公开了制备富集与因子结合的受体(通常是分子印迹聚合物，MIP)的组合物的方法，其中所述受体各自特异性结合所述因子上的至少两个不连续位点，所述制备是通过对受体样品进行使用所述因子的第一亲和纯化步骤，其中所述因子上的一个结合位点是受体结合不可及的，并随后对纯化的受体进行使用所述因子的至少一个另外的亲和纯化步骤，其中所述因子上的第二结合位点是不可及的。还公开了治疗、改善或预防选自由苯丙酮尿症(PKU，福兰格氏病)、高苯丙氨酸血症(HPA)、尿黑酸尿症(黑尿病)、酪氨酸血症、高酪氨酸血症、重症肌无力、组氨酸血症、尿刊酸尿症、枫糖尿症(MSUD)、异戊酸血症(异戊酰辅酶A脱氢酶缺乏症)、高胱氨酸尿症、丙酸血症、甲基丙二酸血症和1型戊二酸尿症(GA-1)、半乳糖血症组成的组的疾病的方法，所述方法包括向需要其的患者的胃肠道施用有效量的分子印迹聚合物(MIP)组合物，所述组合物能够结合所述疾病的症状引发剂。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及复合受体，即能够结合症状引发分子例如氨基酸或碳水化合物上的多个结构的受体的纯化领域。本专利技术还涉及治疗数种代谢紊乱的方法，在这些代谢紊乱中来源于普通膳食的生物分子在患者体内引发疾病症状。
技术介绍
亲和层析是利用层析基质上的分子与该分子的结合配偶体之间的相互作用以从与该分子具有不同亲和力的物质的更大池中或从粗混合物例如发酵储液中选择结合配偶体亚群的方法。利用分子之间的结合以用于纯化、分析、诊断等目的的方法，例如亲和层析，受到由层析基质上的分子的取向导致的位阻和受到其与基质偶合的方式(经由载体分子、间隔物、接头等)的固有限制。这种限制的后果是仅分子总集的有限部分的不连续结合位点暴露于受体-用于与基质偶合的那些位点不能靠近与被包被的层析基质处于接触状态的结合配偶体。在许多情况中，由于感兴趣的是结合配偶体的单独一个特定结合特征，这不存在问题。当开发受体时，无论是所谓的天然受体例如抗体，或合成受体例如分子印迹聚合物(MIP)，可溶或不溶的最佳结合单独受体实体-抗体分子或MIP颗粒的选择/分离是提高所得的基于受体的产品的亲和力、特异性、容量等的手段-关于MIP，参考WO 2007/095949 其中公开了纯化方法，该纯化方法产生具有提高的对靶分子的结合亲和力和容量的MIP组合物。然而，存在对进一步提高组合物例如MIP和多克隆抗体的结合特性的需要。专利技术概述当制备靶分子的受体组合物时，与靶分子结合的亲和力或亲合力(avidity)取决于几个因素。相对大的受体分子例如多克隆抗体和MIP与较小的靶在该靶上的几个不同的不连续位点(discrete site)上结合且将靶分子用作层析基质上的捕获剂，其中经由一个特定的官能团连接靶分子的纯化方法将具有的结果是纯化产物不必要结合那个官能团 (因为其在与基质偶合之后是结合不可及的)。另一方面，这些多位点结合受体的独特性质是第一轮纯化之后获得的分子将包括至少部分地结合第一轮纯化不可及的位点的受体。所以，如果技术人员设计使用相同靶分子作为捕获剂，但经由不同的官能团结合的另外步骤， 进一步富集对第一纯化步骤中的“隐藏结合位点”也显示出适度高特异性的那些受体应该是可能的。富集与期望靶分子的“特有”部分结合的受体也将是可能的-对于其中官能团经由其与基质的结合而隐藏的每一纯化步骤，将在纯化程序期间排除其结合依赖隐藏官能团的受体-因此，如果靶分子包括与许多其他分子(如氨基酸的情形，其中每一种氨基酸都具有在氨基酸之间结构上相同的N端和C端)共有的非特有官能团，其中每一种非特有官能团依次被隐藏的多步纯化程序将提供与靶分子真正特有的官能团结合的受体组合物。因此，第一方面本专利技术涉及制备富集与因子(agent)结合的受体的组合物的方法，其中所述受体各自特异性结合所述因子上的至少两个不连续位点，所述方法包括a.提供包含所述受体的样品，b.对所述样品进行第一亲和层析步骤，其中所述因子用作亲和纯化剂，且其中经由与所述至少两个不连续位点的单个位点结合将所述因子固定在固相或半固相上，c.回收与所述因子结合的受体，d.对前述步骤中回收的受体进行至少一个另外的亲和层析步骤，其中所述因子用作亲和纯化剂，且其中经由与所述至少两个不连续位点的另一个位点结合将所述因子固定在固相或半固相上，并回收与所述因子结合的受体，其中，在每一个所述至少一个另外的亲和层析步骤中，所述至少两个不连续位点的所述另一个位点与已用于前述步骤b和d中将所述因子固定在固相或半固相上的所述至少两个不连续位点的任何一个位点不同。第二方面，本专利技术涉及制备富集与因子结合的受体的组合物的方法，其中所述受体各自特异性结合所述因子上的至少两个不连续位点，所述方法包括按照本专利技术第一方面的方法制备至少两种组合物并随后组合所述至少两种组合物以获得富集与所述因子结合的受体的组合物，其中在制备所述至少两种组合物中的步骤b和d中使用相同因子，且其中i.对于至少两种组合物，用于固定到固相或半固相上以制备所述至少两种组合物的每一种的所述因子中的不连续位点的组合不同，和/或ii.在制备所述至少两种组合物的至少两种的过程中，用于固定到固相或半固相上以制备所述至少两种组合物的每一种的所述因子中的不连续位点的使用顺序 (sequential order)不同。第三方面，本专利技术涉及治疗、改善或预防选自由苯丙酮尿症(PKU，福兰格氏病 (Folling's disease ))、高苯丙氨酸血症(HPA)、尿黑酸尿症(黑尿病)、酪氨酸血症、高酪氨酸血症、重症肌无力、组氨酸血症、尿刊酸尿症(urocanic aciduria)、枫糖尿症(MSUD)、异戊酸血症(异戊酰辅酶A脱氢酶缺乏症)、高胱氨酸尿症、丙酸血症、甲基丙二酸血症、1型戊二酸尿症(GA-I)和半乳糖血症组成的组的疾病的方法，所述方法包括向需要其的患者的胃肠道施用有效量的分子印迹聚合物(MIP)组合物，所述组合物能够结合所述疾病的症状引发剂(symptom provoking agent) 0有关这一方面该方法中使用的是MIP组合物。最后，第四方面，本专利技术涉及制备药物组合物的方法，所述方法包括通过使用本专利技术第一或第二方面的方法制备组合物并随后将所述组合物与药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物混合。专利技术公开详述定义本文使用术语“受体”以指定显示出对目的因子即靶有亲和力并能够特异性结合目的因子的物质。因此该术语包括通常称作生物受体分子的物质而且包括发挥特异性结合作用的其他分子例如抗体和分子印迹聚合物。关于这点，特异性结合的性质是重要的，且有效地排除结合数种无关靶的物质；然而，不排除受体与看似无关分子结合的交叉反应，因为这一特征要求被该受体结合的两个靶中存在共同的结构元件。通常，特异性结合的特征是与在结合测定中用作阴性对照的一种或多种无关分子的结合相比，对靶有更高的结合亲和力。“分子印迹聚合物”(MIP)是包含至少部分地与聚合前已被整合到包括交联单体的单体基质中的一种或多种模板分子对应的空穴(或空腔)的聚合物。聚合后得到的聚合物包括形状上与模板分子对应的多个空穴。通常，MIP掩蔽(sequester)成小颗粒，从而促进模板的去除并使部分空穴开放以与类似于模板分子或与模板分子相同的靶分子相互作用。在本说明书和权利要求书中，术语MIP通常是指任何形式的MIP (可溶的以及不溶的)，含义是术语“MIP”和“MIPs”可分别与表述MIP颗粒(MIP particle)和MIP颗粒(MIP particles)互换地使用。将应理解本专利技术纯化或使用的某些MIP是不溶性分子/实体-这是指例如根据WO 2007/095949中的原理制备的MIP的情况。由于其不溶性限制或阻止其从胃肠道进入身体 (例如，进入循环)，这些MIP尤其适合作为用于胃肠道中的药物。换句话说，当口服时，用于本专利技术的不溶性MIP将大体上保持局限于胃肠道直到将其在排泄物中排泄出去。然而，根据本文提供的原理纯化的MIP也可以是可溶性MIP，其在多种不同的应用中是有用的，在这些应用中不是特别关注将MIP局限于胃肠道。“抗体”是由B淋巴细胞对免疫刺激的应答产生和分泌的可溶性生物分子。在本文上下文中，该术语大多用来指多克隆抗体，即由多个B淋巴细胞克隆产生的抗体的混合物。 该本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：尼古拉斯·奥托·克罗赫，克劳斯·格利高里斯，
申请(专利权)人：米普萨卢斯公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。