轮枝孢菌素A及与TRAIL组合在制备药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供轮枝孢菌素A单独或与TRAIL组合在制备抗肿瘤转移药物中的应用。本发明专利技术研究证实轮枝孢菌素A能够有效增加包括人肝癌细胞，乳腺癌细胞以及结肠癌细胞在内的肿瘤细胞对TRAIL的敏感性。目前临床上缺乏真正的抗肿瘤转移药物，因此verticillin A具有很好的应用前景。本发明专利技术verticillin A能够在较低剂量下有效增加肿瘤细胞对TRAIL的敏感性，并以协同作用的方式抑制肿瘤细胞转移。因此verticillin A及与TRAIL组合具有更好抗肿瘤细胞转移的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属制药领域，涉及轮枝孢菌素A与TRAIL组合在制备抗肿瘤转移药物中的应用。
技术介绍
癌症是严重危害人类健康的疾病之一，肿瘤转移则是癌症患者死亡的最主要原因，某种程度上讲，控制肿瘤转移即能控制癌症死亡，目前尽管国内外抗肿瘤转移药物研究投入了大量的人力、财力、时间，但是还没有一个真正的抗肿瘤转移药物上市。TRAIL(TNF-relatedapoptosis-inducingligand)是肿瘤坏死因子超家族的一个成员，由于能够特异性地诱导肿瘤细胞凋亡，自被发现以来研究人员就将其作为一个选择性抗肿瘤药物进行着广泛的研究。近期，以TRAIL为主体的肿瘤治疗正在进行I期和II期临床试验(www.clinicaltrails.gov)。虽然TRAIL在临床前试验中表现了良好的选择特异性和较低的细胞毒性，TRAIL在肿瘤临床治疗中的疗效非常有限。究其原因，就是肿瘤细胞特别是转移性肿瘤细胞对TRAIL产生了耐药性。因此，寻找新型有效的TRAIL增敏剂与TRAIL协同作用以治疗肿瘤尤其是治疗肿瘤转移具有广泛的应用前景。已有报道verticillinA具有抗肿瘤效果，但是verticillinA抗肿瘤转移的效果未曾报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供轮枝孢菌素A(verticillinA)在制备抗肿瘤转移药物中的应用。所述的verticillinA是从高等真菌黄赭鹅膏菌(含菌寄生菌歪孢菌)子实体中分离所得，分子式为C30H28N6O6S4，分子量(ESI-MS)：m/z696.3，所述药物由verticillinA与制剂允许的药物赋形剂或载体组成。本专利技术所述肿瘤主要包括肝癌、结肠癌和乳腺癌。本专利技术的另一个目的是提供轮枝孢菌素A(verticillinA)与TRAIL组合(重量比1:10)在制备抗肿瘤转移药物中的应用。本专利技术提供的药物，其制剂形式液体制剂、固体制剂或胶囊剂，主要包括颗粒剂、片剂、冲剂、软胶丸、软胶囊、滴丸剂或注射剂。本专利技术提供的药物，制剂的给药形式主要包括口服给药或注射给药。本专利技术提供的verticillinA对多种人的以及小鼠的肝癌细胞、结肠癌和乳腺癌细胞都有较强的TRAIL增敏效果。表明verticillinA是一广谱的有效的TRAIL增敏剂。目前临床上缺乏真正的抗肿瘤转移药物，因此verticillinA具有很好的应用前景。本专利技术verticillinA能够在较低剂量下有效增加肿瘤细胞对TRAIL的敏感性，并以协同作用的方式抑制肿瘤细胞转移。因此verticillinA及与TRAIL组合具有更好抗肿瘤细胞转移的应用前景。附图说明图1是轮枝孢菌素A的液相色谱分析。仪器：Agilent1100系列高效液相色谱仪；柱：HypersilBDS-C18,，5μm，4.6×250mm；柱温：35℃；流动相：60％乙腈-40％水；流速：0.8mL/min；检测波长：210nm。图2是4T-1细胞划痕实验显微照片图。图3是4T-1细胞划痕实验柱状图。图4是CT26细胞划痕实验柱状图。图5是RKO细胞划痕实验柱状图。图6是RKO细胞Tranawell实验，上图是显微照片图(左：对照，右：加药)，下图是柱状图。图7是RT-PCR筛查基因的结果。图8是VerticillinA下调c-Met蛋白表达。图9是VerticillinA抑制HGF(肝细胞生长因子)激活的c-Met蛋白表达及其磷酸化。图10是VerticillinA抑制HGF诱导的RKO细胞转移Tranawell实验。图11是VerticillinA抑制HGF诱导的DLD1细胞转移Tranawell实验。图12是VerticillinA与TRAIL组合抑制小鼠体内结肠癌细胞肺部转移的照片。图13是VerticillinA与TRAIL组合抑制小鼠体内结肠癌细胞肺部转移肿瘤颗粒数的柱状图。具体实施方式以下将结合具体实施例与附图详细说明本专利技术，这些实例仅用于说明目的，而不用于限制本专利技术范围。实施例1：分离纯化抗肿瘤细胞毒化合物VerticillinA1.提取和纯化：黄赭鹅膏菌真菌(含菌寄生菌歪孢菌)湿重1500g，真空冻干粉碎后先用石油醚然后用乙酸乙酯室温浸提,取乙酸乙酯浸提物1.2g溶剂溶解后过反相色谱柱,流动相取石油醚:氯仿:乙腈＝6:1:3,部分收集器收集分离片段进行体外MTT法检测各片段对肝癌细胞HepG2的毒性,检测到毒性最大的组分收集后用C8反相半制备柱(HypersilODS20*250mm)纯化,流动相为10％-100％的乙腈或甲醇梯度洗脱,收集细胞筛选有活性的洗脱峰,挥发溶剂后得白色晶体10.5mg,纯度99.0％，VerticillinA的高效液相色谱图见图1。2.结构鉴定：核磁共振仪(INOVA-400)，质谱仪(BrukerEsquire3000plus)。3.实验结果：VerticillinA，分子式为C30H28N6O6S4，ESI-MS：m/z696.3，根据这些数据与文献(MinatoH,etal.JChemSocPerkin197317:1819-25)比较所得VerticillinA的化学结构如下：实施例2VerticillinA体外抑制肿瘤细胞迁移；实验材料和方法：肿瘤细胞购自美国AmericanTypeCultureCollection并培养在DMEM培养基(Invitrogene)，添加5％小牛血清(Invitrogene)，2mM谷氨酰胺，37℃，10％CO2培养箱。实验选择5种不同肿瘤细胞分别是4T-1(鼠乳腺癌)、Bcap37(人乳腺癌)、CT26(鼠结肠癌)、RKO(人结肠癌-转移性)、HCT116(人原发结肠癌)，分别添加或不添加VerticillinA24或48小时利用细胞划痕实验，显微观察分析肿瘤细胞的迁移情况(图2)，结果表明：0.1μMVerticillinA48小时处理可以显著抑制4T-1、CT26及RKO的细胞迁移达50％左右(图3-5)，而对Bcap37或HCT116影响不大(图略)。VerticillinA溶解在DMSO中配成1mg/ml母液，置于-20℃冰箱，实验时用培养液稀释成所需浓度供用。实施例3VerticillinA在体内抑制肿瘤细胞迁移；实验材料和方法：细胞来源同实施例2。我们选取了迁移能力最强的人结肠癌RKO细胞进行transwell实验，模拟verticillinA抑制细胞在体内的迁移，数据显示(图6)。VerticillinA能够有效抑制RKO细胞的穿本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种轮枝孢菌素A在制备抗肿瘤转移药物中的应用，所述轮枝孢菌素A的分子式为C50H28N6O6S4，分子量696.3，其特征在于，所述药物由轮枝孢菌素A与制剂允许的药物赋形剂或载体制成，所述肿瘤为肝癌、结肠癌和乳腺癌。

【技术特征摘要】
1.一种轮枝孢菌素A在制备抗肿瘤转移药物中的应用，所述轮枝孢菌素A的分子式为
C50H28N6O6S4，分子量696.3，其特征在于，所述药物由轮枝孢菌素A与制剂允许的药物赋形
剂或载体制成，所述肿瘤为肝癌、结肠癌和乳腺癌。
2.根据权利要求1所述的一种轮枝孢菌素A在制备抗肿瘤转移药物中的应用，其特征在
于，所述药物由轮枝孢菌素A与TRAI...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘非燕，曾雪丽，王哲，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33