本发明专利技术公开了一种十三肽及其应用，该合成多肽的氨基酸序列如下所示：Tyr-Gly-Phe-Val-Met-Pro-Arg-Ser-Gly-Leu-Trp-Phe-Arg，缩写为YGFVMPRSGLWFR，分子量1614.9，纯度96.3%。本发明专利技术的多肽使用多肽合成仪，采用固相合成法合成。本发明专利技术提供了一种具有体外抗肿瘤活性、对人正常肝细胞有一定的促进增殖作用的合成多肽，可应用于生物制药领域。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物制药领域，具体涉及一种合成多肽及其应用。
技术介绍
生物活性肽是对机体的功能或状态具有积极作用并最终影响机体健康的特殊蛋 白质片段。相较于蛋白质而言，小分子肽片段的优越性主要体现在：更易被人体吸收利用； 活性高，在较小浓度下即可发挥其特有的生理作用；分子量小，易于修饰和改造，能够通过 人工化学合成等。而相较于单一的氨基酸而言，小分子肽除了具有特殊的生理活性外，在 吸收通道和吸收速度上也具有氨基酸无可比拟的优越性。已有研究证实，人体小肠存在专 门的低聚肽吸收通道，人体摄入的蛋白质经过多种消化酶的水解，主要以低肽的形式被吸 收。许多研究表明，各种来源的生物活性肽具有抗氧化、抗肿瘤、抑菌、降压、降血糖等多种 作用，成为生物医药和保健品开发的热点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有体外抗肿瘤活性的合成多肽即合成十三肽，可应用 于生物制药领域。本专利技术选取五种肿瘤细胞此?-7、11印6-2、36(：-7901、4549和111'-29以及 一种正常肝细胞L-〇2为研究对象，使用MTT法测定合成肽的体外抑制活性。 本专利技术所述的合成多肽缩写为YGFVMPRSGLWFR，分子量1614. 9,序列为：Tyr-Gly-Phe-Val-Met-Pro-Arg-Ser-Gly-Leu-Trp-Phe-Arg。其中， Tyr表示英文名称为Tyrosine，中文名称为酪氨酸的氨基酸的相应残基； Gly表示英文名称为Glycine，中文名称为甘氨酸的氨基酸的相应残基； Phe表示英文名称为phenylalanine，中文名称为苯丙氨酸的氨基酸的相应残基； Val表示英文名称为Valine，中文名称为缬氨酸的氨基酸的相应残基； Met表示英文名称为Methionine，中文名称为甲硫氨酸的氨基酸的相应残基； Pro表示英文名称为proline，中文名称为脯氨酸的氨基酸的相应残基； Arg表示英文名称为arginine，中文名称为精氨酸的氨基酸的相应残基； Ser表示英文名称为serine，中文名称为丝氨酸的氨基酸的相应残基； Gly表示英文名称为Glycine，中文名称为甘氨酸的氨基酸的相应残基； Leu表示英文名称为Leucine，中文名称为亮氨酸的氨基酸的相应残基； Trp表示英文名称为Tryptophan，中文名称为色氨酸的氨基酸的相应残基； Phe表示英文名称为phenylalanine，中文名称为苯丙氨酸的氨基酸的相应残基； Arg表示英文名称为arginine，中文名称为精氨酸的氨基酸的相应残基。 本专利技术所述的氨基酸序列采用标准Fmoc方案，通过树脂的筛选，合理的多肽合 成方法。将目标多肽的C-端羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连，然后以这 个氨基酸的氨基作为起点，与另一分子氨基酸的羧基作用形成肽键。不断重复这一过程，即 可以得到目标多肽产物。合成反应完成后，去除保护基，将肽链与树脂分离，即得到目标产 物。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序从C端向N端合成。 本专利技术将终浓度为30-500Pg/mL的合成多肽与五种肿瘤细胞MCF-7、H印G-2、 SGC-7901、A549和HT-29混匀，孵育48h后，经MTT法检测，对肿瘤细胞抑制率达到 46. 68%~76. 06%。用500Pg/mL的合成多肽处理正常肝细胞后，其L-〇2增殖9%，表明对正 常肝细胞L-〇2无杀伤作用，反而有一定的促进增殖的效果，安全性非常好，为其在生物医 药领域的应用提供参考。 更具体的，将终浓度为30-500Pg/mL的所述十三肽与肿瘤细胞IfepG-2、 SGC-7901、A549 和HT-29 混，孵育 48h后，对四种肿瘤细胞IfepG-2、SGC-7901、A549 和HT-29 的抑制率分别为 17. 57%-71. 79%、20. 75%-51. 55%、22. 17%-76. 06%和 3. 22%-57. 27%。将浓度 为500l^g/mL的所述十三肽与五种肿瘤细胞MCF-7、H印G-2、SGC-7901、A549和HT-29混，孵 育48h后，对A549和H印G-2的体外增殖抑制作用最强，抑制率分别为76. 06%和71. 79% ;其 次为HT-29、SGC-7901和MCF-7,其抑制率分别为57. 27%、51. 55%和46. 68%。所述十三肽对 A549、H印G-2、SGC-7901 和HT-29 的半数抑制浓度IC50 值分别为 104. 05Pg/mL、188. 23吨/ mL、247. 32Pg/mL和 446. 72Pg/mL。 与现有技术相比，本专利技术具有如下优点和技术效果： 本专利技术首次合成了该肽，并且采用MTT方法检测了合成多肽的体外抗肿瘤活性，所述 合成多肽具有很强的肿瘤细胞抑制能力，同时，合成多肽对正常肝细胞无杀伤作用。【附图说明】 图la为合成多肽Tyr-Gly-Phe-Val-Met-Pro-Arg-Ser-Gly-Leu-Trp-Phe-Arg的 HPLC图。 图lb为合成多肽Tyr-Gly-Phe-Val-Met-Pro-Arg-Ser-Gly-Leu-Trp-Phe-Arg的 ESI-MS图，其中横坐标为m/z(质荷比值）、纵坐标为relativeabundance(相对强度）。 图 2 为合成肽Tyr-Gly-Phe-Val-Met-Pro-Arg-Ser-Gly-Leu-Trp-Phe-Arg对 MCF-7、IfepG-2、SGC-7901、A549、HT-29 和L-02 的体外抑制作用（500Pg/mL)。【具体实施方式】 以下结合具体实例对本专利技术作进一步说明，但本专利技术的实施和保护范围不限于 此。对于未特别注明的工艺参数，可参照常规技术进行。 多肽固相合成 选用高分子树脂（中肽生化有限公司），按照氨基酸序列Tyr-Gly-Phe-Val-Met-Pro-Ar g-Ser-Gly-Leu-Trp-Phe-Arg的特征，先将Arg的羧基以共价键的形式与一个树脂相连，然 后Arg的氨基和Phe的羧基缩水反应，处理后，再添加Trp，Phe的氨基和Trp的羧基反应， 依次从右到左添加氨基酸，加好最后一个Tyr氨基酸后，再切除树脂即得到目标多肽。采 用高效液相色谱进行纯化，色谱柱型号为PhenomenexC1S，尺寸4.6*150mm，流动相A:含有 0. 1%三氟乙酸（TFA)的水；流动相B:含有0.09%TFA的溶液（80%乙腈+20%水）；20min 内B相由14.0%上升到24.0%，流速1. 0mL/min，检测波长220nm。液氮速冻，冷冻干燥，得 到最后的产品，要求纯度达到96.3%以上，并经ESI-MS鉴定结构。图la为合成多肽Tyr-G ly-Phe-Val-Met-Pr〇-Arg-Ser-Gly-Leu-Trp-Phe -Arg的HPLC图。图lb为合成多肽yr-Gly-Phe-Val-Met-Pro-Arg-Ser-Gly-Leu-Trp-Phe-Arg的ESI-MS图，其中横坐标为m/z(质荷比值）、纵坐标为relative abundance(相对强度）。 合成多肽的体外抗肿瘤活性 通过MTT比本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种十三肽，其特征是该合成十三肽的氨基酸序列为Tyr‑Gly‑Phe‑Val‑Met‑Pro‑Arg‑Ser‑Gly‑Leu‑Trp‑Phe‑Arg。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张学武，王竹君，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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