织中茶多酚的合成与积累的适宜培养基。本专利技术对于安吉白茶资源的开发利用及茶多酚的工业化生产具有重要意义。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中所涉及的MS固体培养基的pH为5.8，具体配方如表1所示：表1MS固体培养基组成(pH5.8)化合物名称培养基中浓度(mg/L)CaCl2·2H2O440KH2PO4170MgSO4·7H2O370NH4NO31650KNO31900KI0.83CoCl2·6H2O0.025H3BO36.2Na2MoO4·2H2O0.25MnSO4·4H2O22.3CuSO4·5H本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安吉白茶愈伤组织中茶多酚含量的方法，包括如下步骤：将安吉白茶愈伤组织置于培养基A中进行培养，从而促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安吉白茶愈伤组织中茶多酚含量；所述培养基A是在MS固体培养基中加入TDZ、IAA和苯丙氨酸后得到的培养基；所述培养基A中TDZ的终浓度为0.5mg/L、IAA的终浓度为1.0mg/L、苯丙氨酸的终浓度为0.1‑1.0mg/L。

【技术特征摘要】
1.一种促进安吉白茶愈伤组织增殖和提高安吉白茶愈伤组织中茶多酚含量的方法，包括如下步骤：将安吉白茶愈伤组织置于培养基A中进行培养，从而促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安吉白茶愈伤组织中茶多酚含量；所述培养基A是在MS固体培养基中加入TDZ、IAA和苯丙氨酸后得到的培养基；所述培养基A中TDZ的终浓度为0.5mg/L、IAA的终浓度为1.0mg/L、苯丙氨酸的终浓度为0.1-1.0mg/L。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述培养基A中TDZ的终浓度为0.5mg/L、IAA的终浓度为1.0mg/L、苯丙氨酸的终浓度为0.5mg/L。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述培养的条件为：温度25±2℃、光照时间12h/天、光照强度30～40mmol·m-2·s-1。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述培养的周期为45天。5.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王俊丽，田璧瑞，张一鸣，黄婧婧，张荣荣，郭萌，彭耀，安卫东，
申请(专利权)人：中央民族大学，
类型：发明
国别省市：北京;11