利用大豆制品发酵生产大豆肽液体食品及益菌片的方法，属于食用纳豆杆菌发酵大豆制品，生产大豆肽液体食品及益菌片的方法。本发明专利技术解决了菌种安全差、目前益生菌发酵能力低及培养基成本高等问题。它以能产纳豆激酶的纳豆杆菌为菌种，以大豆豆粉、大豆豆饼、大豆豆粕或大豆豆浆为培养基，经发酵、分离后，加入辅料，制成含有纳豆激酶的保健型大豆肽、低聚肽、短肽混合物的液体食品和富含纳豆杆菌及大豆纤维蛋白的益菌片。本发明专利技术提供了一种营养丰富、风味独特的保健食品。它可广泛地用于医药、食品、饲料添加剂等诸多领域；并且制备工艺简单、周期短、成本低、适合工业化生产，为蛋白肽工业发展提供有效途径；具有较大的经济效益和社会效益。
【技术实现步骤摘要】
利用大豆制品发酵生产大豆肽液体食品及益菌片的方法
本专利技术属于利用大豆制品发酵生产大豆肽液体食品及益菌片的方法，特别涉及一种采用纳豆杆菌为菌种，以大豆豆粉、大豆豆饼、大豆豆粕或大豆豆浆为培养基，发酵生产大豆肽液体食品及益菌片的制作方法。技术背景：大豆肽液体食品及纳豆杆菌益菌片是新兴的优质保健食品。大豆肽的蛋白质含量为85％左右，其氨基酸组成几乎完全与大豆蛋白质相同。但与大豆蛋白相比，大豆肽具有更好的理化性质如易消化吸收、低抗原性、增强人体免疫能力等，且含有某些生理活性物质在机体内有多种生理功能。大豆蛋白活性肽等于将部分人体完成困难的消化过程拿到体外进行，是新兴的营养保健源，国际上对大豆肽的研究始于70年代，其中美国和日本都处在发展大豆肽生产和利用的前列。我国近几年研究逐步活跃起来，大豆肽生产得到迅猛发展。目前，大豆肽常用酶解的方法来制备。但酶解选择性较强，水解率偏低，水解物存在苦味，不易被人接受，且不具有纤溶活性。益生菌片是应用有益菌，将其培养增殖、浓缩干燥制成菌剂。合格的益生菌应具有以下两个特点，即含有活的微生物以及能通过口腔、胃肠道内发挥作用而改善宿主健康。对菌种基本要求是高安全性，无毒，无致残，无致病，无耐药性、无药残等副作用；必须是活的有益菌，在培养中及生物体内易增殖，加工处理后尚有高存活率；对酸、碱、胆汁有耐受性，可避免防霉剂、抗氧化剂和饲料加工过程以及动物肠道内胃酸、胆汁的影响；在肠道中定植能力好，生长速度快；能产生乳酸或其它抗菌活性物质。目前益菌片往往存在着生产菌种未经过严格的病理和毒理试验，长期使用有耐药性、“三致”等毒副作用；有些有益菌在培养中及生物体内不易增殖，加工处理后存活率低，质量得不到保证。目前，大豆肽的生产方法主要有：微生物发酵法、酶解法、化学方法三种，其中以微生物发酵法最为先进，它可以在生产肽的同时修饰肽的苦味因子，同时，微生物将原料中的抗营养因子(如KTI和BBI)降解，有效消除这两种影响消化和口味的成分。但也存在一些问题，如所采用的菌种产酶种类少且酶活力低，发酵能力差，生产力水平低，只能采用较精细原料进行发酵，而且发酵产物未得到综合利用，只利用发酵液中一部分，造成产品价格高。综上所述，发酵能力低及生产成本高是影响发酵法生产大豆肽及推广应用关键。为此，研究和开发一种经济实用-->的生产方法是当务之急。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术解决了菌种安全差、发酵能力低及所用原料造价成本高问题，提供了利用纳豆杆菌为菌种，以大豆制品为培养基生产大豆肽液体食品和纳豆杆菌益菌片，并使所得到的益菌片安全性好、活菌数高，肽液体食品具有纤溶活性。技术方案：发酵生产大豆肽液体食品及益菌片的方法，其特征是采用纳豆杆菌(Bacillus natto，中国工业微生物菌种保藏中心AS 1.107)为生产菌株，发酵培养基主要以大豆豆粉、大豆豆粕、大豆饼粉或大豆豆浆为原料，经过种子培养，发酵培养，离心或过滤，干燥工艺，得到具有大豆肽液体食品和固体纳豆杆菌益菌片，具体步骤如下：(一)制备发酵液·菌种的制备纳豆杆菌在琼脂斜面上35-37℃培养18-24小时后，4℃冰箱保存待用。斜面培养基灭菌条件110-125℃，15-20分钟；其中斜面培养基为：牛肉膏 5.0-10.0g 蛋白胨 10.0-20.0g 氯化钠 5.0-10.0g 琼脂 18.0-20.0g 水 1000ml pH 7.0-7.2·种子培养将在斜面培养基培养好的菌种接一环加入到种子培养基中，种子培养基灭菌条件110-125℃，15-20分钟；在摇床上200rpm转速下，35-37℃振荡培养20-28小时后，即可得到适合接种的种子培养物。其中种子培养基为：蛋白胨 10.0-15.0g 葡萄糖 20.0-30.0g K2HPO4 1.0-1.5g MgSO4 0.5-0.75g 水 1000ml pH 7.0-7.2·发酵培养将上述种子培养物以2％-5％(体积比，ml/ml)的接种量接种于经灭菌处-->理的新鲜发酵培养基，30-40℃培养60-72小时进行深层液体发酵。在发酵过程中，应控制pH值在6.0-8.0；发酵期间pH的调节，视发酵液pH的具体情况，并根据发酵需要，通过流加酸或碱溶液实现。溶氧通过控制通风量调节，溶氧应控制在20-40％。发酵结束时检查芽孢生成率，要求芽孢生成率达70％以上。需要说明的是：调节pH值方法是初始pH的调节可以通过添加浓度为1.0-2.5％磷酸缓冲液实现。发酵期间pH的调节，所用酸液如磷酸溶液，所用碱液如氨水或尿素。当发酵至48小时可将pH调至6.0-6.3或7.7-8.0刺激芽孢产生。当发酵至48小时后，可降低溶氧，控制溶氧在20-30％以便刺激芽孢的产生。当发酵48小时后，可降低温度刺激芽孢产生，将温度控制在25-32℃，不仅可促进芽孢产生，还有利于保持纳豆激酶的稳定性，使其不被降解。当发酵培养基采用大豆饼粉为原料时，其配方是：大豆饼粉20-80g、葡萄糖20-40g、MgSO4 0.5-1.0g、Na2HPO4 6.0-12.0g、NaH2PO4 1.0-2.0g、CaCl2 0.2-0.4g、1000ml水pH7.0-7.2。当发酵培养基采用大豆豆粉为原料时，其配方是：大豆豆粉20-80g、葡萄糖20-40g、MgSO4 0.5-1.0g、Na2HPO4 6.0-12.0g、NaH2PO4 1.0-2.0g、CaCl2 0.2-0.4g、1000ml水、pH7.0-7.2。当发酵培养基采用大豆豆粕为原料时，其配方是：大豆豆粕20-80g、葡萄糖20-40g、MgSO4 0.5-1.0g、Na2HPO4 6.0-12.0g、NaH2PO4 1.0-2.0g、CaCl2 0.2-0.4g、1000ml水、pH7.0-7.2。当发酵培养基采用大豆豆浆为原料时，其配方是：大豆豆浆125-250ml、葡萄糖20-40g、MgSO4 0.5-1.0g、Na2HPO4 6.0-12.0g、NaH2PO4 1.0-2.0g、CaCl2 0.2-0.4g、用水补足到1000ml、pH7.0-7.2。上述大豆饼粉、大豆豆粉、大豆豆粕必须磨细，过80-120目筛待用，发酵培养基采取115-125℃，15-25分钟灭菌。(二)制备大豆肽液体食品和益菌片·固液分离发酵结束后，经无菌试验确定无污染杂菌后，采用了冷冻离心法、膜过滤法或离心过滤法中一种或两种联合使用进行固液分离。采用膜过滤法分离固液时，尽量减少发酵液中悬浮物透过膜。采用重力离心处理时，检测离心上清液活菌数，选择转速应大于5000r/min，使发酵液中悬浮物离心下来，离心过滤法处理时，可将离心和过滤结合起来，在离心过程本文档来自技高网...
【技术保护点】
利用大豆制品发酵生产大豆肽液体食品及益菌片的方法，其特征是采用纳豆杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｎａｔｔｏ，ＡＳ１．１０７）为生产菌株，发酵培养基主要以大豆豆粉、大豆豆粕、大豆饼粉或大豆豆浆为原料，经过种子培养，发酵培养，离心或过滤，干燥工 艺，得到具有大豆肽液体食品和固体益菌片，具体步骤如下：（一）制备发酵液.菌种的制备将纳豆杆菌在琼脂斜面上３５－３７℃培养１８－２４小时后，４℃冰箱保存待用，斜面培养基灭菌条件１１０－１２５℃，１５－２０分钟； .种子培养将在斜面培养基培养好的菌种接一环加入到种子培养基中，种子培养基灭菌条件１１０－１２５℃，１５－２０分钟；在摇床上２００ｒｐｍ转速下，３５－３７℃振荡培养２０－２８小时后，即可得到适合接种的种子培养物；.发酵培养 将上述种子培养物以２－５％（体积比，ｍｌ／ｍｌ）的接种量接种于经灭菌处理的新鲜发酵培养基，３０－４０℃培养６０－７２小时进行深层液体发酵；在发酵过程中，应控制ｐＨ值在６．０－８．０；发酵期间ｐＨ的调节，视发酵液ｐＨ的具体情况，并根据发酵 需要，通过流加酸或碱溶液实现；溶氧通过控制通风量调节，溶氧应控制在２０－４０％； 发酵结束时检查芽孢生成率，要求芽孢生成率达７０％以上；（二）制备大豆肽液体食品和益菌片.固液分离发酵结束后，经无菌试验确定无污 染杂菌后，采用了冷冻离心法、膜过滤法或离心过滤法中一种或两种联合使用进行固液分离，采用膜过滤法分离固液时，尽量减少发酵液中悬浮物透过膜，采用重力离心处理时，检测离心上清液活菌数，选择转速应大于５０００ｒ／ｍｉｎ，使发酵液中悬浮物离心下来，离心过滤法处理时，可将离心和过滤结合起来，在离心过程中同时完成过滤；.制备大豆肽液体食品澄清上清液，用纤维蛋白平板法测定液体中纳豆激酶酶活力，要求纳豆激酶含量达到１００－５００Ｕ／ｍｌ，大豆肽氨基酸含量为２０－１２０ｇ／Ｌ重量 ，检验合格后，添加少量食品添加剂调配成大豆肽液体食品；（３）制备益菌片将分离得到菌泥进行活菌计数，采用冷冻真空干燥、流化床干燥、喷雾干燥或真空干燥进行干燥，干燥后再次进行活菌计数，要求活菌损失不大于８０－８５％，加入赋形剂， 充分搅拌后即可得纳豆杆菌益菌片。...
【技术特征摘要】
1.利用大豆制品发酵生产大豆肽液体食品及益菌片的方法，其特征是采用纳豆杆菌(Bacillus natto，AS 1.107)为生产菌株，发酵培养基主要以大豆豆粉、大豆豆粕、大豆饼粉或大豆豆浆为原料，经过种子培养，发酵培养，离心或过滤，干燥工艺，得到具有大豆肽液体食品和固体益菌片，具体步骤如下：(一)制备发酵液·菌种的制备将纳豆杆菌在琼脂斜面上35-37℃培养18-24小时后，4℃冰箱保存待用，斜面培养基灭菌条件110-125℃，15-20分钟；·种子培养将在斜面培养基培养好的菌种接一环加入到种子培养基中，种子培养基灭菌条件110-125℃，15-20分钟；在摇床上200rpm转速下，35-37℃振荡培养20-28小时后，即可得到适合接种的种子培养物；·发酵培养将上述种子培养物以2-5％(体积比，ml/ml)的接种量接种于经灭菌处理的新鲜发酵培养基，30-40℃培养60-72小时进行深层液体发酵；在发酵过程中，应控制pH值在6.0-8.0；发酵期间pH的调节，视发酵液pH的具体情况，并根据发酵需要，通过流加酸或碱溶液实现；溶氧通过控制通风量调节，溶氧应控制在20-40％；发酵结束时检查芽孢生成率，要求芽孢生成率达70％以上；(二)制备大豆肽液体食品和益菌片·固液分离发酵结束后，经无菌试验确定无污染杂菌后，采用了冷冻离心法、膜过滤法或离心过滤法中一种或两种联合使用进行固液分离，采用膜过滤法分离固液时，尽量减少发酵液中悬浮物透过膜，采用重力离心处理时，检测离心上清液活菌数，选择转速应大于5000r/min，使发酵液中悬浮物离心下来，离心过滤法处理时，可将离心和过滤结合起来，在离心过程中同时完成过滤；·制备大豆肽液体食品澄清上清液，用纤维蛋白平板法测定液体中纳豆激酶酶活力，要求纳豆激酶含量达到100-500U/ml，大豆肽氨基酸含量为20-120g/L重量，检验合格后，添加少量食品添加剂调配成大豆肽液体食品；(3)制备益菌片将分离得到菌泥进行活菌计数，采用冷冻真空干燥、流化床干燥、喷雾干燥或真空干燥进行干燥，干燥后再次进行活菌计数，要求活菌损失不大于80-85％，加入赋形剂，充分搅拌后即可得纳豆杆菌益...
【专利技术属性】
技术研发人员：路福平，杜连祥，王敏，王萍，王春霞，朱建辉，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]
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