一种用于结核分枝杆菌感染检测、临床治疗疗效跟踪和抗结核疫苗开发的试剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于结核分枝杆菌感染检测、临床治疗疗效跟踪和抗结核疫苗开发的试剂。通过γ-干扰素释放实验和酶联免疫吸附方法，公开了一种新型结核杆菌来源的试剂Rv3006(LPPZ)，包括抗原或多肽及其类似物，所述Rv3006抗原的氨基酸序列从N端到C端如SEQ ID NO：1所示。利用本发明专利技术试剂能较好地检测出活动期结核病人和结核潜伏感染者；并随着结核病患者治疗开展和病情缓解，Rv3006特异性免疫应答水平降低，表明本发明专利技术能较好示踪结核病人的临床治疗情况。因而，本发明专利技术具有较好的临床应用前景；此外，本发明专利技术试剂对小鼠感染结核分枝杆菌标准有毒株H37Rv具有保护作用，因而具有较好的抗结核疫苗的开发前景。

【技术实现步骤摘要】
—种用于结核分枝杆菌感染检测、临床治疗疗效跟踪和抗结核疫苗开发的试剂及其应用
本专利技术属于生物医学检验领域，具体涉及一种用于结核分枝杆菌感染检测、临床治疗疗效跟踪和抗结核疫苗开发的试剂及其应用。
技术介绍
结核病是我国，同时也是全球三大传染性疾病之一，2013年，世界卫生组织(WHO)估测中国结核病总病例约140万人，占全球总病例中的12%，仅次于印度位居全球第二，结核病严重阻碍我国经济和社会发展。现阶段，结核病的诊断、预后和抗结核疫苗开发仍然面临巨大挑战。传统的结核菌素皮试试验(TST)、结核菌痰涂片或结核菌痰培养等诊断方法的特异性或敏感性较低，有待改进。免疫学检测方法是现阶段诊断结核分枝杆菌感染的重要辅助手段之一，其中以抗原特异性Y-干扰素的释放实验(IGRA)为主。现有的商用试剂盒有T-SP0T.TB和QuantiFERON-TB Gold In-Tube (QFT-1T)。其中，T-SP0T.TB 使用的抗原是ESAT-6 和 CFP-10，而QFT-1T使用的抗原是ESAT-6、CFP-10和TB7.7。这些抗原都由结核分枝杆菌特异性的RD区(RegionofDifference)基因编码,能较好地避免接种卡介苗(BCG)的干扰。但是，现有研究表明ESAT-6，CFP-1O和TB7.7主要表达于结核分枝杆菌的早期感染阶段，而且其他非结核分枝杆菌类的M.marinum, M.kansasii, M.szulgai或Μ.gordonae等也表达ESAT-6，CFP-10或TB7.7，所以当患者感染此类细菌时会出现假阳性结果。而且，研究表明我国人群存在较严重的非结核分枝杆菌感染情况，所以T-SP0T.TB和QFT-1T的结核病诊断价值在我国不理想，表现为其诊断的敏感性和特异性均介于80% — 90%之间。同时，特异性免疫学检测在结核病的临床治疗疗效跟踪中的尚未得到广泛应用。研究表明，筛选新的T细胞反应性抗原在结核病的诊断、预后和疫苗开发中具有重要意义。人体感染结核分枝菌后，体内会生成结核分枝杆菌特异性和记忆性T细胞。抗原特异性T细胞不仅在结核病的诊断中具有重要意义，在临床抗结核治疗病程中，随着患者体内结核分枝杆菌荷载量的下降或消失，体内的抗原特异性T细胞大量凋亡而进入收缩期，只保留少数抗原特异性的记忆性T细胞，因而，体外用相同抗原刺激不同治疗阶段的患者T细胞时，分泌细胞因子的细胞数量以及细胞因子的分泌量与治疗前相比都会下降，并与疾病进程相一致，因而具有较好的临床预后价值。同时，与结核分枝杆菌毒性株中特有的RD区抗原相比，BCG表达的抗原安全性更高。因而具有更好的亚单位疫苗或重组疫苗的开发价值。
技术实现思路
本专利技术 要解决的技术问题之一是提供一种新的用于结核分枝杆菌感染检测、临床治疗疗效跟踪和抗结核疫苗开发的试剂。本专利技术要解决的技术问题之二是提供上述试剂的用途。本专利技术的内容之一是提供一种用于结核分枝杆菌感染检测、临床治疗疗效跟踪和抗结核疫苗开发的试剂，包括Rv3006抗原或多肽或其类似物；所述Rv3006抗原的氨基酸序列从N端到C端如下:MWTTRLVRSGLAALCAAVLVSSGCARFNDAQSQPFTTEPELRPQPSSTPPPPPPLPPVPFPKECPAPGVMQGCLESTSGLIMGIDSKTALVAERITGAVEEISISAEPKVKTVIPVDPAGDGGLMDIVLSPTYSQDRLMYAYISTPTDNRVVRVAD⑶IPKDILTGIPKGAAGNTGALIFTSPTTLVVMTGDAGDPALAADPQSLAGKVLRIEQPTTIGQTPPTTALSGIGSGGGLCIDPVDGSLYVADRTPTADRLQRITKNSEVSTVWTWPDKPGVAGCAAMDGTVLVNLINTKLTVAVRLAPSTGAVTGEPDVVRKDTHAHAWALRMSPDGNVWGATVNKTAGDAEKLDDVVFPLFPQGGGFPRNNDDKT,如SEQ ID NO:1 所示；所述多肽为一种氨基酸聚合物，其长度包含但不限于20个氨基酸残基；所述其类似物为与其同源性在75%以上的多肽及经过天然或人工修饰后的氨基酸聚合物。所述多肽为编号LPPZ0-LPPZ35的氨基酸聚合物，其氨基酸顺序从N端到C端列于下:LPPZO:MWTTRLVRSG LAALCAAVLV,如 SEQ ID NO: 2 所示；LPPZl:LAALCAAVLV SSGCARFNDA,如 SEQ ID NO: 3 所示；LPPZ2:SSGCARFNDA QSQPFTTEPE,如 SEQ ID NO: 4 所示；LPPZ3:QSQPFTTEPE LRPQPSSTPP,如 SEQ ID NO: 5 所示；LPPZ4:LRPQP SSTPP PPPPLPPVPF,如 SEQ ID NO: 6 所示；LPPZ5:PPPPLPPVPF PKECPAPGVM,如 SEQ ID NO: 7 所示；LPPZ6:PKECPAPGVM QGCLESTSGL,如 SEQ ID NO: 8 所示；LPPZ7:QGCLESTSGL IMGIDSKTAL,如 SEQ ID NO: 9 所示；LPPZ8:IMGIDSKTAL VAERITGAVE,如 SEQ ID NO: 10 所示；LPPZ9:VAERITGAVE EISISAEPKV,如 SEQ ID NO: 11 所示；LPPZlO:EISISAEPKV KTVIPVDPAG,如 SEQ ID NO: 12 所示；LPPZll:KTVIPVDPAG DGGLMDIVLS,如 SEQ ID NO: 13 所示；LPPZ12:DGGLMDIVLS PTYSQDRLMY,如 SEQ ID NO: 14 所示；LPPZ13:PTYSQDRLMY AYISTPTDNR,如 SEQ ID NO: 15 所示；LPPZ14:AYISTPTDNR WRVAD⑶IP，如 SEQ ID NO: 16 所示；LPPZ15:WRVAD⑶IP KDILTGIPKG,如 SEQ ID NO: 17 所示；LPPZ16:KDILTGIPKG AAGNTGALIF,如 SEQ ID NO: 18 所示。LPPZ17:AAGNTGALIF TSPTTLVVMT,如 SEQ ID NO: 19 所示；LPPZ18:TSPTTLVVMT GDAGDPALAA,如 SEQ ID NO:20 所示；LPPZ19:GDAGDPALAA DPQSLAGKVL,如 SEQ ID NO: 21 所示；LPPZ20:DPQSLAGKVL RIEQPTTIGQ,如 SEQ ID NO: 22 所示；LPPZ21:RIEQPTTIGQ TPPTTALSGI，如 SEQ ID NO: 23 所示；LPPZ22:TPPTTALSGI GSGGGLCIDP,如 SEQ ID NO: 24 所示；LPPZ23:GSGGGLCIDP VDGSLYVADR,如 SEQ ID NO: 25 所示；LPPZ24:VDGSLYVADR TPTADRLQRI，如 SEQ ID NO: 26 所示；LPPZ25:TPTADRLQRI TKN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于结核分枝杆菌感染检测、临床治疗疗效跟踪和抗结核疫苗开发的试剂，包括Rv3006抗原或多肽或其类似物；所述Rv3006抗原的氨基酸序列从N端到C端如下：MWTTRLVRSGLAALCAAVLVSSGCARFNDAQSQPFTTEPELRPQPSSTPPPPPPLPPVPFPKECPAPGVMQGCLESTSGLIMGIDSKTALVAERITGAVEEISISAEPKVKTVIPVDPAGDGGLMDIVLSPTYSQDRLMYAYISTPTDNRVVRVADGDIPKDILTGIPKGAAGNTGALIFTSPTTLVVMTGDAGDPALAADPQSLAGKVLRIEQPTTIGQTPPTTALSGIGSGGGLCIDPVDGSLYVADRTPTADRLQRITKNSEVSTVWTWPDKPGVAGCAAMDGTVLVNLINTKLTVAVRLAPSTGAVTGEPDVVRKDTHAHAWALRMSPDGNVWGATVNKTAGDAEKLDDVVFPLFPQGGGFPRNNDDKT，如SEQ ID NO:1所示；所述多肽为一种氨基酸聚合物，其长度约为20个氨基酸残基；所述其类似物为与其同源性在75％以上的多肽及经过天然或人工修饰后的氨基酸聚合物。...

【技术特征摘要】
1.一种用于结核分枝杆菌感染检测、临床治疗疗效跟踪和抗结核疫苗开发的试剂，包括RV3006抗原或多肽或其类似物；所述RV3006抗原的氨基酸序列从N端到C端如下:MffTTRLVRSGLAALCAAVLVSSGCARFNDAQSQPFTTEPELRPQPSSTPPPPPPLPPVPFPKECPAPGVMQGCLESTSGLIMGIDSKTALVAERITGAVEEISISAEPKVKTVIPVDPAGDGGLMDIVLSPTYSQDRLMYAYISTPTDNRWRVAD⑶IPKDILTGIPKGAAGNTGALIFTSPTTLVVMTGDAGDPALAADPQSLAGKVLRIEQPTTIGQTPPTTALSGIGSGGGLCIDPVDGSLYVADRTPTADRLQRITKNSEVSTVWTWPDKPGVAGCAAMDGTVLVNLINTKLTVAVRLAPSTGAVTGEPDVVRKDTHAHAWALRMSPDGNVWGATVNKTAGDAEKLDDVVFPLFPQGGGFPRNNDDKT，如 SEQID NO:1 所示； 所述多肽为一种氨基酸聚合物，其长度约为20个氨基酸残基；所述其类似物为与其同源性在75%以上的多肽及经过天然或人工修饰后的氨基酸聚合物。2.如权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述多肽为编号LPPZ0-LPPZ35的氨基酸聚合物，其氨基酸顺序从N端到C端列于下:LPPZO:MWTTRLVRSG LAALCAAVLV,如 SEQ ID NO: 2 所示；LPPZl:LAALCAAVLV SSGCARFNDAjn SEQ ID NO:3 所示；LPPZ2:SSGCARFNDA QSQPFTTEPE,如 SEQ ID NO: 4 所示；LPPZ3:QSQPFTTEPE LRPQPSSTPP，如 SEQ ID NO: 5 所示； LPPZ4:LRPQPSSTPP PPPPLPPVPF,如 SEQ ID NO: 6 所示；LPPZ5:PPPPLPPVPF PKECPAPGVM,如 SEQ ID NO: 7 所示；LPPZ6:PKECPAPGVM QGCLESTSGL,如 SEQ ID NO: 8 所示；LPPZ7: QGCLESTSGL MGIDSKTALjn SEQ ID NO: 9 所示；LPPZ8:IMGIDSKTAL VAERITGAVE,如 SEQ ID NO: 10 所示；LPPZ9:VAERITGAVE EISISAEPKV,如 SEQ ID NO: 11 所示；LPPZlO:EISISAEPKV KTVIPVDPAG,如 SEQ ID NO: 12 所示；LPPZll:KTVIPVDPAG DGGLMDIVLS,如 SEQ ID NO: 13 所示；LPPZ12:DGGLMDIVLS PTYSQDRLMY,如 SEQ ID NO: 14 所示；LPPZ13:PTYSQDRLMY AYISTPTDNR,如 SEQ ID NO: 15 所示；LPPZ14:AYISTPTDNR WRVAD⑶IP，如 SEQ ID NO: 16 所示；LPPZ15:VVRVAD⑶IP KDILTGIPKG,如 SEQ ID NO: 17 所示；LPPZ16:KDILTGIPKG AAGNTGALIF,如 SEQ ID NO: 18 所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖洋炯，王颖，沈浩，王慧宇，田兆峰，赖允鑫，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院，
类型：发明
国别省市：上海;31