本发明专利技术公开了一种七肽及其应用。所述合成多肽的氨基酸序列如下所示：Glu-Tyr-Phe-Asp-Ala-Leu-Ala，缩写为EYFDALA，分子量826.2，纯度达到95%以上。本发明专利技术的多肽使用多肽合成仪，采用固相合成法合成，高效液相色谱进行纯化，真空冷冻干燥所得。本发明专利技术的目的是公开一种具有体外抗氧化活性、保护红细胞溶血以及促进人皮肤成纤维细胞的增殖和胶原蛋白产生的多肽的合成方法及其应用实例，为其在生物制药与化妆品等领域的应用提供依据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及生物制药与化妆品等领域，具体设及一种合成屯肤及其应用。
技术介绍
自二十世纪中叶W来，随着人们生活水平的提高W及细胞生物学、分子生物学等 学科的飞速发展，科学家们对于衰老机制的探索取得了长足的进步，其中广泛研究的理论 有自由基-氧化应激学说，炎性学说，免疫学说，线粒体DNA学说等，其中，自由基-氧化应 激学说最受重视，并能与其他学说联系起来，起到纽带作用。该学说的发展始于Harman于 1956年提出，他认为自由基才是真正引发的机体老化的罪魅祸首，也是引起机体组织恶性 增生等各种恶性疾病的关键所在。1990年，美国Sohal教授发展了该学说，率先提出了氧化 应激的概念，并在自由基学说的基础上发展形成了 "自由基-氧化应激学说"。具体而言， 正常的机体自身建立并形成一套完善的防御系统W规避自由基的损伤和破坏，如细胞内存 在的各种抗氧化物酶，如Superoxide Dismutase, SOD ;Glutathione Peroxidase, GSH-Px 等，机体清除氧自由基的能力与其活性的高低直接相关。一旦机体因内因或外因导致自由 基增加过量从而无法及时清除时，由于自由基都带有不成对的单电子，可W攻击体内细胞， 会氧化生物膜不饱和脂肪酸、诱导蛋白质交联变性、甚至损伤细胞核及线粒体DNA或RNA 等，从而损伤细胞和组织，最终导致机体功能的缺失和老化相关疾病的发生。因此，清除体 内过量的自由基在预防某些疾病的过程中具有重要作用。 生物活性肤是具有多种人体代谢和生理调节功能，易消化吸收，是具有促进免疫 调节、抗菌、降血压、抗癌、抗氧化等作用的二肤到复杂的线性、环形结构的不同肤类的总 称，由25个天然氨基酸通过肤键W不同组成和排列方式构成。活性肤安全性极高，是当前 国际食品界最热口的研究课题和极具发展前景的功能因子。现代营养学表明，蛋白质经消 化道酶作用后并不完全W游离氨基酸的形式吸收，大多W低肤的形式吸收，并且低肤比游 离氨基酸具有更高的营养价值和生物效价。 样品清除自由基的能力是评价其抗氧化活性最常见的方法。清除体内过量的自由 基在预防某些疾病的过程中具有重要作用。ABTS，2, 2-联氮-二（3-乙基-苯并嚷挫-6-横 酸）二锭盐，是一种水溶性物质，可被Mn〇2氧化为比较稳定的蓝绿色ABTS自由基，此自由 基在736nm有稳定的最大吸收峰，抗氧化剂能够提供氨原子将自由基还原为无色ABTS， 可根据溶液在736nm处的吸光度变化来评估抗氧化剂清除ABTS+的能力。DPPH(1,1-二 苯基-2-苦阱基）是一种醇溶性物质，在醇溶液中生成W氮原子为中屯、的稳定自由基、并 呈深紫色，该自由基在522皿处有最大吸收峰，加入抗氧化样品后，溶液会稱色，可W通 过其吸光值的变化来检测样品的抗氧化活性。FRAP方法（Ferricre化Cingantioxidant potentialAssay)是测定物质抗氧化能力的一种方法。原理是酸性条件下抗氧化物可W还 原F'erric-tripyridyltriazine(!V^-TPT幻产生蓝色的化2+-了?12,随后在 596nm测定蓝 色的化2^-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。W上=种模型操作简便、快捷、可控性好 得到广泛应用。 阳〇化]构建细胞氧化损伤模型是评价样品是否具有抗氧化能力的常用方法，而红细胞由 于来源丰富、取材方便，是体外生物实验中的常用材料。自由基首先攻击红细胞膜上的脂 质和蛋白质，使细胞膜破损，释放出红细胞中的血红蛋白，称为红细胞溶血。AAPH、&〇2和 Hemin为常用的诱导红细胞溶血的物质。样品清除体系中存在的自由基从而抑制红细胞溶 血。原子力显微镜（AFM)是一种高分辨率的新型成像工具，在生物医学界已被广泛用于细 胞形貌及其超微结构的表征，其原理是通过检测探针扫描样品时所产生的原子间相互作用 力来获得样品形貌结构信息，经计算机软件处理成像。自由基攻击细胞膜使之结构和功能 丧失，发生细胞溶血。运一结论通过用原子力显微镜（AFM)观察对照组、损伤组和保护组红 细胞形貌得到进一步验证。 皮肤老化主要是人的遗传倾向性（也称为年代老化）和人对环境应激的生理反应 (也称为光老化）的结果。光老化是外界环境对皮肤的生物学应答的效果，是可被广泛应 用的老化实验模型。皮肤对光老化的应答通常与正常的水合作用的缺乏、皮肤下垂W及线 条和皱纹外观有关。UVB照射可使成纤维细胞内活性氧（reactiveO巧genspecies,RO巧 堆积，超过了其清除能力，打破氧化与抗氧化平衡，发生氧化应激反应，调节一系列程序化 的细胞反应，甚至调控衰老相关的信号通路，促进细胞衰老的发生。人皮肤成纤维细胞是人 皮肤产胶原蛋白的主要场所，其数量的多少和细胞胶原蛋白的产率与皮肤衰老状态息息相 关。因此，人皮肤成纤维细胞的存活率和胶原蛋白的产率是被广泛认可的评价皮肤衰老状 态的指标。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有体外抗氧化活性、保护红细胞溶血W及促进人皮肤 成纤维细胞的增殖和胶原蛋白产生的合成屯肤，可应用于生物制药与化妆品等领域。 本专利技术WABTS自由基、DPPH自由基清除实验、FRAP实验、APPH诱导的红细胞溶 血实验W及紫外损伤人皮肤成纤维细胞来评价多肤的抗氧化及抗皮肤衰老活性。 本专利技术所述的合成屯肤缩写为EY抑ALA，分子量826. 2。序列为： Glu-Tyr-Phe-Asp-Ala-Leu-Ala。其中， Glu表示英文名称为Glutamicacid,中文名称为谷氨酸的氨基酸的相应残基； Tyr表示英文名称为Tyrosine,中文名称为酪氨酸的氨基酸的相应残基； Phe表示英文名称为地enyIalanine，中文名称为苯丙氨酸的氨基酸的相应残基； Asp表示英文名称为Aspartic acid,中文名称为天冬氨酸的氨基酸的相应残基； Ala表示英文名称为Alanine,中文名称为丙氨酸的氨基酸的相应残基； Leu表示英文名称为Leucine,中文名称为亮氨酸的氨基酸的相应残基。 本专利技术所述的氨基酸序列采用标准Fmoc方案，通过树脂的筛选，合理的多肤合 成方法。将目标多肤的C-端簇基W共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连，然后W运 个氨基酸的氨基作为起点，与另一分子氨基酸的簇基作用形成肤键。不断重复运一过程，即 可W得到目标多肤产物。合成反应完成后，去除保护基，将肤链与树脂分离，即得到目标产 物。多肤合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序从C端向N端合成。 本专利技术将终浓度为1-100嗦/血的合成屯肤与正常人血红细胞混匀，解育，经 AAPH损伤2h后，使得细胞溶血抑制率为58. 12%~89. 51%。用100嗦/mL的本专利技术合成多 肤处理后的与仅用AAPH损伤的红细胞组相比，其形貌比单纯AAPH处理组光滑，有序，呈现 饼状结构，T-SOD活力由2. 5976m甜rot/ml上升到5. 3830m甜rot/ml，结果表明，合成多 肤处理后红细胞的SOD活性有较大提高，可在生物医药与化妆品等制备领域应用。 本专利技术将浓度为1-10帖/血的合成多肤加入人皮肤成纤维细胞培养液中解育，经 中波紫外（UVB)80mJ/cm2损伤本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种七肽，其特征是该合成七肽的氨基酸序列为Glu‑Tyr‑Phe‑Asp‑Ala‑Leu‑Ala。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张学武，曾巧辉，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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