福寿螺胆碱酯酶抑制剂、制备方法及其用途技术

本发明专利技术涉及一种福寿螺胆碱酯酶抑制剂、制备方法及其用途，属于杀螺剂的技术领域。本发明专利技术所述的福寿螺胆碱酯酶抑制剂，是以薇甘菊的叶、五爪金龙的茎，或薇甘菊与南美蟛蜞菊的叶为原料，以乙醇水溶液为溶剂利用超声波提取、并经过过滤、蒸发浓缩得到。当质量浓度为0.1mg/ml以上时，对福寿螺胆碱酯酶的抑制率接近阳性对照组的抑制率，证明其对福寿螺两种胆碱酯酶的活性具有较强的抑制作用，说明了这两种入侵植物具有开发为福寿螺植物源杀螺剂的潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于杀螺剂的
，更具体的说，本专利技术涉及一种福寿螺胆碱酯酶抑 制剂、制备方法及其用途。
技术介绍
福寿螺（Pomacea canaliculata)是近些年来备受国际关注的危害性外来入侵动 物，软体动物门腹足纲前鳃亚纲腹足目瓶螺科瓶螺属，原产南美洲亚马逊河流域。福寿螺对 环境适应性强、食性杂、个体大、生长迅速、繁殖力强，是危害生物多样性、农业生产和人类 健康的世界性恶性入侵水生动物，在2000年，世界自然保护联盟外来入侵物种专家委员会 将其列为世界100种恶性外来入侵物种之一。2003年3月，国家环保总局将福寿螺列入首 批入侵我国的16种"危害最大的外来物种"之一。目前，我国对螺害的控制以化学杀螺剂 防治为主，在一定程度为农业的发展发挥了巨大作用，但是随着农业的发展，杀螺剂的使用 越来越广泛，再加上不合理利用杀螺剂，造成了环境污染，给生物的生存带来了威胁。因此 寻找开发可持续的、环境友好的植物来源的杀螺剂，越来越受到研究者们的重视。 胆碱酯酶已成为杀虫剂开发研究的重要靶酶，胆碱酯酶主要存在于动物神经系统 中的一种水解酶，它的作用是水解胆碱能神经末梢释放的神经介质乙酰胆碱。如果胆碱酯 酶的作用被抑制，就会发生乙酰胆碱过剩而集聚现象，引起胆碱能神经过度兴奋、类似有机 磷中毒的症状。胆碱酯酶抑制剂的使用能够抑制福寿螺胆碱酯酶的活性，突触后神经纤维 长期处于兴奋状态，同时突触部位的正常神经冲动传导受阻塞，导致福寿螺中毒死亡，已成 为螺害防治的重要途径。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种福寿螺胆碱 酯酶抑制剂、制备方法及其用途。 为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用了以下技术方案： -种福寿螺胆碱酯酶抑制剂的制备方法，其特征在于：以薇甘菊的叶、五爪金龙的 茎，或薇甘菊与南美蟛蜞菊的叶为原料，以乙醇水溶液为溶剂利用超声波提取工艺得到。 其中，所述乙醇为75~95wt%的乙醇水溶液；原料与乙醇水溶液的质量体积比为 Ig ； 3ml ~Ig ； IOml〇 其中，超声波提取的时间为20~60min，提取温度为0~30°C。 其中，超声波提取后过滤得到提取液，然后蒸发浓缩形成浸膏。 本专利技术的第二方面，还涉及一种福寿螺胆碱酯酶抑制剂。 本专利技术所述的福寿螺胆碱酯酶抑制剂，其特征在于：以薇甘菊的叶或五爪金龙的 茎为原料，以乙醇水溶液为溶剂利用超声波提取、并经过过滤、蒸发浓缩得到。 其中，所述抑制剂为膏剂。 其中，所述抑制剂为水溶液。 本专利技术的第三方面，还涉及上述福寿螺胆碱酯酶抑制剂的用途，其特征在于：用于 福寿螺的杀灭。 其中，所述福寿螺胆碱酯酶抑制剂的浓度为0. 1~0. 5mg/ml，优选为0. 1~ 0· 2mg/ml 〇 本专利技术所述的福寿螺胆碱酯酶抑制剂具有以下有益效果： 当质量浓度为0. lmg/ml以上时，对福寿螺胆碱酯酶的抑制率接近阳性对照组的 抑制率，证明其对福寿螺两种胆碱酯酶的活性具有较强的抑制作用，说明了这两种入侵植 物具有开发为福寿螺植物源杀螺剂的潜力。【具体实施方式】 以下将结合具体实施例对本专利技术所述的福寿螺胆碱酯酶抑制剂、制备方法及其用 途做进一步的说明，以帮助本领域的技术人员对本专利技术的专利技术构思、技术方案有更完整、准 确和深入的理解。 实施例 1. 1动物材料 福寿螺成螺采自广东省潮州市湘桥区社光村田间水沟，采集后洗净敲去壳，取斧 足组织。 1. 2植物材料 薇甘菊、南美蟛蜞菊和五爪金龙均采集于韩由师范学院校内。经清洗后自然晾干， 分离出茎和叶，剪成段，分别放入干燥箱，60°C干燥至恒重后磨碎，置于干燥处保存备用。 1. 3入侵植物乙醇提取物的制备 取每种磨碎的植物样品20g，用95%乙醇100mL浸泡，超声波提取30min，过滤得到 提取液后，放进60°C干燥箱蒸发浓缩成浸膏。称取适量的浸膏，用超纯水配制成0. 1、0. 05、 0. 025、0. 0125mg/ml的提取物溶液，4°C冰箱中保存备用。 L 4酶液的制备 用手术刀将其斧足组织切碎，PBS清洗后放入离心管中，按质量体积比1/10 (g/ ml)加入裂解缓冲液（IOmmol · L 1HEPES, ρΗ7· 5, Immol · L 1EDTA, Immol · L 1EGTA, 500mmol · L 1NaCLO. 5 % Triton X-100,10 μ g/ml leupeptin, 20 μ mol · L 1Pepstatin, and 2.5m mol .Libenzamidine HC1)后，4 °C 勾衆，12000rpm 30s，间隔 30s，重复 2 次， 4°C 1600rpm离心10min，转移上清液至新的离心管中，12000rpm 4°C离心20min，取上清 液，-20 °C冰箱中保存备用。 1. 5胆碱酯酶活性的测定及抑制率的计算 采用改进的Ellman方法（Ellman et al.，1961)在96孔酶标板上测定样品的AChE 和BChE抑制活性。具体操作如下： 样品孔：在96孔酶标板中依次加入155 μ L PBS(0.2mol .L SpH= 7.5)，20 μ L待 测样品溶液，5 μ L酶液。4°C孵育20min后，加10 μ L DTNB (12. 5mmol .L 3，室温静置30min， 加入10 μ L底物溶液（12. 5mmol .L 1ATCH或BTCH)。37°C孵育30min后，用酶标仪在405nm 下测定其吸光度值。 样品本底对照孔：用5 μ L PBS代替5 μ L酶液，其它条件不变。 阴性对照孔：用20 μ L PBS代替20 μ L待测样品溶液，其它条件不变。 阳性对照孔：用20 μ L BW284c51或iso-OMPA (2mmol .L 3代替20 μ L待测样品溶 液，其它条件不变。实验结果如表1和表2所示。 表1不同提取物对福寿螺AChE活性的抑制效果 阳性对照组（0· Immol · L 4^28^51)抑制率：90· 21 ±5. 89% 表1中，薇甘菊+南美蟛蜞菊的复配中，薇甘菊与南美蟛蜞菊的质量比为1 : 1，且 对于该复配物，其中的浓度为二者的总浓度。 表2不同提取物对福寿螺BChE活性的抑制效果 阳性对照组（0· Immol · L Hso-OMPA)抑制率：92· 67±7. 66% 表2中，薇甘菊+南美蟛蜞菊的复配中，薇甘菊与南美蟛蜞菊的质量比为1 : 1，且 对于该复配物，其中的浓度为二者的总浓度。 酶活性分析结果显示薇甘菊和五爪金龙的乙醇提取物对福寿螺AChE活性均具 有较强的抑制作用，而薇甘菊与南美蟛蜞菊的复配能产生更优的复配效果（表1)。不同 植物提取物对福寿螺AChE的抑制强度不同，五爪金龙和薇甘菊比南美蟛蜞菊的抑制作用 较强。同种植物不同部位的乙醇提取物对福寿螺AChE的抑制强度也不同，薇甘菊和南美 蟛蜞菊的叶提取物均比茎提取物的抑制作用强，五爪金龙的茎提取物的抑制作用则比叶 提取物强；在供试质量浓度为0. lmg/ml时，五爪金龙的茎和薇甘菊的叶提取物对福寿螺 AChE的抑制作用最强，抑制率分别为78. 96±3. 32%和77. 83±4. 27%本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种福寿螺胆碱酯酶抑制剂的制备方法，其特征在于：以薇甘菊的叶、五爪金龙的茎，或薇甘菊与南美蟛蜞菊的叶为原料，以乙醇水溶液为溶剂利用超声波提取工艺得到。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邹湘辉，谢东，吴丽娜，查广才，孙延杰，
申请(专利权)人：韩山师范学院，
类型：发明
国别省市：广东;44