壳聚糖-精氨酸阴离子树脂固定化胰凝乳蛋白酶的方法技术

一种壳聚糖－精氨酸阴离子树脂固定化胰凝乳蛋白酶的方法，涉及壳聚糖衍生物固定化酶的方法。本发明专利技术以市售壳聚糖为原料，先制备交联壳聚糖树脂。再制备壳聚糖－精氨酸阴离子树脂，最后进行希夫反应固定化胰凝乳蛋白酶而得成品。本发明专利技术具有方法简单，操作简便，反应条件温和，生产成本低，固定化酶的稳定性高，酶活回收率高达８９．９５％，半衰期长，即７５℃的半衰期长达１８小时，４℃的半衰期长达５６天，最适ｐＨ值仅为５．９２。采用本发明专利技术制备出的产品，可广泛应用于医药、食品、轻工业等行业的各种水相及非水相的酶促反应。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种壳聚糖－精氨酸阴离子树脂固定化胰凝乳蛋白酶的方法，其特征在于具体的方法步骤如下：　　　　（１）制备交联壳聚糖树脂　　　　以市售壳聚糖为原料，先将壳聚糖加入盐酸质量百分数为１～５％稀盐酸中，就制备出壳聚糖质量百分数为１～４％的壳聚糖酸性溶胶，后按壳聚糖酸性溶胶∶液体石蜡的体积比为１∶１～４的比例，将壳聚糖酸性溶胶缓慢加入液体石蜡中，搅拌２０～３０ｍｉｎ，并加热升温至３５～４５℃制得到壳聚糖石蜡溶液后，再加入占壳聚糖石蜡溶液体积分数为０．０５～０．２５％的吐温８０，进行乳化２０～３０ｍｉｎ，然后加入占壳聚糖石蜡溶液体积分数为０．０５～０．３％戊二醛交联剂，再加入占壳聚糖石蜡溶液质量分数为０．０１～０．１％碳酸钙致孔剂，进行制孔反应５０～７０ｍｉｎ制得壳聚糖微球的悬浮液，最后用氢氧化钠溶液调节壳聚糖微球悬浮液的ｐＨ值为９～１０，并加热至５５～７５℃，搅拌固化２～４ｈ，再过滤，弃滤液，收集滤渣，对滤渣先用乙醇洗涤３～６次，后用质量分数为１～５％稀盐酸溶解滤渣中的碳酸钙，再用蒸馏水洗涤至中性；　　　　（２）壳聚糖－精氨酸阴离子树脂的制备　　　　第（１）步完成后，将第（１）步制备出的交联壳聚糖树脂，加入精氨酸质量分数为０．５～２．０％精氨酸溶液中，振荡２０～３０ｍｉｎ，制备出壳聚糖质量分数为０．５～２．５％的壳聚糖－精氨酸溶液，然后按壳聚糖－精氨酸溶液中精氨酸∶二环己基碳二亚胺的摩尔比为１∶０．５～２．５的比例，在壳聚糖－精氨酸溶液中，加入ＤＣＣ接肽缩合剂，进行缩合反应２０～４０ｍｉｎ，最后经过滤，弃滤液，收集滤渣，对滤渣先用乙醇洗涤３～６次，后用蒸馏水透析８～１２ｈ后，再过滤，再弃滤液，再收集滤渣；　　　　（３）胰凝乳蛋白酶的固定　　　　第（２）步完成后，先将胰凝乳蛋白酶加入ｐＨ值为４．５～６．０磷酸盐缓冲液中，搅拌均匀，就制备出胰凝乳蛋白酶的摩尔浓度为０．０５～０．０８ｍｏｌ／Ｌ的胰凝乳蛋白酶磷酸盐溶液，后按第（２）步制备出的壳聚糖－精氨酸阴离子树脂∶胰凝乳蛋白酶磷酸盐溶液中胰凝乳蛋白酶的质量比为１∶１５～２５的比例，将壳聚糖－精氨酸阴离子树脂加入胰凝乳蛋白酶磷酸盐溶液中，在３０～６０℃的恒温水浴条件下，振荡２０～４０ｍｉｎ，再按戊二醛∶壳聚糖－精氨酸阴离子树脂的质量比为１∶６～１４的比例，将戊二醛加入到悬浮壳聚糖－精氨酸阴离子树脂的胰凝乳蛋白酶磷酸盐溶液中，并置于振荡器中振荡，进行希夫反应５０～７０ｍｉｎ后，进行...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周小华，柳小平，王东，王娟，
申请(专利权)人：重庆大学，
类型：发明
国别省市：85[中国|重庆]