一种新的多肽——G-底物蛋白12.43和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－Ｇ－底物蛋白１２．４３，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如平衡失调，位置性眼震颤，小脑性共济失调，精巧运动障碍等疾病等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的Ｇ－底物蛋白１２．４３的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——G-底物蛋白12.43，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。经系统中，小脑在运动的调节过程中起着非常重要的作用(Ito，M.，1984；Thach，W.T.，1998)。小脑中存在一种G-底物蛋白，它是少数几个cGMP依赖的蛋白激酶(PKG)的优先底物之一(Nairn，A.C.，Hemmings，H.C.，Jr.&Greengard，P.，1985；Aitken，A.，Bilham，T.et al.，1981)。G-底物蛋白集中于小脑的Purkinje细胞中，并且比较靠近PKG(Qian，Y.，Chao，D.S.，Santillano，D.R et al.，1996)，因此它属于PKG的下游组分，同时也参与小脑的LTD反应，人的G底物mRNA只发现在小脑中有表达。将人的G-底物蛋白的基因重组体转入大肠杆菌中进行表达，得到的蛋白与兔子小脑的G-底物蛋白在序列结构上非常相似。更为重要的是，纯化的G-底物能够被cGMA依赖的蛋白激酶磷酸化，因此它是一个高效的蛋白磷酸酶2A(PP2A)抑制剂。G-底物蛋白含有两个磷酸化位点，即Thr68和Thr119。将人与兔的G-底物蛋白进行序列比较，发现其在磷酸化位点上是保守的，不仅如此，在其它区域上也显示了很高的保守性，充分表明了两者的同源性。全长的G-底物cDNA克隆包含了一个1.7Kb的插入序列，一个3’末端的多聚A尾巴和一个短的5’非翻译区域。cDNA上含有三个mRNA扰动信号(ATTTA)(Shaw，G.&Kamen，R.，1986)和一个在开放阅读框终止密码子之后出现的多聚A信号(AATAAA)。在5’非翻译区也包含一个框内终止密码子。全长的cDNA含有一个465Bp的开放阅读框，编码了一条共有155个氨基酸残基的蛋白，其中有64个带电荷的氨基酸以及36个基本氨基酸。人的G-底物蛋白多肽是亲水性的，并且还属于热稳定性蛋白。人的G-底物蛋白定位于染色体7p15上，值得注意的是，另外也有一些与神经遗传性疾病相关的基因也位于该染色体上的附近位置。通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本专利技术的多肽的表达谱与G-底物蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为G-底物蛋白12.43。由于如上所述G-底物蛋白12.43蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的G-底物蛋白12.43蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新G-底物蛋白12.43蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——G-底物蛋白12.43以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码G-底物蛋白12.43的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码G-底物蛋白12.43的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产G-底物蛋白12.43的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——G-底物蛋白12.43的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——G-底物蛋白12.43的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与G-底物蛋白12.43异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中258-599位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1396位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制G-底物蛋白12.43蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与G-底物蛋白12.43蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于G-底物蛋白12.43表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－Ｇ－底物蛋白１２．４３，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]