本发明专利技术属医药技术领域，具体涉及一种宽筋藤乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。所述的提取物通过如下方法获得：先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:1，体积比）洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物，或先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:8，体积比）洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:12，体积比）洗脱，用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:12，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属医药
，具体涉及一种宽筋藤乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其 组合物的制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病（AD)等方面的医药用途。
技术介绍
宽筋藤为防已科植物中华青牛胆的干燥莖藤。 原植物中华青牛胆为落叶草质高大藤木，长达10余米或更长；茎、枝肥厚，嫩枝绿色，有条 纹，被柔毛，老枝草黄色，覆膜质的表皮，有显著凸出的皮孔。性凉，味苦。归肝、脾经。具有 祛风除湿，舒筋活络的功效。用于风湿骨痛，筋络拘挛，骨折，跌打损伤。 本专利技术通过大规模、系统地活性筛选，意外地发现维吾尔药宽筋藤提取物及其部 分化学组分，具有显著地乙酰胆碱酯酶抑制活性，该活性提取物及其组合物有望应用于治 疗阿尔茨海默病（AD)等方面的医药用途。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是提供一种宽筋藤提取物。 本专利技术还提供了以宽筋藤提取物为主要活性成分的组合物。 本专利技术同时提供了宽筋藤提取物及其组合物的制备和在制备乙酰胆碱酯酶抑制 活性药物中的应用。 本专利技术是通过如下技术方案实现的： 维吾尔药宽筋藤经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2)柱分离，上样后的硅胶 柱，用氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱(氯仿-甲醇，比例见表1 )，各氯仿-甲醇比例混合溶剂 洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其乙酰胆碱酯酶抑制活性，意外地发现先用 氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿_甲醇，1〇〇: 1，体积比)洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿-甲 醇，100:2，体积比）洗脱得到的氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿-甲醇，100:2，体积比）洗脱液经 回收有机溶剂，干燥，即为乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有乙 酰胆碱酯酶抑制活性的作用。特别地，优选为先用氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿-甲醇，100:1， 体积比）洗脱10倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿-甲醇，100:2,体积比）洗脱30 倍柱体积，洗脱液即为本专利技术乙酰胆碱酯酶抑制活性的提取物，其可以通过以上方法得到 富集，从而与其他杂质类成分分离开。该宽筋藤乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献 报道，其薄层谱色谱（TLC)分析表征如图1，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：氯仿： 乙酸乙酯：甲醇（3:1:1)显色方法：香草醛-硫酸显色。 维吾尔药宽筋藤经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2)柱分离，上样后的 硅胶柱，用氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱(氯仿-甲醇，比例见表1 )，各氯仿-甲醇比例混合 溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其乙酰胆碱酯酶抑制活性，意外地发现 先用氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿-甲醇，100:8,体积比）洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶剂(氯 仿-甲醇，100:12,体积比)洗脱得到的氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿-甲醇，100:12,体积比)洗 脱液经回收有机溶剂，干燥，即为乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位， 没有乙酰胆碱酯酶抑制活性的作用。特别地，优选为先用氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿-甲醇， 100:8,体积比）洗脱10倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿-甲醇，100:12,体积比） 洗脱30倍柱体积，洗脱液干燥即为本专利技术乙酰胆碱酯酶抑制活性的提取物。乙酰胆碱酯酶 抑制活性的提取物可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该宽筋藤 乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC)分析表征如图2,TLC 分析条件：GF254硅胶板，展开系统：氯仿：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1)显色方法：香草醛-硫酸 显色。 具体，发现过程如下： 1、宽筋藤经甲醇超声提取物的制备 取维吾尔药宽筋藤20g，经100mL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0104,样品1.4978g，留样0.0760g，上样量1.4218g，拌样硅胶1.7g，空白硅胶10g， 氯仿-甲醇系统洗脱。 2、氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果 取维吾尔药宽筋藤20g，经100mL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0104，1.4218g，上柱，甲醇溶解，共用甲醇15mL。上硅胶柱色谱，拌样硅胶1.7g，空白 硅胶10g，玻璃柱内径2.0cm，氯仿-甲醇系统梯度洗脱(条件见表1)，柱体积25mL，每个 梯度洗脱200mL，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，氯仿：甲醇梯度洗 脱提取物，TLC分析结果见图2,图3,TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：氯仿：乙酸乙 酯：甲醇（3:1:1)显色方法：香草醛-硫酸显色。 表 1 3、抑制乙酰胆碱酯酶活性筛选方法和结果 1) 实验条件 a、 材料：DMSO(二甲基亚砜）（科密欧公司）；KH2P04、K2HP04WH2CK广东汕头市西陇化 工厂）；AchE酶（美国Sigma公司）；PNPG(美国Sigma公司） b、 实验仪器：多功能酶标仪Bio-RadModel680 型（Bio-RadLaboratoriesInc.) 2) 实验方法和过程 样品处理：将Img待测样品溶于20 二甲基亚砜（DMSO)作为母液，取I母液 加入249 蒸馏水配成200 .mr1的溶液。 乙酰胆碱酯酶抑制活性测定方法： 在96孔酶标板上测定样品的AchE抑制活性。具体操作如下：在96孔酶标板中依次加 入 20yLPB(100mM，pH8. 0)，25yLAChE(0? 033U/mL，pH8. 0PB溶解稀释），25yL 样品溶液（40yg.mL_ 〇。冰浴 5min后，加 15yLATCI(0. 6mM)及 15yLDTNB(I. 5mM)。 37°C孵育60min后，用酶标仪在412nm下测定其吸光度值。根据下式计算抑制率： 酶活性抑制率％=/A空白X100 式中Aee :不加样品反应后的吸收值； :加入样品反应后的吸收值； Awft :只加样品的吸收值。 3)实验结果 表2 结果发现： 本专利技术的最优方案为：维吾尔药宽筋藤经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱，先用氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿-甲醇，100:1，体积比）洗脱，继用 氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿-甲醇，100:2,体积比）洗脱，用氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿-甲 醇，100:2,体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该乙酰胆碱酯酶抑制活性提 取物。该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1。 维吾尔药宽筋藤经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅 胶柱，先用氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿-甲醇，100:8,体积比）洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶 剂(氯仿-甲醇，100:12,体积比）洗脱，用氯仿-甲醇混合溶剂(氯仿-甲醇，100:12,体积 比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。该乙酰胆 碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图2。 4、乙酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物的提取方法研宄 1)提取溶剂的种类研宄 分别用甲醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机 溶剂提取，并测试提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性，实验结果如下： 表3研宄结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、石油本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种宽筋藤提取物，其特征为宽筋藤经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100:1的氯仿‑甲醇混合溶剂洗脱，继用体积比100:2氯仿‑甲醇混合溶剂洗脱，用氯仿‑甲醇混合溶剂（氯仿‑甲醇，100:2，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物；或先用氯仿‑甲醇混合溶剂（氯仿‑甲醇，100:8，体积比）洗脱，继用氯仿‑甲醇混合溶剂（氯仿‑甲醇，100:12，体积比）洗脱，用氯仿‑甲醇混合溶剂（氯仿‑甲醇，100:12，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王金辉，热娜·卡斯木，黄健，李国玉，逄小博，王新玲，马庆东，张珂，
申请(专利权)人：新疆医科大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65
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