一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物和方法技术

本发明专利技术涉及一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物和方法。本发明专利技术鉴别苦蘵的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。用于鉴别苦蘵的特异性引物上游序列ST3KZF：如SEQ ID NO.2所示；下游序列ST3KZR：如SEQ ID NO.3所示。利用特异性引物ST3KZF/ST3KZR，通过常规PCR方法来鉴别苦蘵。本发明专利技术样品用量少，仅需少量样品就可以完成整个操作；准确、灵敏度高，ST3KZF/ST3KZR为苦蘵特异性扩增引物，若为其他酸浆属植物种类，为阴性反应；方法简便，采用PCR技术进行检测，耗时短，3～5小时即可完成。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于利用分子生物学方法鉴别苦蘵的
，涉及一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物及其方法。
技术介绍
苦蘵(PhysalisangulataL.)，为茄科(Solanaceae)酸浆属(Physalis)一年生草本植物，分布于世界热带与亚热带地区，常生于海拔500～1500米。在我国主要分布于华东、华中、华南及西南等地。作为传统药材，几个世纪以来，苦蘵以果、根或全草入药，可用于多种疾病的治疗，早在秦汉时期的《尔雅》中就有记载，很多中药材地方志中均有对其描述。其性味苦、寒，主治咽喉肿痛、腮腺炎、急慢性气管炎、肺脓疡、痢疾、小便不利和外用治脓泡疮等。现代医学研究表明苦蘵主要有醉茄内酯、酸浆苦素、黄酮、生物碱及甾醇等化学成分，其中酸浆苦素和谷甾醇具有多种体内外的抗癌活性，对于宫颈癌和皮肤癌都具有明显疗效。另外，苦蘵果实中的多糖对超氧阴离子自由基和二苯代苦味自由基起抗氧化作用，苦蘵提取液具有抗菌消炎、降血糖、降血脂等疗效。苦蘵与小酸浆P.minima、酸浆P.alkekengi及毛酸浆P.pubescens等其他酸浆属植物的形态学特征非常相似(包括茎、叶、花及果实等特征)，因此，利用传统形态学分类方法很难将苦蘵与其他酸浆属相似植物快速准确的鉴别开。所以，在过去，将其他酸浆属植物误认为苦蘵进行使用的情况经常发生，这为苦蘵药材资源的安全使用和保护带来了困难。随着生物科学的发展，DNA分子标记技术弥补和克服了传统鉴别方法的一些缺陷和难题，已经成为了植物辅助鉴别的重要手段。本申请人运用目标起始密码子多态(startcodontargetedPolymorphism,SCoT)分子标记方法，对苦蘵及其他一些酸浆属植物进行DNA指纹图谱研究，从中筛选出苦蘵特异性DNA片段，通过TA克隆、测序等方法，设计专利技术了特异性引物，应用于苦蘵的鉴定，为有效的鉴别和保护苦蘵药材资源提供有效的分子技术依据。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是针对现有技术的不足，提供了一种鉴别苦蘵的核苷酸序列。本专利技术用于鉴别苦蘵的特征性核苷酸序列来源于SCoT通用引物3(5’-CAACAATGGCTACCACCG-3’)扩增所得的苦蘵特异性DNA片段，具体序列为：CAACAATGGCTACCACCGGAGCTCCTAACAGGTCGGGAGGGAAAACTAAGGCGCACCTCGCAATACCGCACAACAAGTCCCAACCATCGATAGCCCCACCTAGGCGAGAAATATCAGGATCAACCTAGCAAGTGCTACGTTATCTAACCTCTACAGGATATAAATAGTAGCAGTAATAACGCCATCCCTCGGCCCCACATGGCCTGCTGGGAGAAAACACAGCTCGAACAGCCCTACTACGCCATTACCGGGCCCCGAACAGCACAAGAAGGGAGTAAATAACATAATATAATAGGTACTCGACCTATAATCCCCTCCCACACGAACAGCCGCGCTGTCGTAAGTCCTACAACAGTCCAATCTAAAGTAAAGACAGAGCGTAGCCTACCTCGACGTAGAACAGCAGAAAAGCTAGCCAAAATGAGCTCCCAAGGCTCGAACTATCACGAACAGACTCCGAACTCTCTGAAACTATCAAATATAGATACTACCCTTCAACATGATTCCGTAGATACCCATATTTCCCTGCCTGGGCTCGGGTCGGAAATGGGTCATGAAAACGAGCCCACGTGTCCGAAACTCAAAAAAAATACAAAAGTTTTGCTAATGCGTCACTCTCGGCTCAATGAACACGTGGTTCGAAATGGAGCTAATATCAACCTCTGAAAGGTCTAGAAAATCTTAAAACAAGTTTAAGCTATATCCGAAAATGCTAAATTCGCGATGAGAAATTGGAATGACTTACCCGTATCGACGAGCAACACCACACGCCTCAAACCCGTTCCAAACAACTCCACAATGCCCACTAAAATCACAGCAAACAGCTCCAATCAAGATATGATCAAAATTCCTCAAAATCCAACTCAAAAACGCCAAATTCTTACCTTGAGGAGCATTATTGGTGGCCTGGTATGAGACGTTCTATTGTGTCTTTTGTGTCTTGTTGTTTGAATTATCAGCAGGTTTAGGCCGAGCACCAGAGACCCGAAGGTGAGCTTCAGAGGCTTCCTATTTCTACGTGGAAATGGGAGCAGATTACTATGGATTTTGTAGTTGGCCTACCCAGGACATCGTAGAGACATGATTCCATTTGGGTTATTATTGATAGGCTGATTAAGTCAGCGCACTTCTTTCCGGTTGATTCGAGTTGGGGAGCTGAGGCTTTAGCCATTCTGTATATTCCGGAGATCGTGAGATTGCATGGGTGCCGACATCTATTATATCTGATAGAGGTATGAAGTTCACCTCGATATTCTGGAGATCAATTCAGCGTGATTTGGGCACCCAGGTGGCCTTGAGCACAGCCTTCCATCCCCAGACTGACGGCCAGTCAGAGCGTACGATCCAGGTGTTGCAGGATATGTTGCGAGCTTGTGTACTGGATTTCGGTGGTAGCCATTGTTG，如SEQIDNO.1所示；本专利技术的第二个目的是提供基于上述鉴别苦蘵的核苷酸序列设计的用于鉴别苦蘵的特异性引物(ST3KZF/ST3KZR)，该特异性引物序列如下：上游引物ST3KZF：5’-GCACCTCGCAATACCGCACA-3’，如SEQIDNO.2所示；下游引物ST3KZR：5’-TCCCCAACTCGAATCAACCG-3’，如SEQIDNO.3所示。上述特异性引物(ST3KZF/ST3KZR)，具有极高的专一性，仅与苦蘵发生反应，而不与其他酸浆属植物样品反应。利用该特异性引物通过常规PCR扩增可以快速的对苦蘵进行鉴别。本专利技术的第三个目的是提供利用上述特异性引物(ST3KZF/ST3KZR)进行鉴别苦蘵的方法。本专利技术采用上述引物组合(ST3KZF/ST3KZR)作为特异性扩增引物，以苦蘵基因组DNA为模板本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴别苦蘵的核苷酸序列，其特征在于该核苷酸序列为：CAACAATGGCTACCACCGGAGCTCCTAACAGGTCGGGAGGGAAAACTAAGGCGCACCTCGCAATACCGCACAACAAGTCCCAACCATCGATAGCCCCACCTAGGCGAGAAATATCAGGATCAACCTAGCAAGTGCTACGTTATCTAACCTCTACAGGATATAAATAGTAGCAGTAATAACGCCATCCCTCGGCCCCACATGGCCTGCTGGGAGAAAACACAGCTCGAACAGCCCTACTACGCCATTACCGGGCCCCGAACAGCACAAGAAGGGAGTAAATAACATAATATAATAGGTACTCGACCTATAATCCCCTCCCACACGAACAGCCGCGCTGTCGTAAGTCCTACAACAGTCCAATCTAAAGTAAAGACAGAGCGTAGCCTACCTCGACGTAGAACAGCAGAAAAGCTAGCCAAAATGAGCTCCCAAGGCTCGAACTATCACGAACAGACTCCGAACTCTCTGAAACTATCAAATATAGATACTACCCTTCAACATGATTCCGTAGATACCCATATTTCCCTGCCTGGGCTCGGGTCGGAAATGGGTCATGAAAACGAGCCCACGTGTCCGAAACTCAAAAAAAATACAAAAGTTTTGCTAATGCGTCACTCTCGGCTCAATGAACACGTGGTTCGAAATGGAGCTAATATCAACCTCTGAAAGGTCTAGAAAATCTTAAAACAAGTTTAAGCTATATCCGAAAATGCTAAATTCGCGATGAGAAATTGGAATGACTTACCCGTATCGACGAGCAACACCACACGCCTCAAACCCGTTCCAAACAACTCCACAATGCCCACTAAAATCACAGCAAACAGCTCCAATCAAGATATGATCAAAATTCCTCAAAATCCAACTCAAAAACGCCAAATTCTTACCTTGAGGAGCATTATTGGTGGCCTGGTATGAGACGTTCTATTGTGTCTTTTGTGTCTTGTTGTTTGAATTATCAGCAGGTTTAGGCCGAGCACCAGAGACCCGAAGGTGAGCTTCAGAGGCTTCCTATTTCTACGTGGAAATGGGAGCAGATTACTATGGATTTTGTAGTTGGCCTACCCAGGACATCGTAGAGACATGATTCCATTTGGGTTATTATTGATAGGCTGATTAAGTCAGCGCACTTCTTTCCGGTTGATTCGAGTTGGGGAGCTGAGGCTTTAGCCATTCTGTATATTCCGGAGATCGTGAGATTGCATGGGTGCCGACATCTATTATATCTGATAGAGGTATGAAGTTCACCTCGATATTCTGGAGATCAATTCAGCGTGATTTGGGCACCCAGGTGGCCTTGAGCACAGCCTTCCATCCCCAGACTGACGGCCAGTCAGAGCGTACGATCCAGGTGTTGCAGGATATGTTGCGAGCTTGTGTACTGGATTTCGGTGGTAGCCATTGTTG，如SEQ ID NO.1所示。...

【技术特征摘要】
1.一种鉴别苦蘵的核苷酸序列，其特征在于该核苷酸序列为：
CAACAATGGCTACCACCGGAGCTCCTAACAGGTCGGGAGGGAAAACTAAGGCGCACCTCGCAATA
CCGCACAACAAGTCCCAACCATCGATAGCCCCACCTAGGCGAGAAATATCAGGATCAACCTAGCA
AGTGCTACGTTATCTAACCTCTACAGGATATAAATAGTAGCAGTAATAACGCCATCCCTCGGCCC
CACATGGCCTGCTGGGAGAAAACACAGCTCGAACAGCCCTACTACGCCATTACCGGGCCCCGAAC
AGCACAAGAAGGGAGTAAATAACATAATATAATAGGTACTCGACCTATAATCCCCTCCCACACGA
ACAGCCGCGCTGTCGTAAGTCCTACAACAGTCCAATCTAAAGTAAAGACAGAGCGTAGCCTACCT
CGACGTAGAACAGCAGAAAAGCTAGCCAAAATGAGCTCCCAAGGCTCGAACTATCACGAACAGAC
TCCGAACTCTCTGAAACTATCAAATATAGATACTACCCTTCAACATGATTCCGTAGATACCCATA
TTTCCCTGCCTGGGCTCGGGTCGGAAATGGGTCATGAAAACGAGCCCACGTGTCCGAAACTCAAA
AAAAATACAAAAGTTTTGCTAATGCGTCACTCTCGGCTCAATGAACACGTGGTTCGAAATGGAGC
TAATATCAACCTCTGAAAGGTCTAGAAAATCTTAAAACAAGTTTAAGCTATATCCGAAAATGCTA
AATTCGCGATGAGAAATTGGAATGACTTACCCGTATCGACGAGCAACACCACACGCCTCAAACCC
GTTCCAAACAACTCCACAATGCCCACTAAAATCACAGCAAACAGCTCCAATCA...

【专利技术属性】
技术研发人员：王慧中，冯尚国，姜梦莹，焦凯丽，史钰军，
申请(专利权)人：杭州科兴生物化工有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33