治疗和诊断纤维化、肿瘤侵入、血管生成和转移的方法和组合物技术

本发明专利技术提供利用加工形式赖氨酰氧化酶或赖氨酰氧化酶-样蛋白的抑制剂，LOX的抑制剂和LOXL的抑制剂或LOX或LOXL的抑制剂与其它治疗剂的协同组合来预防和治疗异常细胞增殖、血管生成和纤维化相关各种疾病的新方法和相关组合物及试剂盒。还提供通过将上皮-间充质过渡(EMT)状态的细胞与候选药剂接触并检测细胞的EMT状态改变来选择防止或抑制肿瘤侵入、血管生成和转移的药剂的新方法。还提供利用特异性识别加工形式LOX或LOXL的分子或药剂来诊断或监测异常细胞增殖、血管生成和纤维化相关各种疾病的方法和相关组合物及试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
交叉引用本申请要求以下申请的优先权：2007年8月2日提交的美国临时申请号60/963,282，名为“MethodsforSelectingInhibitorsofTumorInvasion，Angiogenesis，andMetastasis(选择肿瘤侵入、血管生成和转移的抑制剂的方法)”(代理人案件号35120-704101)；2007年8月2日提交的美国临时申请号60/963,249，名为“TreatmentofDiseasesWithInhibitorsofActiveLysylOxidase(用活性赖氨酰氧化酶抑制剂治疗疾病)”(代理人案件号35120-706.101)；2007年8月2日提交的美国临时申请号60/963,214，名为“TreatmentofDiseasesThroughInhibitionofBothLysylOxidaseandLysylOxidase-LikeProteins(通过同时抑制赖氨酰氧化酶和赖氨酰氧化酶样蛋白来治疗疾病)”(代理人案件号35120-706.102)；2007年8月2日提交的美国临时申请号60/963,248，名为“DiagnosisorMonitoringofDiseasesbyAssessingActiveLysylOxidaseLevelsorActivity(通过评估活性赖氨酰氧化酶水平或活性来诊断或监测疾病)(代理人案件号35120-706.103)；和2007年8月2日提交的美国临时申请号60/963,246，名为“CombinationTherapyIncludingLysylOxidaseModulators(包含赖氨酰氧化酶调节剂的组合治疗)”(代理人案件号35120-707.101)，本申请还与以下申请有关：2008年8月1日提交，名为“LOXandLOXL2InhibitorsandUses(LOX和LOXL2抑制剂及其应用)”的共同待批美国专利申请(代理人案件号35120-715.201)，序列号__，和2008年8月1日提交，名为“LOXandLOXL2InhibitorsandUses(LOX和LOXL2抑制剂及其应用)”的PCT专利申请(代理人案件号35120-715.601)，序列号__，各份申请通过引用全文纳入本文。背景1.癌症癌症是美国和其它发达国家的严重公众健康问题。目前，在美国每4例死亡中即有一例死于癌症。癌症治疗包括用化疗药物治疗患者来杀伤肿瘤细胞。然而，肿瘤细胞的亚组常对药物治疗耐受并能存活，从而在原部位或远端转移部位再次繁衍，进而导致可检测的疾病复发和发病。据信，具有侵入性和转移能力增加以及药物耐受性改变等特性的许多癌肿瘤细胞经历包括或类似于EMT(上皮-间充质过渡)的形态转化。经历EMT的细胞丧失上皮细胞正常的黏着性并经历各种改变，包括E-钙粘蛋白表达和间充质标记物表达丧失，运动性增加、侵入性增加和对细胞死亡的耐受性增加。目前癌症的主导疗法是外科手术、放疗和化疗。化疗方法，例如抗-肿瘤抗生素，烷化剂、亚硝基脲化合物、长春花-生物碱、类固醇激素和抗-代谢药物构成了肿瘤学家可用疗剂的主体。虽然在癌症治疗领域已取得了进展，但癌症依然是主要的健康问题。2.血管生成血管生成是在已有毛细血管外形成新血管，其是各种生理学和病理学过程中一系列至关重要的事件。正常的组织生长，例如胚胎发育、伤口愈合和月经周期的特征在于依赖新血管形成来供应氧和营养物以及除去废物。大量不同且无关的疾病也与新血管系统有关。某些病状中，血管生成较低，应提高以改善疾病情况。然而，更常见的是，血管生成过度是各种病状的重要特征，包括以细胞增殖不正常或不受控为特征或与之有关的病状。涉及过度血管生成的病状包括，例如癌症(实体瘤和血液学肿瘤)、心血管疾病(例如动脉粥样硬化和再狭窄)、慢性炎症(类风湿性关节炎、克罗恩病)、糖尿病(糖尿病性视网膜病)、银屑病、子宫内膜异位、新生血管性青光眼和肥胖症。这些病症可从血管生成的化疗抑制中获益。血管生成过程通常使正常情况下休眠的内皮增殖和迁移，细胞外周基质发生受控蛋白酶解并且通过产生毛细血管而合成新胞外基质组分。新的胞内和胞间接触的建立，内皮细胞形态分化成毛细血管样管状网络支持它们随后的成熟、支化、重塑和选择性退化，从而形成高度组织的功能性微血管网络。在正常情况下，血管内皮与其周围基质组分以及与促血管生成和血管抑制细胞因子和协调生理学血管生成的生长因子的自分泌、旁分泌和两侧分泌(amphicrine)相互作用在空间和时间上受到严格调控。血管生成对肿瘤组织生长至关重要。观察到肿瘤比正常组织具有更多血管已有100多年。几项实验性研究提示原发性肿瘤生长和转移需要新生血管形成。与上述良好协调的正常组织生长过程相反，活性肿瘤生长所需的病理性血管生成通常是持续性和持久的，血管生成表型的初始获得是各种实体瘤和血液学肿瘤类型产生的共同机制。不能募集和维持血管网络的肿瘤通常在原位保持休眠，就像无症状的病损。转移也依赖于血管生成：肿瘤细胞要成功转移，其通常必须能使用原发性肿瘤的血管系统、在循环中活下来、停在靶器官的微血管系统中、离开该血管系统、在靶器官中生长并在靶部位诱导血管生成。因此，血管生成看来是转移级联反应开始以及完成所必需的。因此，血管生成对于肿瘤生长和转移的重要性为化疗提供了最佳的潜在靶位。合适的抗-血管生成剂可通过延迟血管生成的开始(即，阻断“血管生成开关”)或通过阻断许多肿瘤类型特征性的持续和病灶新血管形成而直接或间接影响肿瘤-相关的血管生成。现正在多个临床试验中积极评估针对肿瘤-相关内皮以及涉及持续的病理性血管生成的多种分子和细胞过程及靶标的抗-血管生成治疗的安全性和效率。然而，迄今为止发现和/或鉴定到的安全和/或有效的抗血管生成剂有限。3.纤维化纤维化是作为伤口愈合过程的一部分会在受伤组织中发生是纤维组织异常累积。这种组织损伤可以是物理伤害、炎症、感染、接触毒素和其它原因所致。纤维化的例子包括皮肤瘢痕形成、瘢痕瘤、肝纤维化、肺纤维化(例如，矽肺、石棉沉着病)、肾纤维化(包括糖尿病性肾病)、硬皮病和肾小球硬化症。例如，肝脏(肝)纤维化可作为对慢性肝损伤的伤口愈合反应的一部分而发生。纤维化可作为血色病、威尔逊病、酒精中毒、血吸虫病、病毒性肝炎、胆管阻塞、接触毒素和代谢紊乱的并发症而发生。据信，这种疤痕组织的形成表示身体试图包裹受伤的组织。肝纤维化的特征在于数量上与正常肝脏中不同的胞外基质累积。不作检查，肝纤维化会发展成肝硬化(定义为存在包裹的结节)、肝衰竭和死亡。Li和Frieman(Gastroenterol.Hepatol.14:618-633，1999)总结道，肝纤维化的实际和提出的治疗方案包括去除潜在的诱因(例如，毒素或感染因子)；抑制炎症(使用，例如皮质激素、IL-1受体拮抗剂或其它药剂)；使用，例如γ干扰素或抗氧化剂下调星形细胞活化；促进基质降解；或促进星形细胞凋亡。虽然近年来有所进展，但许多这些方案仍处于实验阶段，现有的治疗目的在于抑制炎症而不是致力于潜在的生物化学过本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体内治疗或预防对象中肿瘤侵入或转移的方法，所述方法包括：给予该对象有效量的活性赖氨酰氧化酶或赖氨酰氧化酶‑样蛋白的抑制剂。

【技术特征摘要】
2007.08.02 US 60/963,214;2007.08.02 US 60/963,246;1.一种体内治疗或预防对象中肿瘤侵入或转移的方法，所述方法包括：
给予该对象有效量的活性赖氨酰氧化酶或赖氨酰氧化酶-样蛋白的抑制
剂。
2.一种体内治疗或预防对象中血管生成的方法，所述方法包括：
给予该对象有效量的活性赖氨酰氧化酶或赖氨酰氧化酶-样蛋白的抑制
剂。
3.一种体内治疗或预防对象中纤维化的方法，所述方法包括：
给予该对象有效量的活性赖氨酰氧化酶或赖氨酰氧化酶-样蛋白的抑制
剂。
4.一种体内降低对象的肿瘤生长的方法，所述方法包括：
给予该对象有效量的活性赖氨酰氧化酶或赖氨酰氧化酶-样蛋白的抑制
剂，从而将所述肿瘤生长降低至少25％、50％、75％、90％或95％。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肿瘤是转移性肿瘤。
6.一种增加或提高具有转移性肿瘤的对象存活机会的方法，所述方法包
括：
给予有此需要的对象有效量的活性赖氨酰氧化酶或赖氨酰氧化酶-样蛋白
的抑制剂，
从而将所治疗对象的存活机会增加或提高一段时期。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述对象的存活增加至少10
天、1个月、3个月、6个月、1年、1.5年、2年、3年、4年、5年、8年或
10年。
8.如权利要求1、2、3、4或6所述的方法，其特征在于，所述LOX或
LOXL抑制剂是针对LOX或LOXL的抗体、小分子抑制剂、针对LOX或
LOXL的siRNA、shRNA或反义多核苷酸。
9.如权利要求1、2、3、4或6所述的方法，其特征在于，所述LOX或
LOXL抑制剂是特异性结合LOX或LOXL中某区域的抗体，所述区域具有
选自SEQIDNO:1-18的氨基酸序列。
10.如权利要求1、2、3、4或6所述的方法，其特征在于，所述LOX或
LOXL抑制剂是活性LOX、LOXL2或LOXL4的抑制剂。
11.如权利要求1、2、3、4或6所述的方法，其特征在于，所述LOX或
LOXL抑制剂抑制活性LOX和活性LOXL2。
12.如权利要求1、2、3、4或6所述的方法，其特征在于，所述活性LOX
或LOXL是前蛋白原经蛋白酶解加工后的LOX或LOXL的成熟形式。
13.一种体内治疗或预防对象中肿瘤侵入或转移的方法，所述方法包括：
给予该对象有效量的赖氨酰氧化酶的抑制剂和赖氨酰氧化酶-样蛋白的抑
制剂。
14.一种体内降低对象的肿瘤生长的方法，所述方法包括：
给予该对象有效量的赖氨酰氧化酶的抑制剂和赖氨酰氧化酶-样蛋白的抑
制剂，从而将所述肿瘤生长降低至少25％、50％、75％、90％或95％。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述肿瘤是转移性肿瘤。
16.一种增加或提高具有转移性肿瘤的对象存活机会的方法，所述方法包
括：
给予有此需要的对象有效量的赖氨酰氧化酶的抑制剂和赖氨酰氧化酶-样
蛋白的抑制剂，
从而将所治疗对象的存活机会增加或提高一段时期。
17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述对象的存活增加至少
10天、1个月、3个月、6个月、1年、1.5年、2年、3年、4年、5年、8年
或10年。
18.如权利要求13、14或16所述的方法，其特征在于，所述LOX或LOXL
抑制剂是针对LOX或LOXL的抗体、小分子抑制剂、针对LOX或LOXL的
siRNA、shRNA或反义多核苷酸。
19.如权利要求13、14或16所述的方法，其特征在于，所述LOX抑制
剂和所述LOXL抑制剂不同。
20.如权利要求13、14或16所述的方法，其特征在于，所述LOX抑制
剂和所述LOXL抑制剂不同，二者分别特异性结合LOX和LOXL。
21.如权利要求13、14或16所述的方法，其特征在于，所述LOX抑制

\t剂或所述LOXL抑制剂是特异性结合LOX或LOXL某区域的抗体，所述区域
具有选自SEQIDNO:1-18的氨基酸序列。
22.如权利要求13、14或16所述的方法，其特征在于，所述LOX抑制
剂和所述LOXL抑制剂是单一抗体，其中所述抗体对所述LOX和所述LOXL
具有结合亲和力。
23.如权利要求13、14或16所述的方法，其特征在于，所述LOXL抑制
剂是LOXL1、LOXL2或LOXL4的抑制剂。
24.如权利要求13、14或16所述的方法，其特征在于，所述LOXL抑制
剂是LOXL2或LOXL4的抑制剂。
25.如权利要求13、14或16所述的方法，其特征在于，所述LOX或LOXL
抑制剂是活性LOX、LOXL2或LOXL4的抑制剂。
26.如权利要求13、14或16所述的方法，其特征在于，所述LOX或LOXL
抑制剂抑制活性LOX和活性LOXL2。
27.一种组合物，其包含：
赖氨酰氧化酶的抑制剂，
赖氨酰氧化酶-样蛋白的抑制剂，和
药学上可接受的运载体。
28.一种治疗患有异常细胞增殖、异常血管生成、异常细胞侵入或迁移入
局部组织和/或远端部位相关疾病或纤维变性疾病的宿主的方法，所述方法包
括：
组合给予所述宿主治疗有效量的赖氨酰氧化酶或赖氨酰氧化酶-样蛋白中
至少之一的抑制剂和并非LOX或LOXL抑制剂的第二治疗剂。
29.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述LOX或LOXL抑制剂
是针对LOX或LOXL的抗体、小分子抑制剂、针对LOX或LOXL的siRNA、
shRNA或反义多核苷酸。
30.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述LOX或LOXL抑制剂
是特异性结合LOX或LOXL某区域的抗体，所述区域具有选自SEQIDNO:
1-18的氨基酸序列。
31.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述LOX或LOXL抑制剂

\t是活性LOX、LOXL2或LOXL4的抑制剂。
32.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述LOX或LOXL抑制剂
抑制活性LOX和LOXL2。
33.如权利要求30所述的方法，其特征在于，所述活性LOX或LOXL是
前蛋白原经蛋白酶解加工后的LOX或LOXL的成熟形式。
34.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述第二治疗剂是化疗剂。
35.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述第二治疗剂是治疗性
生物剂。
36.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述第二治疗剂是射线。
37.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述LOX或LOXL抑制剂
和所述第二治疗剂通过抑制LOX或LOXL协同治疗疾病，所述抑制作用使得
宿主中的患病细胞对所述治疗剂的抗增殖或促凋亡作用更敏感，并且降低患病
细胞的活力。
38.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述异常细胞增殖相关疾
病是癌症、肿瘤或再狭窄。
39.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述纤维变性疾病选自：
皮肤瘢痕形成、瘢痕瘤、肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、糖尿病性肾病、硬
皮病和肾小球硬化症。
40.一种组合物，其包含：
赖氨酰氧化酶或赖氨酰氧化酶-样蛋白中至少之一的抑制剂，
并非所述赖氨酰氧化酶或赖氨酰氧化酶-样蛋白中至少之一的第二治疗
剂，和
药学上可接受的运载体。
41.一种选择肿瘤侵入、血管生成或转移的抑制剂的方法，所述方法包括：
将处于上皮-间充质过渡(EMT)状态的细胞与赖氨酰氧化酶或赖氨酰氧化
酶-样蛋白的抑制剂接触；和
检测所述细胞的EMT状态的改变，
其中，EMT状态降低或从EMT向间充质-上皮过渡(MET)状态改变表明该
LOX或LOXL的抑制剂是肿瘤侵入、血管生成或转移的抑制剂。
42.如权利要求41所述的方法，其特征在于，所述细胞的EMT状态具有
选自以下的特征：阳性波形蛋白、阳性纤连蛋白染色，E-钙粘蛋白染色水平
低或不可检测、F-肌动蛋白的鬼笔毒环肽染色显示延长及重塑的肌动蛋白
细胞骨架。
43.如权利要求41所述的方法，其特征在于，所述细胞的MET状态具有
选自以下的特征：波形蛋白的水平低或检测不到、纤连蛋白染色的水平低或
不可检测，E-钙粘蛋白染色阳性或高水平、F-肌动蛋白的鬼笔毒环肽染色
显示生理上正常的肌动蛋白细胞骨架。
44.如权利要求41所述的方法，其特征在于，通过测量或检测与接触LOX
或LOXL抑制剂之前的细胞相比，波形蛋白或纤连蛋白染色降低和/或E-钙
粘蛋白染色增加检测EMT状态的降低或从EMT向MET状态的过渡。
45.如权利要求41所述的方法，其特征在于，所述检测步骤包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：V史密斯，S奥格，P范瓦拉西拉，VE巴里，D马歇尔，AK霍尔泽，H罗德里格斯，M奥亚苏，SA麦克考雷，CA加西亚，DH柏曼，
申请(专利权)人：吉联亚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US