【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向苯丙氨酸的分子印迹聚合物专利
本专利技术涉及靶向先天性和获得性的代谢障碍的剂和方法，以及用于制备该剂的方法。特别地，本专利技术涉及用于制备对于苯丙氨酸或酪氨酸具有高结合能力的分子印迹聚合物的方法，结合苯丙氨酸或酪氨酸的MIP，以及用于治疗苯丙酮尿症、尿黑酸尿症和高酪氨酸血症的方法。专利技术背景先前，本专利技术人已经提供了用于制备分子印迹聚合物(MIP)的方法，该分子印迹聚合物提供迄今为止所未见的通过得到的MIP组合物结合的能力。以这种方式，本专利技术人已经提供了先前不可能用医药产品来解决的某些代谢障碍的新型治疗：例如，通过每日施用将苯丙氨酸限制在胃肠道的高能力MIP来治疗苯丙酮尿症已成为重大进步。通过这些方法获得的改进的MIP的另一个优点是它们在高度灵敏性测定中的用途。建立本专利技术的基础的技术例如在WO2007/095949、WO2011/033021、WO2013/127433和PCT/EP2017/056059中公开，这些文献的内容通过引用并入本文。专利技术目的本专利技术的实施方案的目的...
【技术保护点】
1.一种用于制备特异性地结合L-苯丙氨酸(Phe)和L-Phe残基的分子印迹聚合物(MIP)的方法，所述方法包括以下步骤：/na)在催化剂和氧化剂的存在下将混合物聚合，以便获得交联的印迹聚合物，所述混合物包含：/n-2-甲基丙-2-烯酸(MAA)，/n-1,4-双(丙烯酰基)哌嗪(DAP)，以及/n-由暴露苯丙氨酸基序的L-Phe或L-Phe衍生物组成的模板分子/nb)如果需要，随后将所述交联的印迹聚合物碎片化以获得第一碎片化聚合物，并且收集具有小于63μm的粒度的MIP，/nc)任选地洗涤和干燥从步骤b中获得的聚合物级分，/nd)将从步骤b或步骤c中获得的所述聚合物级分碎...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170629 EP 17178745.01.一种用于制备特异性地结合L-苯丙氨酸(Phe)和L-Phe残基的分子印迹聚合物(MIP)的方法，所述方法包括以下步骤：
a)在催化剂和氧化剂的存在下将混合物聚合，以便获得交联的印迹聚合物，所述混合物包含：
-2-甲基丙-2-烯酸(MAA)，
-1,4-双(丙烯酰基)哌嗪(DAP)，以及
-由暴露苯丙氨酸基序的L-Phe或L-Phe衍生物组成的模板分子
b)如果需要，随后将所述交联的印迹聚合物碎片化以获得第一碎片化聚合物，并且收集具有小于63μm的粒度的MIP，
c)任选地洗涤和干燥从步骤b中获得的聚合物级分，
d)将从步骤b或步骤c中获得的所述聚合物级分碎片化，并且收集具有在150nm-250nm范围内的粒度的第二碎片化聚合物，
e)使从步骤d中获得的所述第二碎片化聚合物经受亲和色谱法，其中Phe在色谱基质中构成亲和标签，以及
f)回收在步骤e中与Phe结合的MIP。
2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤a中的所述聚合混合物以5-30的摩尔比包含MAA和DAP。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤a中的所述聚合混合物以在1.0-4.0之间，诸如1.1、约1.2、约1.3、约1.4、约1.5、约1.6、约1.7、约1.8、约1.9、约2.0、约2.1、约2.2、约2.3、约2.4、约2.5、约2.6、约2.7、约2.8、约2.9、约3.0、约3.1、约3.2、约3.3、约3.4、约3.5、约3.6、约3.7、约3.8、约3.9和约4.0的摩尔比包含MAA和模板分子。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述模板分子是呈包含至少一个L-Phe残基的肽的形式的L-Phe衍生物。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述模板分子是二肽或三肽。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述模板分子选自由以下组成的组：
Gly-L-Phe、
Ala-L-Phe、
L-Asp-L-Phe-OMe、
L-Asp-L-Phe、
Gly-Gly-L-Phe、
Ala-Gly-L-Phe、
Gly-Ala-L-Phe、
L-Phe-Gly、
L-Phe-Ala、
L-Phe-L-Phe、
L-Phe-Ala-L-Phe、
L-Phe-Gly-L-Phe。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述模板分子是Gly-L-Phe。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤a)中的所述催化剂选自由以下组成的组：四甲基乙二胺、二甲基哌嗪，优选地四甲基乙二胺(TEMED)。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤a)中的所述氧化剂选自由以下组成的组：过硫酸铵、过硫酸钾和硫代硫酸钠，优选地过硫酸铵(APS)。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤b中的碎片化包括研磨、碾磨、爆炸、锤击、球磨、低温研磨或碰撞均质化。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤b中收集的MIP具有在25μm-63μm范围内的尺寸。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤b需要收集能够通过具有63μm截止值的筛的MIP。
13.根据权利要求12所述的方法，其中步骤b还需要收集被保留在具有25μm截止值的筛上的MIP。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中洗涤以交替的pH用有机溶剂进行。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述MIP在步骤c)中在升高的压力下洗涤期间填充在HPLC柱中。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤d中的碎片化在球磨机或珠磨机中进行。
17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤d中的MIP的收集通过以下来进行：将MIP悬浮在水性溶剂诸如水中，在超声浴中孵育，离心，并且分离含有150nm-250nmMIP的上清液。
18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤d需要洗涤以从残余的模板分子中分离所述MIP，诸如透析洗涤步骤或超速离心机中的洗涤步骤。
19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤e)中的所述亲和色谱法使用固定的色谱基质在填充床色谱柱上进行，并且其中所述MIP悬浮在缓冲的水性溶剂中。
20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤f)中的回收包括从所述色谱基质中洗脱所述MIP。
21.一种分子印迹聚合物(MIP)，其特异性地结合L-苯丙氨酸(Phe)，其中所述MIP包含与1,4-二丙烯酰基哌嗪(DAP)交联的聚合的甲基丙烯酸(MAA)。
22.根据权利要求21所述的MIP，其中MAA残基和DAP残基之间的摩尔比在5和30之间。
23.根据权利要求21-22中任一项所述的MIP，其是通过根据权利要求1-20中任一项所述的方法可获得的或者通过根据权利要求1-20中任一项所述的方法获得。
24.根据权利要求21-23中任一项所述的分子印迹聚合物，其具有与L-Phe结合小于10-7，诸如小于10-8、小于9×10-9、小于8×10-9、小于7×10-9、小于6×10-9、小于5×10-9、小于4×10-9、小于3×10-9和小于2×10-9的KD。
25.根据权利要求24所述的分子印迹聚合物，其中所述KD是约10-9。
26.一种组合物，包含根据权利要求21-24中任一项所述的分子印迹聚合物，所述组合物包含药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或赋形剂，其中所述组合物适于口服施用。
27.一种用于制备特异性地结合L-酪氨酸(Tyr)的MIP的方法，所述方法包括从MIP的初始组合物中回收结合L-酪氨酸的MIP，所述MIP的初始组合物已经使用包含至少一个苯丙氨酸基序并且不包含Tyr残基的分子作为聚合和交联期间的模板分...
【专利技术属性】
技术研发人员：克劳斯·格利高里斯，尼古拉斯·奥托·克罗赫，
申请(专利权)人：米普萨卢斯公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK
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