蛹虫草多肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种蛹虫草多肽及其制备方法和应用，属于生物活性多肽技术领域。该蛹虫草多肽的制备方法包括以下步骤：(1)脱脂：取蛹虫草，加入脱脂液，在50‑80℃下加热回流1‑4h进行脱脂处理，随后过滤，滤渣烘干，备用；(2)酶解：分别取上述滤渣，按照每克滤渣8‑25mL的量加入水，调节溶液pH值后，再加入胃蛋白酶或胰蛋白酶或中性蛋白酶，30‑40℃下酶解2‑6h；随后加热酶解液使酶灭活，冷却，过滤，即得。以上述方法制备得到的蛹虫草多肽组份具有抑制蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)的作用，可用于胰岛素抵抗，糖尿病等病症的治疗中；且蛹虫草药食同源，按照上述方法制备的酶解活性多肽从蛹虫草中直接提取，具有毒性低、安全性高、可长期服用的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物活性多肽
，特别是涉及一种蛹虫草多肽及其制备方法和应用。
技术介绍
糖尿病(Diabetesmellitus，DM)是一种以高血糖为特征的慢性代谢性疾病。近年来，社会不断进步，人民生活水平不断提高，糖尿病的发病率也不断升高，糖尿病已经成为严重危害人类生命健康的恶性疾病之一，临床上以高血糖为主要特点。我国目前糖尿病的总体患病率已达9.7％，同期，糖尿病前期的患病率高达15.5％。根据调查结果所做出的推算显示我国总糖尿病患病人数达9千2百万以上，糖尿病前期人数达1亿4千8百万以上。近年来很多研究显示：蛋白酪氨酸磷酸酶1B(ProteinTyrosinePhosphatase-1B，PTP-1B)可能在胰岛素抵抗中发挥了重要的作用。它是胰岛素信号转导中一个十分关键的分子。通过去磷酸化信号分子，从而终止胰岛素信号转导。许多研究也进一步证实PTP1B可以负性调节胰岛素和瘦素的信号转导。近十年来研究发现，PTP与2型糖尿病的胰岛素信号传导、高血脂、肥胖密切相关。PTPs家族还可以分为8个亚族：①酪氨酸特异性PTPs；②双特异性PTPs；③细胞分裂周期蛋白25(cdc25)亚族；④第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)亚族；⑤myotubularins；(PTPs第五亚族)⑥再生肝磷酸酶(PRL)亚族；⑦低分子量PTPs；⑧新发现的cdc14亚族。其中，与胰岛素信号调节紧密相关的是酪氨酸特异性PTPs，它又可以分为受体型和非受体型两类。PTP1B是胞内PTPs的代表，是第一个被鉴定并纯化的哺乳动物PTP，由435个氨基酸残基组成，分子量约50kD。人类的PTP-1B基因全长约74kb，共10个外显子，位于20q13.1-13.2。PTP1B广泛表达于肌肉、心、肝、肾、脑等各种组织中。PTP-1B与胰岛素信号传导过程的关系：胰岛素信号传导首先需要胰岛素与胰岛素受体结合。胰岛素受体是由α2β2亚单位组成的四聚体，α亚单位与胰岛素结合后β亚单位的酪氨酸及胰岛素受体底物发生磷酸化而被激活。磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3-kianse，PI3K)等下游蛋白也被活化，葡萄糖转运蛋白4由细胞内转至细胞膜，最终葡萄糖进入细胞。在上述过程中的磷酸化反应可以被PTP-1B等因子逆转，从而阻止胰岛素信号的传导。因此，PTP-1B是胰岛素信号传导的一个重要负性调节物质。如果PTP-1B结构或活性改变，将改变其对胰岛素信号传导的抑制作用。外周组织胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能受损是2型糖尿病发病机制的两个基本条件，而胰岛素信号传导被抑制又是胰岛素抵抗的重要环节。资料表明，PTP-1B表达升高可引起胰岛素抵抗，从而引发2型糖尿病。PTP-1B的表达水平在糖尿病或发生胰岛素抵抗时明显升高。有关使转基因鼠表达人PTP-1B的研究发现，与对照组相比，实验组鼠肌肉中胰岛素刺激引起的胰岛素受体酪氨酸磷酸化水平降低35％，PI3K活性降低40％～60％，葡萄糖转运所需的蛋白激酶c活性也减弱；表达PTP-1B的小鼠全身葡萄糖清除和肌肉的葡萄糖摄取减少了40％～50％。有研究表明体重指数正常的初诊2型糖尿病较正常对照者存在明显的胰岛素抵抗，而PTP-1B在前者内脏脂肪组织中的表达较后者显著增高，几乎是后者的4倍。可见内脏脂肪组织PTP-1B的表达升高在胰岛素抵抗中也有重要作用。另有研究报道采用PTP-1B反义寡核苷酸处理糖尿病模型小鼠(ob/ob小鼠)，抑制其PTP-1B表达，发现在肝、脂肪和骨骼肌内PTP-1B的表达下调时，ob/ob小鼠血糖恹复正常，与糖代谢有关的各个指标也都趋于正常。以上结果说明，PTP-1B在拮抗胰岛素信号传导中具有重要作用。糖尿病患者体内PTP(尤其是PTP-1B)含量及活性的异常可能存在多方面的原因，基因变异被认为是主要因素。PTP-1B的基因变异与糖尿病有密切关系。有报道，在对653个样本的研究中，先用限速酶AVAI对样本的一种单核苷酸多肽链消化后，再利用外显子PCR放大技术对其编码发现，带有PTP981T/981C基因型的人群患患2型糖尿病的概率大大增加。目前，PTP1B抑制剂很多，但是大多都是人工合成得到的，具有很大的副作用，临床上成药性很差，到目前为止，还没有一个PTP1B抑制剂在临床上进行应用。而中草药具有天然，多效，毒性小等特点。从中药和天然药物中寻找能够抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B的有效成分是迫切需要解决的课题。
技术实现思路
基于此，有必要针对上述问题，提供一种蛹虫草多肽及其制备方法和应用，采用该制备方法得到的蛹虫草多肽，对蛋白酪氨酸磷酸酶1B具有较好的抑制作用，为临床上开发降血糖、防治胰岛素抵抗、糖尿病的药物提供一个新的途径一种蛹虫草多肽的制备方法，包括以下步骤：(1)脱脂：取蛹虫草，加入脱脂液，在50-80℃下加热回流1-4h进行脱脂处理，随后过滤，滤渣烘干，备用；所述脱脂液为体积百分浓度为90-100％的乙醇水溶液、乙酸乙酯、石油醚中的至少一种；(2)酶解：取上述滤渣分别进行以下酶解：胃蛋白酶酶解：按照每克滤渣8-25mL的量加入水，调节溶液pH值为1.0-3.0，再按照每克滤渣50-150活力单位的量加入胃蛋白酶，30-40℃下酶解2-6h；随后加热酶解液使酶灭活，冷却，过滤，得含有胃蛋白酶酶解多肽的滤液，干燥，得胃蛋白酶酶解多肽；和/或胰蛋白酶酶解：按照每克滤渣8-25mL的量加入水，调节溶液pH值为6.5-9.5，再按照每克滤渣600-1800活力单位的量加入胰蛋白酶，30-40℃下酶解2-6h；随后加热酶解液使酶灭活，冷却，过滤，得含有胰蛋白酶酶解多肽的滤液，干燥，得胰蛋白酶酶解多肽；和/或中性蛋白酶酶解：按照每克滤渣8-25mL的量加入水，调节溶液pH值为6-7，再按照每克滤渣750-2250活力单位的量加入中性蛋白酶，30-40℃下酶解2-6h；随后加热酶解液使酶灭活，冷却，过滤，得含有中性蛋白酶酶解多肽的滤液，干燥，得中性蛋白酶酶解多肽；取所述胃蛋白酶酶解多肽、所述胰蛋白酶酶解多肽和所述中性蛋白酶酶解多肽中的至少一种，即为蛹虫草多肽。蛹虫草CordycepsmilitarisL.Link，又名北冬虫夏草、北虫草，属子囊菌门Ascomycota，粪壳菌纲Sordariomycetes，肉座菌目Hypocreales，虫草菌科Cordycipitaceae，虫草属Cordyceps。《新华本草纲要》记载其“性平，味甘，有益肺肾，补精髓，止血化痰”，用于肺结核、老人虚弱和贫血等疾病的治疗。本专利技术人经过长期的实验研究后发现，以上述方法制备得到的蛹虫草多肽组份具有抑制蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)的作用，可用于胰岛素抵抗，糖尿病等病症的治疗中；且蛹虫草药食同源，按照上述方法制备的酶解活性多肽从蛹虫草中直接提取，具有毒性低、安全性高、可长期服用的优点。在其中一个实施例中，所述(2)酶解：胃蛋白酶酶解多肽的制备中，还将胃蛋白酶酶解多肽滤液经截留分子量为25000D-35000D的超滤柱过滤；所述(2)酶解：胰蛋白酶酶解多肽的制备中，还将胰蛋白酶酶解多肽滤液经截留分子量为25000D-35000D的超滤柱过滤；所述(2)酶解本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛹虫草多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)脱脂：取蛹虫草，加入脱脂液，在50‑80℃下加热回流1‑4h进行脱脂处理，随后过滤，滤渣烘干，备用；所述脱脂液为体积百分浓度为90‑100％的乙醇水溶液、乙酸乙酯、石油醚中的至少一种；(2)酶解：取上述滤渣分别进行以下酶解：胃蛋白酶酶解：按照每克滤渣8‑25mL的量加入水，调节溶液pH值为1.0‑3.0，再按照每克滤渣50‑150活力单位的量加入胃蛋白酶，30‑40℃下酶解2‑6h；随后加热酶解液使酶灭活，冷却，过滤，得含有胃蛋白酶酶解多肽的滤液，干燥，得胃蛋白酶酶解多肽；和/或胰蛋白酶酶解：按照每克滤渣8‑25mL的量加入水，调节溶液pH值为6.5‑9.5，再按照每克滤渣600‑1800活力单位的量加入胰蛋白酶，30‑40℃下酶解2‑6h；随后加热酶解液使酶灭活，冷却，过滤，得含有胰蛋白酶酶解多肽的滤液，干燥，得胰蛋白酶酶解多肽；和/或中性蛋白酶酶解：按照每克滤渣8‑25mL的量加入水调节溶液pH值为6‑7，再按照每克滤渣750‑2250活力单位的量加入中性蛋白酶，30‑40℃下酶解2‑6h；随后加热酶解液使酶灭活，冷却，过滤，得含有中性蛋白酶酶解多肽的滤液，干燥，得中性蛋白酶酶解多肽；取所述胃蛋白酶酶解多肽、所述胰蛋白酶酶解多肽和所述中性蛋白酶酶解多肽中的至少一种，即为蛹虫草多肽。...

【技术特征摘要】
1.一种蛹虫草多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)脱脂：取蛹虫草，加入脱脂液，在50-80℃下加热回流1-4h进行脱脂处理，随后过滤，滤渣烘干，备用；所述脱脂液为体积百分浓度为90-100％的乙醇水溶液、乙酸乙酯、石油醚中的至少一种；(2)酶解：取上述滤渣分别进行以下酶解：胃蛋白酶酶解：按照每克滤渣8-25mL的量加入水，调节溶液pH值为1.0-3.0，再按照每克滤渣50-150活力单位的量加入胃蛋白酶，30-40℃下酶解2-6h；随后加热酶解液使酶灭活，冷却，过滤，得含有胃蛋白酶酶解多肽的滤液，干燥，得胃蛋白酶酶解多肽；和/或胰蛋白酶酶解：按照每克滤渣8-25mL的量加入水，调节溶液pH值为6.5-9.5，再按照每克滤渣600-1800活力单位的量加入胰蛋白酶，30-40℃下酶解2-6h；随后加热酶解液使酶灭活，冷却，过滤，得含有胰蛋白酶酶解多肽的滤液，干燥，得胰蛋白酶酶解多肽；和/或中性蛋白酶酶解：按照每克滤渣8-25mL的量加入水调节溶液pH值为6-7，再按照每克滤渣750-2250活力单位的量加入中性蛋白酶，30-40℃下酶解2-6h；随后加热酶解液使酶灭活，冷却，过滤，得含有中性蛋白酶酶解多肽的滤液，干燥，得中性蛋白酶酶解多肽；取所述胃蛋白酶酶解多肽、所述胰蛋白酶酶解多肽和所述中性蛋白酶酶解多肽中的至少一种，即为蛹虫草多肽。2.根据权利要求1所述的蛹虫草多肽的制备方法，其特征在于，所述(2)酶解：胃蛋白酶酶解多肽的制备中，还将胃蛋白酶酶解多肽滤液经截留分子量为25000D-35000D的超滤柱过滤；所述(2)酶解：胰蛋白酶酶解多肽的制备中，还将胰蛋白酶酶解多肽滤液经截留分子量...

【专利技术属性】
技术研发人员：安丽萍，杜培革，苑广信，候志东，王曼力，孙晶波，赵南晰，韩笑，徐广宇，李洪宇，盛瑜，郭笑，杨莹莹，
申请(专利权)人：北华大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22