本发明专利技术属医药技术领域，具体涉及一种贝母丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。所述的提取物通过如下方法获得：先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:4，体积比）洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:12，体积比）洗脱，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:12，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属医药
，具体涉及一种贝母丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。
技术介绍
贝母，因其形状得名，《本草经集注》说：“形似聚贝子”，故名贝母，能止咳化痰、清热散结之功。别名：勤母、苦菜、苦花、空草、药实。产于四川、云南、陕西秦巴山区，甘肃等地。新疆贝母，是一种与川贝.浙贝齐名的贵重中药材。其中包括：伊犁贝母。费尔干贝母.滩贝母等几个品种，统称为新疆贝母。除滩贝喜生于沙滩涯地外，其它三种贝母多生于草原山地及灌木丛下。伊贝主产于伊宁。霍城；费尔干贝母新疆许多地方都有分布；轮叶贝母主产于塔城地区；滩贝母生产于霍城.察布查尔。早在清代，新疆贝母便已开发利用。当时以北疆地区的昌吉.齐台县为集散市场，通过古丝绸之路的北线，用骆驼运。马驮，远销天津等口岸，通称“古贝”。由于数量极少，价格昂贵。贝母为多年生草本植物,其鳞茎供药用，有止咳化痰、清热散结之功。苦、甘，微寒。归肺、心经。清热润肺，化痰止咳。用于肺热咳嗽，干咳少痰，阴虚劳嗽，咯痰带血。在高通量筛选的过程中，本专利技术意外地发现大叶贝母具有很好的抑制丁酰胆碱酯酶的活性，该活性提取物及其组合物有望应用于治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是提供一种贝母提取物。本专利技术还提供了以贝母提取物为主要活性成分的组合物。本专利技术同时提供了贝母提取物及其组合物的制备和应用。本专利技术是通过如下技术方案实现的：维吾尔药贝母经甲醇和水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2）柱分离，上样后的硅胶柱，用氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱（氯仿-甲醇，比例见表1），各氯仿-甲醇比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其丁酰胆碱酯酶抑制活性，意外地发现先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:4，体积比）洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:12，体积比）洗脱得到的氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:12，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有丁酰胆碱酯酶抑制活性的作用。特别地，优选为先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:4，体积比）洗脱25倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:12，体积比）洗脱20倍柱体积，洗脱液干燥后所得提取物即为本专利技术丁酰胆碱酯酶抑制活性的提取物。丁酰胆碱酯酶抑制活性的提取物，可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该贝母丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层色谱（TLC）分析结果见图1， TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：氯仿：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。具体，发现过程如下：1、贝母经甲醇超声提取物的制备取维吾尔药贝母20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，再经100 mL水超声提取15 min提取液浓缩后，得提取物SN0169，样品上柱：1.9963 g，拌样硅胶2.0 g，空白硅胶10g，氯仿-甲醇系统。2、氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果取维吾尔药贝母20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0169，1.9963 g上柱，甲醇溶解，共用甲醇15 mL。上硅胶柱色谱，拌样硅胶2.0 g，空白硅胶10 g，玻璃柱内径2.0cm，氯仿-甲醇系统梯度洗脱（条件见表1），柱体积25 mL，每个梯度洗脱200mL，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，氯仿：甲醇梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图2，图3，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：氯仿：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1），氯仿：乙酸乙酯：甲醇（1:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。表13、抑制丁酰胆碱酯酶活性筛选方法和结果1) 实验条件a、材料：DMSO(二甲基亚砜) (科密欧公司)；KH2PO4、K2HPO4·3H2O(广东汕头市西陇化工厂)；BuChE酶(美国Sigma公司)；PNPG(美国Sigma公司)b、实验仪器：多功能酶标仪Bio-Rad Model 680型(Bio-Rad Laboratories Inc.)2) 实验方法和过程样品处理：将1 mg待测样品溶于20 μL二甲基亚砜(DMSO)作为母液，取1 μL母液加入249 μL蒸馏水配成200 μg·mL-1的溶液。丁酰胆碱酯酶抑制活性测定方法：在96孔板上测定样品的BuchE抑制活性。具体操作如下：在96孔板中依次加入25 μL PBS (100 mM, pH 8.0)，25 μL BuChE (≥0.04 U/mL, pH 8.0 PBS溶解稀释)，25 μL样品溶液(200 μg·mL-1)。加25 μL BuSCH(1.6 mM, pH 8.0 PBS溶解稀释)及25 μL DTNB(4.0 mM, pH 8.0 PBS溶解稀释)，37℃孵育60 min后，用酶标仪在412 nm下测定其吸光度值。样品抑制百分率按以下公式计算:酶活性抑制率% = [A空白- (A样品- A背景)] / A空白× 100式中A空白：不加样品反应后的吸收值；A样品：加入样品反应后的吸收值；A背景：只加样品的吸收值。3) 实验结果表2结果发现：本专利技术最优方案为：维吾尔药贝母经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:4，体积比）洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:12，体积比）洗脱，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:12，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。该丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1。4、丁酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物的提取方法研究1）提取溶剂的种类研究分别用甲醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机溶剂提取，并测试提取物的丁酰胆碱酯酶抑制活性，实验结果如下：表3研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。2）提取溶剂的用量研究分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/体积比）有机溶剂提取，并测试提取物的丁酰胆碱酯酶抑制活性，结果如下：表4活性提取物的提取所用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。3）干燥方法的研究分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的抑制丁酰胆碱酯酶活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对丁酰胆碱酯酶抑制活性提取本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种贝母提取物，其特征为贝母经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100:的4氯仿‑甲醇混合溶剂洗脱，继用体积比为100:12的氯仿‑甲醇混合溶剂洗脱，用体积比100:12为氯仿‑甲醇混合溶剂洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物；其中，提取溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。
【技术特征摘要】
1.一种贝母提取物，其特征为贝母经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100:的4氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，继用体积比为100:12的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，用体积比100:12为氯仿-甲醇混合溶剂洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物；其中，提取溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。
2.如权利要求1所述贝母提取物，其特征为，其中，提取溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。
3.如权利要求1所述贝母提取物，其特征为贝母经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:4，体积比）洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:12，体积比）洗脱，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:12，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物。
4.如权利要求1-3任何一项所述的一种维吾尔药贝母提取物，其特征为，用于洗脱的石油醚：乙酸乙酯、甲醇的洗脱体积为2-50倍柱体积。
5.权利要求1所述提取物的制备方法，其特征为：贝母经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:4，体...
【专利技术属性】
技术研发人员：王金辉，热娜·卡斯木，黄健，李国玉，姚大红，李敏，马庆东，张珂，陈雪珊，
申请(专利权)人：新疆医科大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。