一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法技术

一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，将魔芋飞粉加入到水中，溶解后调节pH值至等电点，离心得魔芋蛋白沉淀；再将魔芋蛋白沉淀加水溶解后，得到魔芋蛋白溶液，调节魔芋蛋白溶液的温度为25‑45℃、pH值为3‑8，然后加入胰凝乳蛋白酶进行酶解，得到酶解液；将酶解液灭酶后调节pH值为3.8后离心，收集上清液；将上清液经超滤装置后收集滤液，冷冻干燥，得到ACE抑制肽。本发明专利技术对实现魔芋飞粉有效利用，生产其高附加值产品具有重要意义。本发明专利技术方法工艺路线简单易行，操作简单，所使用的设备为成熟设备，投资成本较低，ACE抑制肽回收率高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于ACE抑制肽制备领域，具体涉及一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法。
技术介绍
高血压是一种以动脉血压持续升高为主要表现的慢性疾病，常引起心、脑、肾等重要器官的病变并出现相应的后果。高血压患者一般需要长期服用降血压药物，这可能会导致出现咳嗽、肾功能减退、蛋白尿、肝功能异常、血管神经性水肿等不良反应。因此天然、有效、无副作用、可长期服用的ACE抑制肽成为高血压药物方面研究的热点。目前，在ACE抑制肽来源研究方面，仅是从豆粕、大豆、酪蛋白、牛乳、麦胚蛋白、牡蛎等原料中发现了ACE抑制肽。而有关以魔芋为原料制备ACE抑制肽的研究甚少。我国是魔芋生产大国，全国年产魔芋飞粉1500-2000吨。魔芋飞粉含蛋白质20％左右，目前对魔芋的利用主要集中于魔芋精粉(葡甘聚糖)，而魔芋飞粉大多以低价作为饲料或干燥剂出售，利用价值低。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，提高魔芋飞粉的利用价值，同时拓宽了ACE抑制剂的来源。为实现上述目的，本专利技术所采取得技术方案是：一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，包括以下步骤：1)将魔芋飞粉加入到水中，溶解后调节pH值至等电点，离心得魔芋蛋白沉淀；再将魔芋蛋白沉淀加水溶解后，得到魔芋蛋白溶液，调节魔芋蛋白溶液的温度为25-45℃、pH值为3-8，然后加入胰凝乳蛋白酶进行酶解，得到酶解液；2)将酶解液灭酶后调节pH值为3.8后离心，收集上清液；将上清液经超滤装置后收集滤液，冷冻干燥，得到ACE抑制肽。步骤1)中将魔芋飞粉加入到水中时，魔芋飞粉与水的质量比为1:50。步骤1)和2)中pH值均是采用盐酸调节的。步骤1)中魔芋蛋白溶液的质量浓度为1-10％。步骤1)中每克魔芋蛋白溶液重加入胰凝乳蛋白酶的量为3000-8000U。步骤1)中酶解的时间为120-300min。步骤1)中离心的速率为3000-4000rpm，时间20-40min。步骤2)中灭酶具体是在90℃下保温至少10min。步骤2)中离心的转速为8000-10000rpm，时间为15-30min。将步骤2)得到ACE抑制肽还经过DA-201大孔吸附树脂脱盐纯化。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术以魔芋飞粉为原料，经胰凝乳蛋白酶进行酶解后，得到酶解液，将酶解液灭酶后得到ACE抑制肽，本专利技术得到的ACE抑制肽的抑制率高达65％以上，说明制备得到了ACE抑制肽，并且活性较高，可制成各种制剂。本专利技术利用魔芋飞粉制备了ACE抑制肽，一方面将低价值的魔芋飞粉转化为具有较高价值的ACE抑制肽，变废为宝，充分利用了资源，拓宽了魔芋飞粉的开发利用领域，另一方便也拓宽了ACE抑制肽的来源；本专利技术制备方法简单，利于大量生产，并且成本低。本专利技术对实现魔芋飞粉有效利用，生产其高附加值产品具有重要意义。本专利技术方法工艺路线简单易行，操作简单，所使用的设备为成熟设备，投资成本较低，ACE抑制肽回收率高。进一步的，将得到的酶解液加热至90℃，保温至少10min，以使其中的胰凝乳蛋白酶灭活，再进行离心。进一步的，将步骤2)得到ACE抑制肽还经过DA-201大孔吸附树脂脱盐纯化，可以得到高纯度的ACE抑制肽。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步详细说明。本专利技术所采用的ACE抑制活性的测定，具体步骤为：按要求配制所需试剂，如表1所示，将各试剂加入到试管中，于37℃水浴中反应30min，反应结束后，加入1mol/L盐酸终止反应(样品C需要提前加入盐酸)，然后向试管中加入1.9mL的乙酸乙酯，震荡15s，静置5min，吸取1mL的乙酸乙酯层，于100℃的烘箱内蒸干，40min后取出冷却，再将其重新溶解于3mL的去离子水中，于波长228nm处测定吸光度。表1ACE抑制率检测方法ACE抑制率计算公式为：式中：Aa：是反应中ACE抑制剂及ACE同时存在的吸光度；Ab：是反应中不加ACE抑制剂的吸光度；Ac：是ACE和HHL空白反应的吸光度。实施例11)将魔芋飞粉与水按照质量比例1：50进行混合溶解，边搅拌边滴加盐酸溶液(浓度为1.0mol/L)，使pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离心机在3000rpm下离心40min后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为1％的魔芋蛋白溶液；采用磁力加热搅拌器进行搅拌，温度为30℃，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加盐酸溶液调pH值至7，加入胰凝乳蛋白酶，酶解180min，得到酶解液；其中，每克魔芋蛋白溶液重加入胰凝乳蛋白酶的量为3000U。3)将酶解液置于90℃恒温水浴锅中保持10min灭酶活，之后自然冷却至室温，将酶解液调至pH值为3.8，在10000rpm离心20min，收集上清液；4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肽。经ACE抑制活性的测定，其对ACE活性的抑制率＞60％。实施例21)将魔芋飞粉与水按照质量比例1：50进行混合溶解，边搅拌边滴加盐酸溶液，使pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离心机在4000rpm下离心20min后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为10％的魔芋蛋白溶液；采用磁力加热搅拌器进行搅拌，温度为35℃，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加盐酸溶液调pH值至7.5，加
入胰凝乳蛋白酶，酶解210min，得到酶解液；其中，每克魔芋蛋白溶液重加入胰凝乳蛋白酶的量为4000U。3)将酶解液置于90℃恒温水浴锅中保持10min灭酶活，之后自然冷却至室温，将酶解液调至pH值为3.8，在10000rpm离心15min，收集上清液；4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肽。经ACE抑制活性的测定，其对ACE活性的抑制率＞55％。实施例31)将魔芋飞粉与水按照质量比例1：50进行混合溶解，边搅拌边滴加盐酸溶液，使pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离心机在3500rpm下离心35min后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为4％的魔芋蛋白溶液；采用磁力加热搅拌器进行搅拌，温度为40℃，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加盐酸溶液调pH值至8，加入胰凝乳蛋白酶，酶解240min，得到酶解液；其中，每克魔芋蛋白溶液重加入胰凝乳蛋白酶的量为6000U。3)将酶解液置于90℃恒温水浴锅中保持10min灭酶活，之后自然冷却至室温，将酶解液调至pH值为3.8，在9000rpm离心30min，收集上清液；4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肽。经ACE抑制活性的测定，其对ACE活性的抑制率＞65％。实施例41)将魔芋飞粉与水按照质量比例1：50进行混合溶解，边搅拌边滴加盐酸溶液，使混合液的pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离心机在3000rpm下离心40min后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为7％的魔芋蛋白溶液；采用磁力加热搅拌器进行搅拌，温度为37℃，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加盐酸溶液调pH值至3，加入胰凝乳蛋白酶，酶解300min，得到酶解液；其中，每克魔芋蛋白溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将魔芋飞粉加入到水中，溶解后调节pH值至等电点，离心得魔芋蛋白沉淀；再将魔芋蛋白沉淀加水溶解后，得到魔芋蛋白溶液，调节魔芋蛋白溶液的温度为25‑45℃、pH值为3‑8，然后加入胰凝乳蛋白酶进行酶解，得到酶解液；2)将酶解液灭酶后调节pH值为3.8后离心，收集上清液；将上清液经超滤装置后收集滤液，冷冻干燥，得到ACE抑制肽。

【技术特征摘要】
1.一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将魔芋飞粉加入到水中，溶解后调节pH值至等电点，离心得魔芋蛋白沉淀；再将魔芋蛋白沉淀加水溶解后，得到魔芋蛋白溶液，调节魔芋蛋白溶液的温度为25-45℃、pH值为3-8，然后加入胰凝乳蛋白酶进行酶解，得到酶解液；2)将酶解液灭酶后调节pH值为3.8后离心，收集上清液；将上清液经超滤装置后收集滤液，冷冻干燥，得到ACE抑制肽。2.根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤1)中将魔芋飞粉加入到水中时，魔芋飞粉与水的质量比为1:50。3.根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤1)和2)中pH值均是采用盐酸调节的。4.根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤1)中魔芋蛋白溶液的质量浓度为1-10％。5.根据权利要求4所述的一种胰凝乳蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛跟年，贺磊，周亚丽，曹晴，许牡丹，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61