一种制备酪氨酸-O-磺酸盐的方法技术

本发明专利技术涉及一种制备酪氨酸-O-磺酸盐的方法，其包括如下步骤：(1)在稀释剂和碱的存在下，将磺化试剂和Fmoc保护的酪氨酸反应，得到反应液；(2)将步骤(1)的反应液倒入不良溶剂中，然后静置；(3)倾去步骤(2)所得物的上清液，残余物用水溶解，然后用碱调节pH至弱酸性；(4)用良溶剂洗涤步骤(3)所得水溶液，然后浓缩；(5)向步骤(4)的浓缩物中加入良溶剂并搅拌，过滤，滤液加入至不良溶剂中，搅拌，收集固体，干燥，得到固体；所述方法避免了使用蒸馏、冻干等耗时长、设备要求高的问题，后处理中通过增加萃取操作，极大地提高了纯度，避免了使用难以放大的柱层析纯化操作，其是一个适合放大生产、操作简单、产品纯度高的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药
，具体涉及一种酪氨酸-O-磺酸盐的制备方法。
技术介绍
在生物体内，酪氨酸被磺酸化是一个较为普遍的现象。因此，酪氨酸-O-磺酸(分子式1)在多肽及蛋白质合成上有着较广泛的应用，强酸性基团磺酸的引入极大地改善了酪氨酸的亲水性，在多肽合成中引入酪氨酸-O-磺酸能在一定程度上改善多肽的水溶性，有利于后续的合成以及纯化工作。Dodgson,K.S.等人在二十世纪五十年代就开始研究酪氨酸的磺酸化(Sulfatases.XXIII.The enzymicdesulfation of tyrosine Osulfate Biochemical Journal,71,10-15；1959)，他们采用硫酸为磺化试剂，将酪氨酸磺化得到酪氨酸-O-磺酸(分子式1)，反应收率为14％。具体反应如下所示：由于反应收率过低，后处理难度非常大，很难得到高纯度的产品，这个方法很难应用到生产中。Toth,Gabor K.等人提出了另一种合成方案(Comparison and optimization of synthetic methods for preparing cholecystokinin peptidesInternational Journal of Peptide&Protein Research,26(6),630-8；1985)，他们使用氯磺酸为磺化试剂，以吡啶为缚酸剂，在氯仿中将酪氨酸磺化得到酪氨酸-O-磺酸，再将所得到的粗产物用氢氧化钠制成酪氨酸 -O-磺酸钠，经过后处理得到纯品。具体反应如下所示：该方法由于使用了氯仿为溶剂，安全方面有较大的问题。Penke,Botond and Nyerges,Levente对这个方法进行了更深入的研究(Solid-phase synthesis of porcine cholecystokinin-33in a new resin via FMOC strategyPeptide Research,4(5),289-95；1991)，他们将反应溶剂由氯仿改成三氟醋酸，极大地提高了反应的安全性，反应收率80％。Ueki,M.等人(Synthesis and anti-HIV activity of nonatyrosine N-and O1-9-decasulfateBioorganic&Medicinal Chemistry,9(2),477-486；2001)用吡啶三氧化硫络合物为磺化试剂，在DMF(N,N-二甲基甲酰胺)中磺化得到酪氨酸-O-磺酸，然后用碱调节pH，得到酪氨酸-O-磺酸二钠盐，反应收率81％，但是由于得到其二钠盐所需用碱的量比较大，操作中反应液的pH值也太大，酪氨酸-O-磺酸部分水解导致产品中酪氨酸含量较大，纯化难度极大。Futaki,Shiroh等人于1990年发表文章提出了另一种合成思路(Use of dimethylformamide-sulfur trioxide complex as a sulfating agent of tyrosineJournalofthe Chemical Society,PerkinTransactions 1:Organic and Bio-Organic Chemistry(1972-1999),(6),739-44；1990)，他们利用三氧化硫DMF络合物为磺化试剂，在吡啶与DMF混合溶剂中进行磺化，获得酪氨酸-O-磺酸。具体反应如下所示：在上述方法的基础上，Takeshi Yagami等人在1993年提出一个方案(Evalution of the Final Deprotection System for the Solid-Phase Synthesis of Tyr(SO3H)-Containing Peptide with9-Fluorenylmethyloxycarbonyl(Fmoc)-Strategy and Its Application to the Synthesis of Cholecystokinin(CCK)-12,Chem.Pharm,Bull.41(2)376-380(1993)),以DMF、吡啶及二氧六环混合液为溶剂，三氧化硫DMF络合物为磺化试剂对Fmoc保护的酪氨酸进行磺化(室温条件下搅拌过夜)，反应液浓缩后得到的粗品用碳酸钠进行碱化，经过冻干、柱层析等步骤得到纯品,文献报道收率为87％。然而，现有技术中，反应产物的纯化方法较为复杂，这极大地限制了产物的规模化生产。
技术实现思路
本专利技术克服现有技术中的缺点，提供一种制备酪氨酸-O-磺酸盐的方法，所述方法包括如下步骤：(1)在稀释剂和碱的存在下，将磺化试剂和Fmoc保护的酪氨酸反应，得到反应液；(2)将步骤(1)的反应液倒入不良溶剂中，然后静置；(3)倾去步骤(2)所得物的上清液，残余物用水溶解，然后用碱调节pH至弱酸性；(4)用良溶剂洗涤步骤(3)所得水溶液，然后浓缩；(5)向步骤(4)的浓缩物中加入良溶剂并搅拌，过滤，滤液加入至不良溶剂中，搅拌，收集固体，干燥，得到固体；其中，Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连。本专利技术的制备方法，避免了使用蒸馏、冻干等耗时长、设备要求高的问题，后处理中通过增加萃取操作，极大地提高了纯度，避免了使用难以放大的柱层析纯化操作，其是一个适合放大生产、操作简单、产品纯度高的方法。附图说明图1实施例2所得产物的HPLC图具体实施方式本专利技术的制备酪氨酸-O-磺酸盐的方法包括如下步骤：(1)在稀释剂和碱的存在下，将磺化试剂和Fmoc保护的酪氨酸反 应，得到反应液；(2)将步骤(1)的反应液倒入不良溶剂中，然后静置；(3)倾去步骤(2)所得物的上清液，残余物用水溶解，然后用碱调节pH至弱酸性；(4)用良溶剂洗涤步骤(3)所得水溶液，然后浓缩；(5)向步骤(4)的浓缩物中加入良溶剂并搅拌，过滤，滤液加入至不良溶剂中，搅拌，收集固体，干燥，得到固体；其中，Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连。在本说明书中，如无相反说明，则所述操作均在常温常压下进行。在本说明书中，在室温常压下，在100g溶剂中，能溶解不小于10g产物的溶剂称为良溶剂；在室温常压下，在100g溶剂中，能溶解不大于1g产物的溶剂称为不良溶剂。在本说明书中，步骤(4)和步骤(5)的良溶剂可相同或不同，优选不同。在本说明书中，步骤(2)和步骤(5)的不良溶剂可相同或不同，优选相同。在步骤(1)中，所述稀释剂可以是所有对参与该反应的物质呈惰性的有机溶剂，例如，但不限于：DMF、1,4-二氧六环等，或其任意组合，所述碱可为碱性较弱的碱，例如，但不限于：有机碱，如吡啶、三乙胺等，所述磺化试剂可为三氧化硫吡啶络合物、硫酸、发烟硫酸或三氧化硫DMF络合物，优选三氧化硫DMF络合物。在步骤(2)中，所述反应液可由步骤(1)中的反应液直接得到，也可由步骤(1)中的反应液经处理后得到，如通过浓缩除去低沸点溶剂而仅剩产物和高沸点溶剂，所述不良溶剂为与步骤(1)的反应液互溶的溶剂，例如，但不限于：醚类，如乙醚、丙醚、甲基叔丁基醚，或它们的混合物，在一个优选的实施方案中，所用不良溶剂的温度低于0℃，所述静置可在室温下本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备酪氨酸‑O‑磺酸盐的方法，其包括如下步骤：(1)在稀释剂和碱的存在下，将磺化试剂和Fmoc保护的酪氨酸反应，得到反应液；(2)将步骤(1)的反应液倒入不良溶剂中，然后静置；(3)倾去步骤(2)所得物的上清液，残余物用水溶解，然后用碱调节pH至弱酸性；(4)用良溶剂洗涤步骤(3)所得水溶液，然后浓缩；(5)向步骤(4)的浓缩物中加入良溶剂并搅拌，过滤，滤液加入至不良溶剂中，搅拌，收集固体，干燥，得到固体；其中Fmoc为9‑芴甲氧羰基，与氨基相连。

【技术特征摘要】
1.一种制备酪氨酸-O-磺酸盐的方法，其包括如下步骤：(1)在稀释剂和碱的存在下，将磺化试剂和Fmoc保护的酪氨酸反应，得到反应液；(2)将步骤(1)的反应液倒入不良溶剂中，然后静置；(3)倾去步骤(2)所得物的上清液，残余物用水溶解，然后用碱调节pH至弱酸性；(4)用良溶剂洗涤步骤(3)所得水溶液，然后浓缩；(5)向步骤(4)的浓缩物中加入良溶剂并搅拌，过滤，滤液加入至不良溶剂中，搅拌，收集固体，干燥，得到固体；其中Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连。2.根据权利要求1的方法，其中，在步骤(2)中，所述不良溶剂为乙醚、丙醚、甲基叔丁基醚，或它们的混合物。3.根据权利要求1的方法，其中，在步骤(2)中，所用不良溶剂的温度低于0℃。4.根据权利要求1的方法，其中，在步骤(3)中，所述水的温度可为0-25℃，优选0-...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘飞孟，方奕华，伍柯瑾，陶安进，袁建成，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44