一种提取及培养脂肪干细胞的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，是一种提取及培养脂肪干细胞的方法，步骤为：(1)取人脂肪组织，用pH值为7.2-7.4的D-Hank’s平衡盐液反复离心冲洗；(2)将脂肪组织绞碎为1-2mm3小块，加入与所取脂肪组织等体积的消化液进行消化；(3)静置分层：将底层细胞用pH值为7.2-7.4的D-Hank’s平衡盐液反复吹打，清洗干净；清洗下来的液体经筛网过滤，去除未消化组织，离心弃去上清液，获得干细胞；(4)将获得的干细胞按照2-3×104/cm2的密度接种于培养瓶，加入培养液，置于培养箱中进行培养。该方法具有消化速度快，不溶性组织块大幅减少，而且不影响干细胞活性等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种提取及培养脂肪干细胞的方法
本专利技术涉及生物
，特别是一种提取及培养脂肪干细胞的方法。
技术介绍
脂肪干细胞(Adipose-derivedStemCells，ADSCs)，是目前广泛应用于组织工程及再生医学研究领域的一种成体干细胞(CowanCM,.NatBiotechnol，2004.22:560-567)。脂肪干细胞与骨髓间充质干细胞一样具有多向分化潜能，在特定条件下可以向脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞、成肌细胞、成内皮细胞和成神经细胞等多个方向分化。除此之外，脂肪干细胞还具有许多其他类型成体干细胞所不具备的优势，如脂肪组织来源充足、取材方便、获取过程损伤轻微、无伦理学争议，平均每100mL的脂肪组织中可获得约1×106个干细胞，脂肪组织来源的细胞约有2％具有干细胞特征，远高于骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)(约0.02％的细胞具有干细胞特征)。并且脂肪干细胞具有稳定的群体倍增率、自我更新潜能及良好的免疫相容性(StremBM，TrendsBiotechnol，2005.24:1246-1253)，其基因转本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脂肪干细胞的提取及培养方法，其特征在于，该方法步骤为：(1)取人脂肪组织，用pH值为7.2‑7.4的D‑Hank’s平衡盐液反复离心冲洗，离心去除多余的水溶液和血液；(2)将脂肪组织绞碎为1‑2mm3小块，加入与所取脂肪组织等体积的消化液进行消化，放入摇床中，温度为37℃，190rpm，消化时间为30min；加入等体积的含有15％FBS的BME培养基终止消化；(3)静置分层，将底层细胞用pH值为7.2‑7.4的D‑Hank’s平衡盐液反复吹打，清洗干净；清洗下来的液体经100目筛网过滤，去除未消化组织，离心弃去上清液，获得干细胞；(4)将获得的干细胞按照2‑3×104/cm2的密度接种于培...

【技术特征摘要】
1.一种脂肪干细胞的提取及培养方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)取人脂肪组织，用pH值为7.2-7.4的D-Hank’s平衡盐液反复离心冲洗，离心去除多余的水溶液和血液；(2)将脂肪组织绞碎为1-2mm3小块，加入与所取脂肪组织等体积的消化液进行消化，放入摇床中37℃，190rpm消化30min；加入等体积的含有15％FBS的BME培养基终止消化；所述的消化液是浓度分别为0.1％的胰酶-EDTA、0.1％的I型胶原酶和0.2％的IV型胶原酶的D-Hank’s平衡盐溶液；(3)静置分层，将底层细胞用pH值为7.2-7.4的D-Hank’s平衡盐液反复吹打，清洗干净；清洗下来的液体经100目筛网过滤，去除未消化组织，离心弃去上清液，将脂肪干细胞悬浮液和...

【专利技术属性】
技术研发人员：张静莹，
申请(专利权)人：大连大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21