一种利用印度梨形孢和中生菌素联合防治烟草青枯病的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用印度梨形孢和中生菌素联合防治烟草青枯病的方法，包括以下步骤：(1)将烟草种子播种于混有印度梨形孢(Piriformospora india)菌丝的育苗基质中，成苗后移栽至大田；(2)移栽前，用中生菌素药液浇灌烟草苗移栽用洞穴；移栽后10～15天，再用中生菌素药液对每株烟草植株进行灌根处理。本发明专利技术使用的印度梨形孢不受中生菌素的抑制，可与杀菌剂中生菌素联合使用，应用于烟草青枯病的防治；与单独使用印度梨形孢或中生菌素的防治效果相比，本发明专利技术印度梨形孢和中生菌素联合使用能够起到增效作用，显著提高对烟草青枯病的防控。

Method for preventing and controlling tobacco bacterial wilt by using India pear shaped spore and intermediate fungus

The invention discloses a method for India pear shaped spore and Zhongshengmycin joint prevention and control of tobacco bacterial wilt in use, which comprises the following steps: (1) the tobacco seeds were sown in mixed with India pear shaped spore (Piriformospora India) seedling substrate mycelium, seedling after transplanting to the field; (2) before transplanting Zhongshengmycin, transplanting tobacco seedlings watered with liquid cave; 10 ~ 15 days after transplanting, and Zhongshengmycin solution on each plant tobacco root irrigation treatment. The invention uses the India pear shaped spore not inhibited by Zhongshengmycin, and fungicides Zhongshengmycin combined, applied to prevent tobacco bacterial wilt; compared with the control effect of single India pear shaped spore or Zhongshengmycin, the invention of India pear shaped spore and Zhongshengmycin joint can play a synergistic effect, significantly improve the prevention and control of tobacco bacterial wilt.

【技术实现步骤摘要】


本专利技术涉及植物病害防治领域，具体涉及一种利用印度梨形孢和中生菌素联合防治烟草青枯病的方法。

技术介绍

烟草青枯病是烟草上一种重要土传细菌病害，目前防治的方法大多数集中在化学防治方面，然而大量的使用农药，不仅容易造成农药残留，污染水资源，污染环境，而且长时间的使用还容易使细菌产生抗药性，为病害的持续防治带来困难。
近年来，植物病害的生物防治越来越受到人们的重视，生物防治是利用有益微生物对病原菌产生各种不利作用(抗菌，溶菌、竞争、重寄生)从而减少病原物的数量来消弱其致病性；同时，用于生物防治的有益微生物还能诱导或增强植物抗病性，通过改变植物与病原菌的相互关系，延缓或者抑制病害的发生。生物防治可以减少农药对环境的污染，具有良好的生态效益和社会效益。
在烟草青枯病生物防治方面，枯草芽孢杆菌Y1336、荧光假单胞杆菌、多粘类假单胞杆菌都能够很好的抑制青枯病原菌，但是仅用这些有益细菌，不能达到生产上所要求的防治效果。这些细菌不能与防治青枯病菌的农药共同使用，因为对烟草青枯病菌有控制作用的农药，往往也对具有生防作用的有益细菌具有抑制作用。
公告号为CN103270915B的专利文献公开了一种防治烟草青枯病的方法，包括：(1)在烟苗移栽时，将立枯净和水按照重量比1∶800～1200的比例稀释配制成立枯净药液对烟苗进行灌根，每株烟苗灌根40～60ml药液；(2)在烟株发病初期，将百抗和水按照重量比1∶500～1000的比例配制成百抗药液淋施发病烟株的根茎部，每株烟株淋施75～150ml药液。其中立枯净的有效成分为：4％稻瘟净、32％福美双、14％甲霜灵；百抗的有效成分为：枯草芽孢杆菌B908。该专利技术采用移栽时用立枯净灌根(化学防治)、发病初期用百抗淋施根茎部(生物防治)联合处理的方式，有效控制烟草青枯病的发生和蔓延。但是该方法依然无法克服上述的生防菌与农药不能共同使用的缺陷。
印度梨形孢菌是一种重要的有益内生真菌，能够定殖在多种植物根的表皮和皮层细胞内和细胞间隙，提高植物对生物和非生物逆境的抗性。印度梨形孢帮助植物抗逆的机制涉及提高植物抗氧化能力，诱导抗逆基因表达，诱导植物产生系统抗病性。印度梨形孢不同于丛枝菌根真菌，它可在培养基上生长，这就为该菌在农业和园艺业的大面积应用提供可能。
中国专利技术专利申请(申请号为201410092267、201410092269、201410093085)公开了通过用过滤后的印度梨形孢菌丝悬浮液浇灌4叶期的烟苗，待印度梨形孢定殖后移栽烟苗，从而降低烟叶中铬、镉、铅含量的方法。上述专利申请为印度梨形孢应用到烟草培育中提供了技术依据。

技术实现思路

本专利技术提供了一种利用印度梨形孢和中生菌素联合防治烟草青枯病的方法，结合印度梨形孢生物防治和杀菌剂中生菌素的化学防治，克服了现有技术中生防菌与农药不能共同使用的缺陷。
一种利用印度梨形孢和中生菌素联合防治烟草青枯病的方法，包括以下步骤：
(1)将烟草种子播种于混有印度梨形孢(Piriformosporaindia)菌丝的育苗基质中，成苗后移栽至大田；
(2)移栽前，用中生菌素药液浇灌烟草苗移栽用洞穴；移栽后10～15天，再用中生菌素药液对每株烟草植株进行灌根处理。
本专利技术将印度梨形孢定殖在烟草根部，建立烟草青枯病-印度梨形孢-中生菌素的烟草防治体系，研究证明该体系能够有效提高烟草对青枯病的防控。
本专利技术所述印度梨形孢(P.indica)菌株，是公众可以从生物材料样品国际保藏单位购买到的生物材料，在美国Americantypeculturecollection保藏库，保藏编号是204458TM。
印度梨形孢和中生菌素的联合处理，具有增效作用，显著降低了烟草青枯病的田间株发病率与病情指数，防治效果达到76.49％，病情指数下降了42.3，其防治效果显著优于单独使用印度梨形孢或中生菌素。
本专利技术将烟草种子接种于混有印度梨形孢(Piriformosporaindia)菌丝的育苗基质中，进行育苗。育苗条件为：每天光照培养16小时，光照强度为80μMm-2sec-1，培养温度为25℃；暗培养8小时，培养温度为22℃。一般在种子发芽的2～3周之后，印度梨形孢即可定殖在烟草幼苗的根部。
本专利技术烟草育苗基质的配方和配制方法是公知技术，可以自行配制基质，也可以购买厂家生产的基质。作为优选，所述育苗基质包括营养土、蛭石和珍珠岩，三者按照4:2:1的体积比混合。
育苗基质中印度梨形孢菌丝量太少不利于诱导提高烟草的抗病性，菌丝量太多容易导致印度梨形孢与烟草争夺养分。作为优选，所述育苗基质中印度梨形孢菌丝所占重量百分比为0.5～1％。更为优选的，所述育苗基质中印度梨形孢菌丝所占重量百分比为1％。
作为优选，步骤(1)中，烟草种子经消毒后再进行播种。种子消毒后再播种有利于提高烟草的成活率。
作为优选，步骤(1)中，烟草苗长至8～9片真叶后移栽至大田。
本专利技术选择移栽前施药和移栽后10-15天再次施药，主要原因有两点：(1)移栽前用中生菌素药液，对土壤消毒，降低病原菌基数，目的在于病害预防；(2)中生菌素的药效期为10-15天，因此在烟草苗移栽10-15天后，再施药，进一步杀死根际周围病原菌，有益于巩固病害的预防，显著减轻青枯病的发生。
在施药过程中，中生菌素药液施用浓度过高易造成残留，产生药害，增加成本；施药浓度过低，降低杀菌效果。当中生菌素药液有效浓度在20～30ppm时，既能有效杀菌又不造成药害。
作为优选，所述中生菌素药液为3％中生菌素用水按照1:1000～1:1500比例进行稀释得到，每个洞穴或每株烟草植株的施药量为200～500mL。
更为优选，所述中生菌素药液为3％中生菌素用水按照1:1000比例进行稀释得到，每个洞穴或每株烟草植株的施药量为300mL。
本专利技术具备的有益效果：(1)本专利技术使用的印度梨形孢不受中生菌素的抑制，可与杀菌剂中生菌素联合使用，应用于烟草青枯病的防治；(2)与单独使用印度梨形孢或中生菌素的防治效果相比，本专利技术印度梨形孢和中生菌素联合使用能够起到增效作用，显著提高对烟草青枯病的防控。
附图说明
图1为中生菌素对茄科劳尔氏菌RS-TB3的抑菌圈试验初筛结果。
图2为不同浓度的中生菌素对茄科劳尔氏菌株RS-TB3抑菌效果(NA，48h)。
图3为盆栽烟苗接种茄科劳尔氏菌RS-TB3第8d天发病程度的差异，
其中，A代表中生菌素：根部未定殖印度梨形孢烟草苗浇灌50mL农药中生菌素；
B代表PI+中生菌素：根部定殖印度梨形孢烟草苗浇灌50mL农药中生菌素；
C代表CK：根部未定殖印度梨形孢烟草苗浇灌50mL无菌水；
D代表PI：根部定殖印度梨形孢烟草苗浇灌50mL无菌水，箭头所示烟草青枯病典型症状。
图4为接种茄科劳尔氏菌RS-TB3后不同时期烟草叶片中PPO酶活性的变化。
图5为接种茄科劳尔氏菌RS-TB3后不同时期烟草叶片中POD酶活性的变化。
图6为接种茄科劳尔氏菌RS-TB3后不同时期烟草叶片中PAL酶活性的变化。
图7为接种茄科劳尔氏菌RS-TB3后12h后各处理烟叶叶片总RNA电泳图。
图8为接种茄科劳尔氏菌RS-TB3后不同时期烟草叶片中P本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用印度梨形孢和中生菌素联合防治烟草青枯病的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将烟草种子播种于混有印度梨形孢(Piriformospora india)菌丝的育苗基质中，成苗后移栽至大田；(2)移栽前，用中生菌素药液浇灌烟草苗移栽用洞穴；移栽后10～15天，再用中生菌素药液对每株烟草植株进行灌根处理。

【技术特征摘要】
1.一种利用印度梨形孢和中生菌素联合防治烟草青枯病的方法，其特征在于，包括以下
步骤：
(1)将烟草种子播种于混有印度梨形孢(Piriformosporaindia)菌丝的育苗基质中，成苗后
移栽至大田；
(2)移栽前，用中生菌素药液浇灌烟草苗移栽用洞穴；移栽后10～15天，再用中生菌素
药液对每株烟草植株进行灌根处理。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述育苗基质包括营养土、蛭石和珍珠岩，
三者按照4:2:1的体积比混合。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述育苗基质中印度梨形孢菌丝所占重量百
分比为0.5～1％。
4.如权利要求3所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：王洪凯，曹以衬，楼兵干，苏珍珠，林福呈，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33