建立单克隆间充质干细胞的方法及其应用技术

本发明专利技术提出了建立单克隆间充质干细胞的方法及其应用。分离间充质干细胞的方法，包括：A）利用胶原酶对动物样本进行消化，以便分散所述动物样本中所包含的细胞，以便获得包含干细胞的细胞混合物；B）将编码报告蛋白的核酸分子引入所述细胞混合物的至少一部分细胞中，其中，所述编码报告蛋白的核酸分子与间充质干细胞特异性启动子可操纵地相连，以便在间充质干细胞中表达所述报告蛋白；以及C）利用FACS，分选获得表达所述报告蛋白的间充质干细胞，其中，所述间充质干细胞呈单个细胞的形式。利用该方法能够有效地制备单个细胞形式的间充质干细胞。

【技术实现步骤摘要】
建立单克隆间充质干细胞的方法及其应用
本专利技术涉及生物医学领域。具体的，本专利技术涉及分离干细胞的方法及其用途。更 具体的，本专利技术涉及分离干细胞的方法，利用该方法所得到的干细胞或其衍生物，以及该干 细胞或其衍生物在制备药物中的用途。
技术介绍
间充质干细胞(MSC)最近受到了广泛关注，因为其具有有利于移植的性质，即其具 有多潜能和非免疫原性。已经报道了可以从成人骨髓和胎儿组织分离获得间充质干细胞 (MSC)。从骨髓分离的MSC (BM MSC)已经被报道为在体外具有高增殖潜能的多潜能细胞。 BM MSC能够分化为脂肪细胞（A)、成骨细胞（0)、软骨细胞（C)以及血管平滑肌（V)谱系，但 不能分化成骨骼肌细胞、心肌细胞、造血细胞、肝细胞或神经细胞谱系。这暗示了他们可以 用于众多受损组织的细胞治疗：骨骼、软骨、中枢神经细胞和心肌组织。 首先，从间充质干细胞的体外分离方法上来看，主要有贴壁法，密度梯度离心法， 流式细胞术和免疫磁珠分离法。前两种方法的缺点主要在于细胞纯度较低；后两种方法的 共同缺点在于1)没有真正特异性的细胞表面标记；2)对细胞活性有较本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离间充质干细胞的方法，其特征在于，包括：A）利用胶原酶对动物样本进行消化，以便分散所述动物样本中所包含的细胞，以便获得包含干细胞的细胞混合物；B）将编码报告蛋白的核酸分子引入所述细胞混合物的至少一部分细胞中，其中，所述编码报告蛋白的核酸分子与间充质干细胞特异性启动子可操纵地相连，以便在间充质干细胞中表达所述报告蛋白；以及C）利用FACS，分选获得表达所述报告蛋白的间充质干细胞，其中，所述间充质干细胞呈单个细胞的形式。

【技术特征摘要】
1. 一种分离间充质干细胞的方法，其特征在于，包括： A) 利用胶原酶对动物样本进行消化，以便分散所述动物样本中所包含的细胞，以便获 得包含干细胞的细胞混合物； B) 将编码报告蛋白的核酸分子引入所述细胞混合物的至少一部分细胞中，其中，所述 编码报告蛋白的核酸分子与间充质干细胞特异性启动子可操纵地相连，以便在间充质干细 胞中表达所述报告蛋白；以及 C) 利用FACS，分选获得表达所述报告蛋白的间充质干细胞，其中，所述间充质干细胞呈 单个细胞的形式。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述动物样本为来自选自肝脏组织、脂肪 组织、骨实质、肌肉、脐带血、脐带、胎盘、外周血、胰腺、肺脏、经血和牙髓的至少一种。3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述动物样本为来自胎儿肝脏组织及成 人骨髓。4. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将编码报告蛋白的核酸引入所述细胞混 合物的至少一部分细胞中包括： 利用液体培养基对所述细胞混合物进行培养； 将构建体引入所述培养获得的贴壁细胞中， 其中， 所述构建体包括： 编码报告蛋白的核酸分子；以及 间充质干细胞特异性启动子，所述编码报告蛋白的核酸分子与间充质干细胞特异性启 动子可操纵地相连。5. 根据权利要求4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张文炜，
申请(专利权)人：张文炜，
类型：发明
国别省市：上海;31