一种酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法技术

本发明专利技术提供了一种酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，它以魔芋飞粉为原料，经等电点沉淀得到魔芋蛋白，用弹性蛋白酶进行水解，经灭活、离心、过滤得到魔芋蛋白酶解液，将酶解液经超滤处理后，再经大孔吸附树脂脱盐，最终分离出具有ACE抑制活性的小分子蛋白肽，再经浓缩、冷冻干燥，可制成各种制剂。本发明专利技术制备方法简单，利于大量生产，并且成本低。本发明专利技术对实现魔芋飞粉有效利用，生产其高附加值产品具有重要意义。本发明专利技术方法工艺路线简单易行，操作简单，所使用的设备为成熟设备，投资成本较低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于ACE抑制肽制备领域，具体涉及一种酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法。
技术介绍
血管紧张素转化酶(Angiotensin I–Converting Enzyme，ACE)抑制肽是一种对ACE活性具有抑制作用的多肽类物质，一般由2～20个氨基酸残基组成。ACE抑制肽通过竞争性的与ACE发生结合，阻断了具有升血压活性的血管紧张素Ⅱ的生成，同时促进了具有降血压活性的舒缓肽和脑啡肽的生成，从而起到降血压的作用。ACE抑制肽通常由蛋白酶在温和条件下水解蛋白质而获得，食用安全性高，对高血压患者可以起到降压作用而对血压正常者无降压作用，同时还具有免疫调节、减肥等功能。目前，在ACE抑制肽来源研究方面，仅是从豆粕、大豆、酪蛋白、牛乳、麦胚蛋白、牡蛎等原料中发现了ACE抑制肽。而有关以魔芋为原料制备ACE抑制肽的研究甚少。我国是魔芋生产大国，魔芋含有十分丰富的营养，富含葡甘露聚糖、淀粉、蛋白质、多种维生素和矿物质元素。其中，蛋白质经酶解可得到具有抗衰老、抗癌、降血压、免疫等功能的生物活性多肽，是生产功能性保健食品的良好原料。魔芋中的蛋白来源主要产自魔芋飞粉。魔芋飞粉是魔芋精粉加工过程中飘落的质轻、细小的粉尘，因其具有一定的蛋腥味和涩味而未被有效地开发利用，大部分被直接废弃或当动物饲料使用。检测结果发现，魔芋飞粉中蛋白质含量高达23.8％，降解后可产生支链氨基酸寡肽、ACE抑制肽、高F值寡肽、甘露聚糖肽等多种生物活性肽。但这种宝贵的自然资源至今没有被研究者重视，更少有开发和利用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，该方法通过对魔芋飞
粉进行处理，能够得到ACE抑制肽，提高了魔芋飞粉的附加值。为实现上述目的，本专利技术所采取得技术方案是：一种酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，包括以下步骤：1)将魔芋飞粉加入到水中溶解后，调节pH值至等电点，离心得魔芋蛋白沉淀；向魔芋蛋白沉淀中加入水，得到魔芋蛋白溶液，调节魔芋蛋白溶液的pH值为7-9、温度为25-50℃，然后加入弹性蛋白酶进行酶解，得到酶解液；2)将酶解液灭酶后调节pH值为3.8后离心，收集上清液；将上清液经超滤装置后收集滤液，冷冻干燥，得到ACE抑制肽。步骤1)中魔芋飞粉加入到水中时，魔芋飞粉与水的质量比为1:50。步骤1)中离心的转速为3000-4000rpm，时间为20-40min。步骤1)中pH值是采用盐酸调节的。步骤1)中魔芋蛋白溶液的质量浓度为2-10％。步骤1)中每克魔芋蛋白溶液中加入的弹性蛋白酶的量为3000-5000U。步骤1)中酶解的时间为120-240min。步骤2)中灭酶具体是在90℃下保温至少10min。步骤2)中离心的转速为8000-10000rpm，时间为15-30min。将步骤2)得到ACE抑制肽经过DA-201大孔吸附树脂脱盐纯化。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术以魔芋飞粉为原料，经弹性蛋白酶进行酶解后，得到酶解液，将酶解液灭酶后得到ACE抑制肽，本专利技术得到的ACE抑制肽的抑制率高达50％以上，说明制备得到了ACE抑制肽，并且活性较高，可制成各种制剂。本专利技术利用魔芋飞粉制备了ACE抑制肽，一方面将低价值的魔芋飞粉转化为具有较高价值的ACE抑制肽，变废为宝，充分利用了资源，拓宽了魔芋飞粉的开发利用领域，另一方便也拓宽了
ACE抑制肽的来源；本专利技术制备方法简单，利于大量生产，并且成本低。本专利技术对实现魔芋飞粉有效利用，生产其高附加值产品具有重要意义。本专利技术方法工艺路线简单易行，操作简单，所使用的设备为成熟设备，投资成本较低，ACE抑制肽回收率高。进一步的，将得到的酶解液加热至90℃，保温至少10min，以使其中的弹性蛋白酶充分灭活。进一步的，冷冻干燥得到的ACE抑制肽进一步经过DA-201大孔吸附树脂脱盐纯化，能够得到高纯度的ACE抑制肽。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步详细说明。本专利技术所采用的ACE抑制活性的测定，具体步骤为：按要求配制所需试剂，如表1所示，将各试剂加入到试管中，于37℃水浴中反应30min，反应结束后，加入1mol/L HCl终止反应(样品C需要提前加入HCl)，然后向试管中加入1.9mL的乙酸乙酯，震荡15s，静置5min，吸取1mL的乙酸乙酯层，于100℃的烘箱内蒸干，40min后取出冷却，再将其重新溶解于3mL的去离子水中，于波长228nm处测定吸光度。表1ACE抑制率检测方法ACE抑制率计算公式为：式中：Aa：是反应中ACE抑制剂及ACE同时存在的吸光度；Ab：是反应中不加ACE抑制剂的吸光度；Ac：是ACE和HHL空白反应的吸光度。实施例11)将魔芋飞粉与水按照质量比例1：50进行混合溶解，边搅拌边滴加盐酸溶液(浓度为1.0mol/L)，使混合液的pH值达到3.8，使魔芋蛋白进行沉淀，使用低速离心机在3000rpm下离心40min后，弃去上清液，得蛋白沉淀；2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为2％的魔芋蛋白溶液，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，温度38℃，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加盐酸溶液调pH至8，加入弹性蛋白酶，酶解180min，得到酶解液；其中，每克魔芋蛋白溶液中加入的弹性蛋白酶的量为5000U；3)将酶解液置于90℃恒温水浴锅中保持10min灭酶活，之后自然冷却至室温，将酶解液调至pH值为3.8，在10000rpm离心20min，收集上清液；4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肽。经ACE抑制活性的测定，其对ACE活性的抑制率＞50％。说明得到了ACE抑制肽，并且具有活性。实施例21)将魔芋飞粉与水按照质量比例1：50进行混合溶解，边搅拌边滴加盐酸溶液，使混合液的pH值达到3.8，使魔芋蛋白进行沉淀，使用低速离心机在4000rpm下离心20min后，弃去上清液，得蛋白沉淀；2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为10％的魔芋蛋白溶液，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，温度35℃，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加盐酸溶液调pH至8.5，加入弹性蛋白酶，酶解200min，得到酶解液；其中，每克魔芋蛋白溶液中加入的弹性蛋白酶的量为3000U；3)将酶解液置于90℃恒温水浴锅中保持10min灭酶活，之后自然冷却至室温，将酶解液调至pH值为3.8，在10000rpm离心15min，收集上清液；4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肽。经ACE抑制活性的测定，其对ACE活性的抑制率＞45％。实施例31)将魔芋飞粉与水按照质量比例1：50进行混合溶解，边搅拌边滴加盐酸溶液，使混合液的pH值达到3.8，使魔芋蛋白进行沉淀，使用低速离心机在3500rpm下离心35min后，弃去上清液，得蛋白沉淀；2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为5％的魔芋蛋白溶液，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，温度40℃，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加盐酸溶液调pH至9，加入弹性蛋白酶，酶解240min，得到酶解液；其中，每克魔芋蛋白溶液中加入的弹性蛋白酶的量为4000U；3)将酶解液置于90℃恒温水浴锅中保持10min灭酶活，之后自然冷却至室温，将酶解液调至pH值为3.8，在9000rpm离心30min本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将魔芋飞粉加入到水中溶解后，调节pH值至等电点，离心得魔芋蛋白沉淀；向魔芋蛋白沉淀中加入水，得到魔芋蛋白溶液，调节魔芋蛋白溶液的pH值为7‑9、温度为25‑50℃，然后加入弹性蛋白酶进行酶解，得到酶解液；2)将酶解液灭酶后调节pH值为3.8后离心，收集上清液；将上清液经超滤装置后收集滤液，冷冻干燥，得到ACE抑制肽。

【技术特征摘要】
1.一种酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将魔芋飞粉加入到水中溶解后，调节pH值至等电点，离心得魔芋蛋白沉淀；向魔芋蛋白沉淀中加入水，得到魔芋蛋白溶液，调节魔芋蛋白溶液的pH值为7-9、温度为25-50℃，然后加入弹性蛋白酶进行酶解，得到酶解液；2)将酶解液灭酶后调节pH值为3.8后离心，收集上清液；将上清液经超滤装置后收集滤液，冷冻干燥，得到ACE抑制肽。2.根据权利要求1所述的一种酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤1)中魔芋飞粉加入到水中时，魔芋飞粉与水的质量比为1:50。3.根据权利要求1所述的一种酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤1)中离心的转速为3000-4000rpm，时间为20-40min。4.根据权利要求1所述的一种酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤1)中pH值是采用盐酸调节的。5.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛跟年，贺磊，周亚丽，曹晴，许牡丹，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61